Kết quả so sánh cho thấy các chất được khai triển tốt ở các hệ dung môi CH2Cl2/n-hexane.
Các giá trị Rr của các vệt chất với hệ dung môi CH2Cl2/n-Hexane (50%) được trình bày trong Bảng 3.1.
Bảng 3.1. Giá trị Rf và màu sắc các vệt chất trên bản mỏng
STT Rf Ce(SO4)2 1 0,05 Xanh đen 2 0,21 Xanh đen 3 0,39 Xanh đen 4 0,63 Xanh đen 5 0,74 Xanh đen 6 0,89 Xanh đen 7 0,95 Xanh đen
Do đó, lựa chọn hệ dung môi CH2Cl2/n-Hexane với độ phân cực tăng dần làm dung môi rửa giải cho cột tổng cặn CH2Cl2 của cây Gai.
3.1.2.2 Quá trình phân lập chất
Giai đoạn 1: Chuẩn bị cột
Cột có đường kính 6 cm, chiều dài 50 cm được rửa sạch, tráng cột bằng acetone, sấy khô, lót dưới đáy một ít bông. Chuẩn bị cột silica gel theo phương pháp nhồi cột ướt:
Cân 250 gam silica gel, ngâm trương nở ngập trong n-hexane khoảng 1h
dùng đũa thủy tinh khuấy liên tục để đuổi hết bọt khí. Rót từ từ hỗn hợp silica gel đã trương nở vào cột, vừa rót vừa vỗ nhẹ cột để đuổi hết bọt khí, để cột ổn định trong thời gian 4 giờ.
Giai đoạn 2: Đưa chất lên cột
28 gam cặn chiết n-hexane lá-thân cây Gai (kí hiệu BNLH) được hòa với CH2Cl2 vừa đủ cho tan hết, rồi đem trộn với 20 gam silica gel, làm bay hơi hết dung môi trên máy quay cất chân không đến khi thu được hỗn hợp bột tơi. Cho từ từ silica gel đã đính cặn vào cột, vừa cho vừa gõ nhẹ để phần silica gel phân bố đều vào cột.