Theo hình 3.7 cho thấy trọng lƣợng chuột nhắt của cả 3 lô vắc xin BCG khỏe mạnh, lên cân sau 7 ngày theo dõi. Các lô vắc xin BCG 488-10-20; 489- 10-20, 490-10-20 đều đạt yêu cầu về an toàn chung theo tiêu chuẩn WHO/TRS 979, 2013 và DĐVN V, 2017.
Qua 13 chỉ tiêu chất lƣợng đƣợc kiểm tra, cả 3 lô vắc xin BCG 488-10- 20, 489-10-20 và 490-10-20 sản xuất thử nghiệm trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc với độ dày vòng sơn cổ 0,9±0,1mm, lực bẻ 93,30N là phù hợp với dây chuyền công nghệ sản xuất và đạt tiêu chuẩn chất lƣợng đăng ký (Dƣợc điển Việt Nam V, 2017 và WHO TRS 979, 2013).
3.2.2. Giám sát chất lƣợng vắc xin BCG sản xuất tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc
Lô vắc xin BCG 488-10-20 là lô vắc xin đầu tiên chứa trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc không dùng vật liệu tạo vết khứa. Đến tháng 12/2021, IVAC đã sản xuất đƣợc 60 lô vắc xin BCG trên ống có định vị bẻ đƣợc, tƣơng đƣơng 9.600.000 liều. Kết quả kiểm định chất lƣợng tại IVAC và Viện kiểm định quốc gia đạt tiêu chuẩn đăng ký, đủ điều kiện xuất xƣởng.
Chất lƣợng của vắc xin BCG sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc giám sát thông qua theo dõi các chỉ tiêu chất lƣợng trên biểu đồ Shewhat chat có so sánh với số liệu kiểm định của các lô vắc xin BCG sản xuất trƣớc đó (trên ống không có định vị bẻ đƣợc). Kết quả so sánh trên 60 lô vắc xin BCG mỗi loại đƣợc trình bày dƣới đây:
3.2.2.1. Chất lượng về độ sống vắc xin BCG đvs/mg 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 1 3 5
Hình 3.8. Kết quả ộ sống của vắc xin BCG 2 loại ống chứa vắc xin
Theo hình 3.8 độ sống của vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên 2 loại ống có định vị bẻ đƣợc và ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa có kết quả ổn định và nằm trong khoảng TB ± 2SD, độ sống dao động từ 2,5 x106đvs/mg đến 4,5x106 đvs/mg. Kết quả phân tích từ hàm T-test cho thấy P= 0,06. Sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê về độ sống của vắc xin BCG trên 2 loại ống này.
Từ phân tích trên thể hiện quy trình sản xuất vắc xin BCG ổn định. Vắc xin chứa trong ống có định vị bẻ đƣợc so với ống sử dụng vật liệu tạo vết khứa có kết quả độ sống tƣơng đƣơng nhau.
3.2.2.2. Chất lượng về độ ổn định nhiệt vắc xin BCG
Kết quả ổn định nhiệt của 60 lô vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống có định vị bẻ đƣợc và 60 lô vắc xin dùng vật liệu tạo vết khứa, có độ ổn định nhiệt trung bình là 39,55% và 40,30%. Đồng thời kiểm định Pair sample T- test trong SPSS cho kết quả phân tích thống kê P = 0,47 với độ tin cậy 95%. Từ các dữ liệu trên cho thấy sự khác biệt về ổn định nhiệt của 2 loại ống không có ý nghĩa thống kê.
% 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 1 3 5 7
Hình 3.9. Kết quả ổn ịnh nhiệt của 2 loại ống chứa vắc xin
3.2.2.3. Chất lượng độ phân tán vắc xin BCG
Đánh giá kết quả độ phân tán của 60 lô trên ống dùng vật liệu tạo vết khứa (lô 428 đến 487) và 60 lô trên ống có định vị bẻ đƣợc (lô 488 đến lô 547) Kết quả thể hiện trong hình 3.10.
1.600 1.500 1.400 1.300 1.200 1.100 1.000 1 3 5
Hình 3.10. Kết quả ộ phân tán của 2 loại ống chứa vắc xin
Độ phân tán của vắc xin BCG trên ống có định vị bẻ đƣợc và ống dùng vật liệu tạo vết khứa có kết quả tƣơng đƣơng nhau, độ phân tán trung bình của vắc xin BCG trên ống dùng vật liệu tạo khứa là 1,316 và vắc xin BCG trong ống có định vị bẻ đƣợc là 1,336. Tất cả các lô đều ổn định và nằm trong giới hạn TB ± 2SD (từ 1,22 đến 1,43).
3.2.2.4. Chất lượng về độ chân không vắc xin BCG
Vắc xin BCG sau khi phân ống và đông khô sẽ đƣợc hàn kín bằng máy hàn chân không KUMABE ES 1500 (Nhật Bản). Kiểm tra chân không là kiểm tra độ kín của các ống sau khi hàn, trƣớc khi đƣa vào đóng gói và thành phẩm sau khi đóng gói. Độ kín của ống phải đƣợc duy trì đến hết vòng đời của sản phẩm.
Độ chân không vắc xin BCG đƣợc kiểm tra trên tất cả các lô, kết quả đƣợc phân tích trên 60 lô vắc xin đƣợc chứa trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc so với ống dùng vật liệu khứa để bẻ và đƣợc kiểm tra bằng máy Tesla coil (Nhật Bản).
Bảng 3.9. Kết quả kiểm tra chân không vắc xin BCG sau óng gói Loại ống Ống dùng vật liệu tạo vết khứa Ống có định vị bẻ đƣợc
Kết quả kiểm tra chân không tất cả các lô trên 2 loại ống chứa vắc xin đều đạt tiêu chuẩn 100%. Tất cả các ống đƣợc kiểm tra phát ra ánh sáng tím đến trắng
xanh khi kiểm tra bằng máy Tesla coil.
Độ chân không của 2 loại ống có kết quả tƣơng đƣơng nhau.
3.2.2.5. Chất lượng độ ẩm tồn dư vắc xin BCG
% 3 2.8 2.6 2.4 2.2 2 1.8 1 3 5
Theo hình 3.11 ta thấy: độ ẩm của 60 lô vắc xin BCG trên ống 2ml dùng vật liệu tạo vết khứa tƣơng đồng với kết quả của 60 lô vắc xin BCG đông khô trên ống có định vị bẻ đƣợc. Kết quả này ổn định và nằm trong tiêu chuẩn
≤ 3%. Sự khác biệt của độ ẩm tồn dƣ trên 2 loại ống này không có ý nghĩa thống kê với P = 0,168 khi phân tích kiểm định T-test với độ tin cậy 95%.
Kết quả so sánh các chỉ tiêu chất lƣợng của 60 lô vắc xin BCG sản xuất trên ống 2ml có định vị không khác biệt so với 60 lô vắc xin BCG sản xuất trƣớc đó (không có định vị bẻ đƣợc).
3.3. NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN BCG TRONG ỐNG2ML CÓ ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC 2ML CÓ ĐỊNH VỊ BẺ ĐƢỢC
Nghiên cứu tính ổn định của vắc xin để xác định tỉ lệ thay đổi độ sống (công hiệu) đƣợc cho là liên quan đến chất lƣợng của sản phẩm. Tính ổn định của vắc xin BCG đƣợc theo dõi trên 3 lô, mỗi lô tiến hành kiểm tra tại 3 thời điểm 6 tháng , 12 tháng và 18 tháng. Tại mỗi thời điểm, chúng tôi lặp lại mẫu 3 lần trên một lô. Kết quả trung bình tại mỗi thời điểm đƣợc lần lƣợt so sánh với kết quả sau đông khô.
3.3.1. Tính ổn
Bảng 3.10. Độ sống của vắc xin BCG theo thời gian
Thời gian
Sau đông khô
06 tháng
12 tháng
18 tháng
lần lƣợt là: 3,65 x106 đvs/mg, 3,29 x106 đvs/mg và 2,99 x106 đvs/mg, đạt tiêu chuẩn theo DĐVN V, 2017.
Tuy vậy, so với độ sống sau đông khô tất cả các lô vắc xin đều có giảm nhẹ độ sống theo thời gian bảo quản. Tỷ lệ giảm độ sống của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20, 489-10-20 và 490-10-20 đƣợc thể hiện ở hình 3.12.
Hình 3.12. Tỷ lệ giảm ộ sống vắc xin BCG theo thời gian
Kết quả độ sống của vắc xin BCG đến thời điểm 12 tháng cho thấy độ sống vắc xin BCG giảm 9-10%, phù hợp với vắc xin BCG đông khô [37].
Đến thời điểm 18 tháng, độ sống các lô giảm trung bình thấp nhất là 13,43% ở lô 488-10-20 và nhiều nhất ở lô 489-10-20 là 17,0%. Nghiên cứu này cho kết quả tƣơng tự với nghiên cứu tính ổn định vắc xin BCG của tác giả Huỳnh Thị Thanh Xuân ở ống dùng vật liệu tạo vết khứa để bẻ. Độ sống của vắc xin BCG giảm hằng năm khoảng 10% [24;40].
3.3.2. Tính ổn ịnh nhiệt của vắc xin BCG theo thời gian
Tính ổn định nhiệt của 3 lô vắc xin BCG 488-10-20, 489-10-20 và 490- 10-20 tại các thời điểm kiểm tra đƣợc thể hiện ở hình 3.13.
giảm theo thời gian. Lô vắc xin BCG độ ổn định nhiệt trung bình tăng từ 39,28% sau đông khô lên 46,51 % sau 18 tháng. Kết quả cho thấy, độ ổn định nhiệt của vắc xin BCG cao hơn nhiều so với tiêu chuẩn là ≥ 20%.
3.3.3. Tính ổn ịnh v ti u chuẩn ộ ẩm ộ tồn dƣ
Bảng 3.11. Độ ẩm tồn dƣ của vắc xin BCG theo thời gian
Thời gian
Sau đông khô 06 tháng 12 tháng 18 tháng Trung bình
Nghiên cứu cho thấy, độ ẩm tồn dƣ cao làm ảnh hƣởng đến cảm quan và độ ổn định về độ sống cũng giảm mạnh trong quá trình bảo quản (38).
Độ ẩm tồn dƣ của vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc đến 18 tháng có kết quả trung bình là 2,25%, 2,43% và 2,32% tƣơng ứng với lô 488-10-20, 489-10-20 và 490-10-20 và đều đạt tiêu chuẩn ≤ 3% theo dƣợc điển Việt Nam V, 2017. Độ ẩm tồn dƣ sau 18 tháng không có sự thay đổi so với kết quả ban đầu.
3.3.4. Tính ổn ịnh v ti u chuẩn chân không
Đối với vắc xin BCG đƣợc sản xuất trong ống có định vị bẻ đƣợc, phải theo dõi độ ổn định của ống trong suốt vòng đời của sản phẩm, và đƣợc đánh giá độ kín của ống bằng phƣơng pháp kiểm tra chân không.
Thực hiện kiểm tra chân không trên toàn bộ số ống 2ml có định vị bẻ đƣợc của lô vắc xin BCG sau hàn ống tại các thời điểm sau 6 tháng, 12 tháng và 18 tháng bảo quản ở nhiệt độ 2-8oC.
Bảng 3.12. Kết quả kiểm tra chân không theo thời gian
Thời gian
Sau hàn ống (%) Sau 6 tháng (%)
Sau 12 tháng (%) Sau 18 tháng (%)
Bảng 3.12 cho thấy, kết quả kiểm tra chân không của vắc xin BCG sản xuất trên ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc sau 18 tháng bảo quản ở nhiệt độ 2 đến 8oC không phát hiện thêm ống nào không đạt chân không.
Bảng 3.13. Tốc ộ tạo huy n dịch Thời gian Sau hàn ống Sau 6 tháng Sau 12 tháng Sau 18 tháng Tiêu chuẩn (giây)
* Kết quả kiểm tra tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất sau 6,12, 18 tháng bảo quản ở 2 đến 8oC của 3 lô vắc xin BCG đông khô nghiên cứu trên ống 2 ml có định vị bẻ đƣợc ổn định và đạt tiêu chuẩn.
* Kết quả kiểm tra dạng vật lý (cảm quan): tất cả các ống vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc sau 6, 12, 18 tháng đạt tiêu chuẩn: bột trắng, bong, không teo, không chứa tạp chất theo DĐVN V, 2017.
Tóm tắt:
Độ sống vắc xin BCG sau 18 tháng, giảm nhiều nhất là 17% và ít nhất là 13,43% so với thời điểm sau đông khô. Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn xuất xƣởng về độ sống là 1– 6 x 106đvs/mg và cũng tƣơng đồng với kết quả nghiên cứu trƣớc đó ở ống 2ml dùng vật liệu tạo vết khứa.
Tính ổn định nhiệt của vắc xin BCG theo thời gian 18 tháng trung bình là 46,51% so với tiêu chuẩn xuất xƣởng ≥ 20%.
Kết quả nghiên cứu tính ổn định về dạng vật lý, độ ẩm tồn dƣ, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất, tỷ lệ loại bỏ chân không cho thấy gần nhƣ không thay đổi sau 18 tháng bảo quản.
CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. KẾT LUẬN
4.1.1. Đã xác định đƣợc các thông số kỹ thuật cho ống thủy tinh 2 ml có định vị bẻ đƣợc hãng Schott, (theo bản vẽ số: 70000000300/00. Quality Certificate No: 0414/CA-QA/XI/15, mã số: 10000380905) với độ dày vòng sơn cổ 0,9±0,1 và lực bẻ 93,30 Newton. Phù hợp với trang thiết bị hiện có tại cơ sở sản xuất (IVAC).
4.1.2. Sản xuất (3lô) vắc xin BCG đông khô trên ống 2ml định vị bẻ đƣợc đạt chất lƣợng trên tất cả 13 tiêu chuẩn xuất xƣởng phù hợp khuyến cáo của WHO, TRS 979 và tham chiếu tiêu chuẩn DĐVN V, 2017
Phân tích xu hƣớng các chỉ tiêu chất lƣợng vắc xin BCG. Tất cả 60 lô vắc xin (tƣơng đƣơng 9.600.000 liều) sản xuất từ 02/2020 đến 12/2021, trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc có kết quả về độ sống, ổn định nhiệt, mật độ quang, độ ẩm tồn dƣ, cảm quan, an toàn đặc hiệu, chân không, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất … tƣơng đồng với chất lƣợng các lô vắc xin đƣợc sản xuất trên ống 2ml dùng vật liệu tạo vạch khứa cổ ống sản xuất từ 10/2018 đến 01/2020.
4.1.3. Ba lô vắc xin BCG đƣợc sản xuất trên ống 2ml có định vị bẻ đƣợc bảo quản ở điều kiện 2-8oC sau 18 tháng đạt 6 chỉ tiêu đánh giá về độ sống, ổn định nhiệt, độ ẩm tồn dƣ, độ chân không, dạng vật lý và tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất, có chất lƣợng ổn định ở tất cả chỉ tiêu đánh giá. Độ sống giảm 13-17% so với độ sống sau đông khô (giảm theo quy luật).
Tỉ lệ ổn định nhiệt tăng nhẹ, các chỉ tiêu khác: độ ẩm tồn dƣ, tốc độ tạo huyền dịch đồng nhất, tỷ lệ loại bỏ chân không gần nhƣ không thay đổi theo thời gian.
Đã nghi n cứu và sản xuất ƣợc vắc xin BCG tr n ống 2ml có ịnh vị bẻ ƣợc của hãng Shott tại Viện vắc xin và Sinh phẩm y tế.
4.2. KIẾN NGHỊ
Tiếp tục nghiên cứu tính ổn định chất lƣợng của vắc xin BCG trong ống 2ml có định vị bẻ đƣợc cho đến hết hạn dùng ít nhất 3 tháng (hạn dùng dự kiến 36 tháng).
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. World Health Organization, 2020, Global tuberculosis report, pp. 1-208, Available at https://www.who.int/publications/i/item/9789240013131. 2. Raviglione M., Sulis G., 2016, Tuberculosis 2015: Burden, Challenges
and Strategy for Control and Elimination, Infect Dis Rep, 8(2):6570, pp. 33-37.
3. Australian Immunisation Handbook, 2018, Tuberculosis. Canberra, ACT: DoH, Last reviewed: 5 June 2018, Available at
https://immunisationhandbook.health.gov.au/vaccine-preventable- diseases/tuberculosis, accessed 01/11/2021.
4. Abou-Zeid C., Rook G.A., Minnikin D.E., Parlett J.H., Osborn T.W., Grange J.M., 1987, Effect of the method of preparation of Bacillus Calmette-Guérin (BCG) vaccine on the properties of four daughter strains, Journal of applied bacteriology, 63(5), pp. 449-453.
5. Báo cáo của Bộ Y tế, Phòng chống lao giống với tinh thần chống COVID-19 ngày 24/03/2021
6. World health organization, 2006, Temperature sensitivity of vaccines, ap. 1-62, Available at http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/69387/1/ WHO_IVB_06.10_eng.pdf.
7. Whittaker E., Goldblatt D., McIntyre P., Levy O., 2018, Neonatal immunization: rationale, current state, and future prospects, Front Immunol, 9:532, pp. 1-10.
8. World Health Organization, 2018, Global tuberculosis report, pp. 1-231. Available at https://apps.who.int/iris/handle/10665/274453.
9. Cernuschi T., Malvolti S., Nickels E., Friede M., 2018, Vắc xin Bacillus Calmette-Guérin (BCG): Đánh giá toàn cầu về cân bằng cung và cầu,
Vắc xin, 36 (4), pp. 498-506.
10. World Health Organization, 2013, Recommendations to assure the quality, safety and efficacy of BCG vaccines, WHO TRS 979, Annex 3, ap. 139-166.
11. Gheorghiu M., Lagrange P.H., 1983, Viability, heat stability and immunogencity of four vaccines prepared from four BCG strains. Ann. Immunol (Paris), 134C(1), pp. 125-147.
12. Cernuschi T., Malvolti S., Nickels E., Friede M., 2018, Bacillus Calmette-Guérin (BCG) vaccine: A global assessment of demand and supply balance. Vaccine, 36(4), pp. 498-506.
13. Barreto ML, Cunha SS, Pereira SM, Gense B, Hijjar MA, Ichihara YM., 2005, Neonatal BCG protection against tuberculosis lasts for 20 years in Brazil. Int J Tuberc Lung Dis, 9(10), pp. 1171–1173.
14. Nguyễn Thành Tín, 2019, Luận văn thạc sĩ “Xây dựng quy trình sản xuất vắc xin mẫu chuẩn quốc gia BCG”, tr. 5-10
15. Đặng Đức Trạch, Lê Thị Oanh, Ninh Đức Dự, Nguyễn Thị Vinh,1982, Vi sinh vật học, Nhà xuất bản y học, Hà Nội, tập II, tr. 129-135.
16. Phạm Văn Hùng, 2005, Luận văn thạc sĩ “Nghiên cứu tính ổn định của vắc xin BCG mẫu chuẩn Quốc gia Việt Nam lần thứ nhất”, tr. 3-7.
17. Leung A.S., Tran V., Wu Z., Yu X., Alexander D.C., Gao G.F., Zhu B., Liu J., 2008, Novel genome polymorphisms in BCG vaccine strains and impact on efficacy, BMC Genomics, 9:413, pp. 1-12.
18. Brosch R., Gordon S.V., Garnier T., Eiglmeier K., Frigui W., Valenti P., Dos Santos S., Duthoy S., Lacroix C., Garcia-Pelayo C., Inwald J.K., Golby P., Garcia J.N., Hewinson R.G., Behr M.A., Quail M.A., Churcher