Chương 2 THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. THỰC NGHIỆM
2.2.2.3. Phân lập các hợp chất từ cao EtoAc
•Khảo sát cao EtOAc ( m=360g )
Thực hiện sắc ký cột cao EtOAc ( m=360g ) trên silica gel với hệ dung môi rửa giải là H: EtOAc với độ phân cực tăng dần: 10:1, 5:1, 1:1, 100% EtOAc, EtOAc :MeOH độ phân cực tăng dần 1:1, 1:5, 100% MeOH. Các phân đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 7 phân đoạn, mã hóa thành E1- 7. Kết quả được tóm tắt trong Bảng 1.1
Bảng 1.1 Sắc ký cột cao EtOAc Phân đoạn Tên mã hóa Khối lượng (g) Kết quả Phân đoạn Tên mã hóa Khối lượng (g) Kết quả
SKLM
Ghi chú
1 E1 37,1587 Nhiều vết Không khảo sát 2 E2 49,2187 Nhiều vết Không khảo sát 3 E3 53,4514 Nhiều vết Không khảo sát 4 E4 29,4578 Nhiều vết Không khảo sát
5 E5 49,8209 Rõ vết Khảo sát 6 7 E6 E7 42,9872 53,9607 Nhiều vết Nhiều vết Không khảo sát Không khảo sát
•Khảo sát phân đoạn E5 ( m=49,8209g )
SKC cột silicagel phân đoạn E5 với hệ dung môi Hexane:EA có độ phân cực tăng dần: 5:1, 1:1, EA, sau đó với hệ EA:MeOH có độ phân cực tăng dần 1:1, 1:5, 1;10 và MeOH. Theo dõi quá trình sắc ký bằng sắc ký lớp mỏng, gom các phân đoạn giống nhau thành 6 phân đoạn, ký hiệu E51 – E56. Kết quả quá trình sắc ký được trình bày ở
Bảng 1.2 Sắc ký cột phân đoạn E5 Phân đoạn Tên mã hóa Khối lượng (g) Kết quả
SKLM
Ghi chú
1 E51 17,5107 Nhiều vết Không khảo sát 2 E52 8,4782 Nhiều vết Không khảo sát 3 E53 5,7218 Nhiều vết Không khảo sát
4 E54 6,8797 Rõ vết Khảo sát 5 6 E55 E56 2,5142 1,7218 Không rõ vết Nhiều vết Không khảo sát Không khảo sát
•Khảo sát phân đoạn E54 (m = 6,8797 g)
Tiếp tục khảo sát phân đoạn E54 (m = 6,8797 g) có 2 vết chính màu đen, thực hiện SKC silica gel, hệ dung môi rửa giải H: EtOAc với độ phân cực tăng dần 5:1, 2:1, 1:1, 100% EtOAc, sau đó với hệ EtOAc: MeOH với độ phân cực tăng dần 1:1, 1:5, , 1:10 các đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung thu được 5 phân đoạn (E541- 5). Kết quả quá trình sắc ký được trình bày ở Bảng 1.3
Bảng 1.3 Sắc ký cột phân đoạn E54 Phân đoạn Tên mã hóa Khối lượng (g) Kết quả Phân đoạn Tên mã hóa Khối lượng (g) Kết quả
SKLM
Ghi chú
1 E541 1,359 Nhiều vết Không khảo sát 2 E542 0,216 Nhiều vết Không khảo sát 3 E543 1,143 Nhiều vết Không khảo sát
4 E544 1,739 Rõ vết Khảo sát
5 E545 0,8787 Nhiều vết Không khảo sát
•Khảo sát phân đoạn E544 ( m = 1,739 g )
Thực hiện SKC trên silica gel phân đoạn E554 ( m = 1,739 g), hệ dung môi rửa giải CHCl3: MeOH với độ phân cực tăng dần 50:1, 30:1, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1, 100% MeOH ta gồm được 6 phân đoạn (E5521-4). Sau đó, phân đoạn E5442 có vết chính màu đen được SKC trên silica gel với hệ dung môi rửa giải CHCl3: MeOH với độ phân cực tăng dần 30:1, 20:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 100% MeOH, ta thu được MO7
Bảng 1.4-Kết quả khảo sát tại phân đoạn E544 Phân Phân
đoạn Tên mã hóa KSKLM ết quả
Ghi chú
1 E5441 Nhiều vết Không khảo sát 2 E5442 Nhiều vết Không khảo sát
3 E5443 Rõ vết Khảo sát, thu được MO7 (m=7,4mg)
4 E5444 Nhiều vết Không khảo sát
•Khảo sát phân đoạn E545 ( m = 0,8797 g )
SKC silicagel phân đoạn E545 (nhiều vết nhưng có 1 vết chính màu vàng chanh) với hệ dung môi Hexane:EA với độ phân cực tăng dần: 5:1, 1:1 và 100% EA và EA:MeOH 1:1, 1:5, 1:10. Dựa vào SKLM gom thành 4 phân đoạn ký hiệu E5451 – E5454. Tiếp tục SKC silica gel phân đoạn E5453 (782 mg) với hệ dung môi CHCl3:MeOH với độ phân cực tăng dần 30:1, 20:1, 10:1, 5:1, 100% EA. Thu được 4 phân đoạn ký hiệu E54531 – E54534. Trong phân đoạn E54533 (232 mg) tiếp tục SKC silica gel với hệ dung môi CHCl3:MeOH với độ phân cực tăng dần 20:1, 10:1, 5:1, 100% EA thu được 3 phân đoạn E5453331 – E545333. Trong đó vết chính nằm trong phân đoạn E5453332 (25 mg), sau đó SKC silica gel pha thường với hệ dung môi giải ly CHCl3:MeOH:H2O (10:1:0,1) thu được chất bột màu trắng ký hiệu MO12 (9 mg). Kết quả được tóm tắt trong Bảng 1.5.
Bảng 1.5 -Kết quả khảo sát tại phân đoạn E54533 Phân Phân
đoạn Tên mã hóa KSKLM ết quả
Ghi chú
1 E545331 Nhiều vết Không khảo sát
2 E545332 Rõ vết Khảo sát, thu được MO12 (m=9mg)
3 E545333 Nhiều vết Không khảo sát 4 E545334 Nhiều vết Không khảo sát
2.2.3. Hằng số vật lý và các số liệu phổ nghiệm các hợp chất phân lập được 2.2.3.1. Hợp chất MO7