- Phản ứng vũng hoỏ:
2.2. Phương phỏp nghiờn cứu
2.2.1. Phương phỏp xỏc định DE (Dextrose Equivalent)
Xỏc định DE theo phương phỏp axit dinitrosalicylic của Miller [4].
DE (Dextrose Equivalent) là lượng đường khử (qui ra glucoza) so với
chất khụ. Trong quỏ trỡnh thuỷ phõn, giỏ trị DE cho biết mức độ thuỷ phõn tạo
thành đường khử.
* Cơ sở phương phỏp
Phương phỏp dựa trờn cơ sở là phản ứng tạo màu giữa đường khử với
lệ thuận với nồng độ đường khử trong một phạm vi nhất định. Dựa trờn đồ thị
đường chuẩn của glucoza tinh khiết với thuốc thử axit dinitrosalicylic sẽ tớnh
được hàm lượng đường khử của mẫu nghiờn cứu.
* Hoỏ chất
- Thuốc thử DNS
Hỗn hợp: + DNS (2- Hydroxy- 2, 5- dinitrobenzoic axit- C7H4N2O7) 5g. + Nước cất 300ml. Khuấy ở 50°C cho hoà tan hoàn toàn. Sau đú cho thờm 50 ml dung dịch
NaOH 4N. Cuối cựng thờm 150g muỗi Tartrat kộp (KNaC4H4O6 . 4H2O), hoà tan rồi cho vào bỡnh định mức 500ml. Thờm nước cất đến vạch định mức. Bảo quản trong lọ thuỷ tinh nỳt kớn màu nõu. Nếu 1-2 ngày sau thấy xuất hiện kết tủa, phải lọc bỏ kết tủa. Chuẩn 3ml thuốc thử DNS bằng HCl 0,1N với 5- 6ml chỉ thị phenolphtalein. Nếu cần, thờm NaOH.
- Glucoza tinh khiết (>99%).
* Tiến hành
- Dựng đồ thị chuẩn glucoza
+ Pha dóy dung dịch glucoza chuẩn cú nồng độ 1, 3, 5, 10, 15, 20, 30, 50 mM.
+ Cho 1ml mỗi dung dịch chuẩn trờn vào ống nghiệm khụ sạch (mỗi nồng độ
2 ống).
+ Thờm vào mỗi ống nghiệm 3ml thuốc thử DNS.
+ Đun sụi mẫu 5 phỳt, làm lạnh đến nhiệt độ phũng.
+ Đo mật độ quang của mẫu ở bước súng 575 nm với đối chứng là nước cất. + Vẽ đường chuẩn glucoza, với trục tung là mật độ quang, trục hoành là nồng độ glucoza.