Ở Việt Nam, hàng năm cĩ tới 650.000 người bị động vật (chủ yếu là chĩ nghi dại) cắn và phải đi tiêm vaccine. Số người tử vong vì bệnh dại từ mức 400-500 người trước năm 1995, từ đầu năm đến tháng 8/2013 chỉ cịn 63 trường hợp (Trần Đình Từ, 2013).
Theo VVSDTTƯ, trong năm 2013, cả nước ghi nhận 90 người tử vong vì bệnh dại, tương đương so với cùng kỳ 2012. Trong đĩ, 98% tử vong đều khơng tiêm vaccine dại sau khi bị chĩ cắn, và chỉ trong 7 tháng đầu năm 2014 cả nước đã ghi nhận 40 ca tử vong do dại.
Trên địa bàn TP. Hồ Chí Minh kết quả khảo sát tỷ lệ chĩ cĩ kháng thể bảo hộ sau khi tiêm phịng vaccine dại từ năm 2002 - 2005 được ghi nhận như sau: Giai đoạn năm 2002 - 2003, khảo sát 318 mẫu với tỷ lệ bảo hộ là 94,65%; giai đoạn năm 2004 - 2005, khảo sát 798 mẫu với tỷ lệ bảo hộ là 94,65% và khi khảo sát vào những tháng mùa mưa cho kết quả bảo hộ với bệnh dại là 91,23% (Nguyễn Đắc Nguyên, 2006).
Phạm Nguyễn Minh Quý (2007), tỷ lệ chĩ cĩ kháng thể bảo hộ là 84,52% với số mẫu khảo sát là 617 mẫu, kết quả quá trình nghiên cứu cho thấy các yếu tố về khu vực lấy mẫu, tuổi và giống chĩ cĩ ảnh hưởng đến khả năng sinh kháng thể: Chĩ được nuơi ở nội thành cĩ khả năng sinh miễn dịch cao nhất, kế đến là ngoại thành và ven nội thành; chĩ ngoại cĩ khả năng bảo hộ cao hơn chĩ nội. Trong khi yếu tố về giới tính khơng ảnh hưởng.
Khi khảo sát 245 mẫu huyết thanh chĩ ở 7 quận, huyện thuộc TP. Hồ Chí Minh cĩ 211 mẫu bảo hộ được với bệnh dại (tỷ lệ 86,12%); giống, giới tính, khu vực, tuổi và thời gian sau khi tiêm phịng được quan tâm đến khi tiến hành nghiên cứu, trong đĩ hai yếu tố giống và giới tính khơng ảnh hưởng đến khả năng sinh kháng thể của chĩ (Lâm Ngọc Quỳnh, 2008).
Theo Nguyễn Thị Thùy Dung (2009), tỷ lệ chĩ cĩ kháng thể bảo hộ sau khi tiêm phịng vaccine dại tại thành phố Hồ Chí Minh là 67,78%; giới tính và loại vaccine khơng ảnh hưởng đến khả năng tạo kháng thể của chĩ; chĩ nội thành cĩ tỷ lệ bảo hộ cao hơn chĩ ngoại thành; chĩ lớn hơn 2 năm tuổi cĩ tỷ lệ bảo hộ cao hơn chĩ nhỏ hơn hai năm
tuổi; giống chĩ nội cĩ tỷ lệ cao hơn giống chĩ ngoại; thời gian sau tiêm càng lâu thì hàm lượng kháng thể càng giảm.
Theo Quách Tuyết Linh (2010), kết quả khảo sát 480 mẫu huyết thanh của chĩ được tiêm phịng dại tại thành phố Cần Thơ nhận thấy cĩ 314 chĩ (65,42%) cĩ kết quả dương tính theo mức ngưỡng tối thiểu của WHO là 0,5 IU/ml. Ở chĩ, tất cả các yếu tố về tuổi, giống, khu vực sống, ngày lấy mẫu đều được đánh giá cĩ liên quan đến khả năng đáp ứng sau tiêm phịng.
Việt Nam là một trong những quốc gia chịu ảnh hưởng của bệnh dại. Nếu như trong những năm 1990, bệnh dại cĩ xu hướng giảm, thì từ năm 2014 trở lại đây, bệnh dại cĩ xu hướng tăng lên, đặc biệt bệnh dại do bị chĩ cắn. Theo báo cáo của Ban phịng chống Dại - Bộ Y tế, số người bị nhiễm virus dại do bị chĩ cắn và bị chết ngày một tăng (trung bình mỗi năm khoảng 100 người chết vì bệnh dại) (Văn Đăng Kỳ, 2014).
Đàn chĩ nuơi ở nước ta cĩ số lượng rất lớn, khoảng 10 triệu con (Tổng cục Thống kê, 2013), đa số chĩ được nuơi thả rơng do đĩ rất khĩ khăn trong việc quản lý tiêm phịng. Ở nước ta, ổ dịch dại chính là ở chĩ và chúng là nguồn phát tán virus bệnh dại trong số hơn 95% các ca bệnh dại gây tử vong ở người (Văn Đăng Kỳ, 2014).
Phan Ngọc Tuyết và ctv., (2018) đã nghiên cứu ở huyện miền núi Minh Hĩa, tỉnh Quảng Bình bằng xét nghiệm ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) đã cho thấy vaccine được chỉ định sử dụng tại địa bàn cĩ chất lượng phù hợp, đã nâng tỷ lệ chĩ mang kháng thể từ 46,25% lên 93,75%, tỷ lệ bảo hộ từ 32,92% lên 75,83%, tương ứng với cường độ miễn dịch từ 3,37 HI lên 13,97 HI, đồng thời cho thấy tỷ lệ chĩ được bảo hộ sau đợt tiêm vaccine dại vụ cuối xuân năm 2017, theo quy định thấp dưới mức cần thiết. Đáp ứng miễn dịch được cảm ứng bởi tiêm vaccine khảo sát khơng phụ thuộc vào địa bàn nuơi và tính biệt của chĩ nhưng mức độ đáp ứng ở nhĩm giống chĩ ngoại và lai ngoại cao hơn nhĩm chĩ giống nội. Cũng từ đàn chĩ đĩ, xét nghiệm virus dại trong nước bọt bằng SSDHI đã cho thấy 3 trong số 154 chĩ chưa tiêm vaccine lần nào (1,9%) từ 240 chĩ ở đợt trước tiêm khảo sát (1,25%), nhưng khơng phát hiện được chĩ mang virus trong số chĩ đã được tiêm vaccine dại ít nhất một lần trong quá khứ, đồng thời, giết hủy chĩ cĩ phản ứng SSDHI dương tính đã dẫn đến sự vắng mặt các cá thể chĩ cĩ nước bọt mang virus dại trong quần thể. Như vậy, tiêm vaccine phịng bệnh dại phối hợp xét nghiệm và giết hủy chĩ mang virus dại cĩ thể là biện pháp hữu hiệu trong việc thanh tốn bệnh dại.
Vũ Hồng Anh (2020) đã nghiên cứu về thực trạng nguy cơ mắc bệnh dại và một số yếu tố liên quan ở người làm nghề giết mổ chĩ tại một số quận huyện Hà nội năm 2016. Kết quả cho thấy nguy cơ phơi nhiễm với virus dại qua tiếp xúc thường xuyên với nguồn lây nhiễm bệnh dại từ chĩ được giết mổ cĩ: 100% số người làm nghề giết mổ chĩ khơng được tiêm vaccine phịng vaccine dại trước phơi nhiễm; cĩ tới 91,4% số người mổ chĩ chuyên nghiệp khơng cĩ kháng thể kháng virus dại ở mức bảo vệ; 73,6% số chĩ
đưa vào giết mổ nhỏ lẻ khơng cĩ kháng thể kháng virus dại và 0,8% chĩ tại lị mổ bị nhiễm virus, phân bố tại 5/6 quận/huyện nghiên cứu và 100% chĩ được đưa vào các lị mổ giết mổ tập trung khơng cĩ kháng thể kháng virus dại, khơng được tiêm phịng vaccine dại.
Theo Báo cáo tổng kết “Chương trình khống chế và tiến tới loại trừ bệnh dại giai đoạn 2017 - 2021” - Tính đến ngày 31/7/2021, tồn bộ 63/63 tỉnh, thành phố đã gửi báo cáo tổng kết Chương trình quốc gia. Đối với tình hình bệnh dại ở động vật, từ năm 2017 đến tháng 8 năm 2021, cĩ 41 tỉnh, thành phố báo cáo phát hiện và xử lý tổng cộng 15.082 con chĩ (chiếm khoảng 0,04% tổng đàn) và 06 con bị, bê, nghi mắc bệnh dại; trung bình mỗi năm xử lý 3.016 con vật, dao động từ 1.294 con (năm 2021) đến 3.979 con (năm 2019). Cĩ 04 tỉnh (Lạng Sơn, Quảng Bình, Quảng Nam và Bình Định) báo cáo xử lý trên 1.000 con chĩ mắc bệnh dại, nghi mắc bệnh dại tại mỗi tỉnh; 05 tỉnh (Sơn La, Tuyên Quang, Thanh Hĩa, Kon Tum và Tây Ninh) khơng báo cáo số liệu xử lý động vật, nhưng mỗi năm cĩ từ 4 - 7 người tử vong vì bệnh dại, nhất là tỉnh Sơn La cĩ tổng cộng 17 người chết vì dại trong các năm 2017 - 2019. Điều này cho thấy cĩ sự quan tâm chỉ đạo, tổ chức thực hiện các biện pháp quản lý đàn chĩ, theo dõi, giám sát, phát hiện và xử lý động vật mắc bệnh, nghi mắc bệnh dại của các cấp chính quyền và các cơ quan chuyên mơn tại nhiều địa phương (41 tỉnh, thành phố). Tuy nhiên, một số địa phương chưa thực sự quan tâm đến nội dung này. Trong giai đoạn từ 2017 đến tháng 8 năm 2021, cả nước cĩ 35 tỉnh, thành phố tổ chức lấy mẫu giám sát, xét nghiệm bệnh dại với tổng cộng 2.068 mẫu được xét nghiệm, trong đĩ cĩ 227 (10,98%) mẫu dương tính với virus dại. Đây là các mẫu bệnh phẩm được lấy từ chĩ nghi mắc bệnh dại nên tỷ lệ dương tính là khá cao. Tại khu vực các tỉnh miền Tây Nam bộ, giai đoạn trước năm 2018 khơng ghi nhận ca bệnh dại trên chĩ. Tuy nhiên, từ năm 2018 cĩ ghi nhận ca bệnh đầu tiên tại tỉnh Cà Mau (tại Thị trấn U Minh, huyện U Minh, tỉnh Cà Mau) và liên tục phát hiện tại tỉnh này hàng năm cho đến nay, đồng thời cĩ chiều hướng xuất hiện lan rộng ra các tỉnh khác trong khu vực như: Bạc Liêu, Kiên Giang, An Giang, Trà Vinh, Sĩc Trăng và Đồng Tháp từ năm 2018 đến nay. Cĩ thể thấy, bệnh xảy ra rải rác tại các địa phương, khơng theo mùa vụ, khơng xảy ra thành dịch diện rộng, chỉ là các ổ dịch đơn lẻ. Đối tượng mắc bệnh chính là chĩ, ngồi ra bị, bê cũng mắc bệnh. Bên cạnh đĩ, tình hình mắc bệnh dại ở người trong giai đoạn từ 2017 đến tháng 8/2021 được ghi nhận như sau: cả nước cĩ 378 người tử vong vì bệnh dại tại 52/63 tỉnh, thành phố; trung bình mỗi năm cĩ 76 người tử vong, giảm 15% so với giai đoạn 2012 – 2016 (438 người tử vong tại 48/63 tỉnh, thành phố, trung bình mỗi năm cĩ 88 người tử vong). Trong đĩ, cĩ 11 (17%) tỉnh, thành phố khơng cĩ người tử vong vì dại trong cả 5 năm (2017 - 2021); 19 (30%) tỉnh, thành phố khơng cĩ người tử vong vì dại trong 04 năm liên tiếp (2018 - 2021); 20 (32%) tỉnh, thành phố khơng cĩ người tử vong vì dại trong 03 năm liên tiếp (2019 - 2021); 23 (37%) tỉnh, thành phố khơng cĩ người tử vong vì dại trong 02 năm liên tiếp gần đây (2020 - 2021). Khi so sánh giai đoạn 2017 - 2021 và giai đoạn 2012 - 2016 cho thấy: Số tỉnh cĩ dịch tương đương giữa hai giai đoạn, tuy nhiên cĩ sự khác biệt lớn về: tổng đàn chĩ nuơi
giảm tới 1,3 lần (trung bình mỗi năm giảm gần 1 triệu con); tỷ lệ % chĩ được tiêm vaccine dại tăng gần 7% (từ 38,5% lên 49,2%); số ca tử vong trên người giảm 64 ca (trung bình giảm 13 ca mỗi năm); tổng số người đi điều trị dự phịng tăng 1,33 lần (trung bình mỗi năm cĩ hơn 113.538 người đi điều trị dự phịng), điều này cho thấy nhận thức về mức độ nguy hiểm của bệnh dại tăng, nên người dân đã chủ động điều trị dự phịng, tuy nhiên cũng cĩ thể do việc số lượng người bị chĩ mèo cắn, cào, liếm phơi nhiễm với bệnh dại gia tăng.
Chương 3: NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu
Nội dung 1: Điều tra tình hình tiêm phịng và bệnh dại ở chĩ và tình hình tiêm phịng bệnh dại trên người từ 2017 đến 2020.
Nội dung 2: Khảo sát nhận thức cộng đồng về bệnh dại.
Nội dung 3: Khảo sát sự hiện diện của kháng thể kháng virus dại trên đàn chĩ, mèo thả rơng và tại điểm giết mổ.
Nội dung 4: Khảo sát đáp ứng miễn dịch trên chĩ sau tiêm phịng vaccine dại và miễn dịch thụ động của chĩ con.
Nội dung 5: Đánh giá khả năng tồn trữ mầm bệnh dại ngồi tự nhiên .
Nội dung 6: Khảo sát mối tương quan di truyền giữa các chủng virus dại thực địa với chủng vaccine đang sử dụng với các chủng virus dại trong khu vực và đề xuất biện pháp phịng chống.
3.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu3.2.1 Thời gian 3.2.1 Thời gian
Đề tài được thực hiện từ tháng 8 năm 2014 đến tháng 6 năm 2021.
3.2.2 Địa điểm
Đề tài được thực hiện tại các các tỉnh Đồng bằng Sơng Cửu Long: An Giang, Bạc Liêu, Cà Mau, TP. Cần Thơ, Đồng Tháp, Hậu Giang, Kiên Giang, Sĩc Trăng, Trà Vinh, Vĩnh Long, Long An, Tiền Giang và Bến Tre.
Các mẫu khảo sát được tiến hành xét nghiệm tại các phịng thí nghiệm: Bộ mơn Thú y, trường Đại học Cần Thơ; Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển, cơng ty Vemedim Cần Thơ; Chi cục Thú y vùng VI thành phố Hồ Chí Minh; Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh.
3.3 Vật liệu nghiên cứu
3.3.1 Mẫu vật dùng trong nghiên cứu
Mẫu dùng để khảo sát đánh giá tỷ lệ bảo hộ, đáp ứng miễn dịch sau tiêm phịng bệnh dại và khả năng tồn trữ mầm bệnh dại ngồi tự nhiên là mẫu máu (huyết thanh) của chĩ, mèo và một số động vật hoang dã (chuột cống, sĩc nhen, dơi).
Hình 3.1: Động vật hoang dã (chuột, sĩc nhen, dơi) được lấy mẫu
Mẫu dùng để khảo sát mối tương quan di truyền giữa các chủng virus dại thực địa với chủng vaccine đang sử dụng (93127FRA (GU992320.1, Pháp) và sadWistar_3_var01 (LN713659, Đức)) và các chủng virus dại trong khu vực ((U0520629 (KM366216.1), V0808656 (KM366221.1) và V0627625 (KM366222.1))
Mẫu não của động vật nghi mắc bệnh dại được lấy như sau: từ thơng tin của tất cả Thú y của các tỉnh ĐBSCL về triệu chứng lâm sàng trên động vật nghi mắc bệnh dại, sau đĩ xin ý kiến lấy mẫu của cơ quan Thú y cĩ thẩm quyền tại địa phương. Tiếp theo con vật được xử lý và lấy đầu sau đĩ bỏ vào 3 lớp ni lon rồi đem trữ trong thùng đá và vận chuyển ngay đến Chi cục Thú y vùng VI ở TP.HCM để chẩn đốn xét nghiệm.
3.3.2 Hĩa chất và sinh phẩm chính sử dụng trong nghiên cứu
Các hĩa chất và sinh phẩm được sử dụng trong nghiên cứu bao gồm: Kháng thể kháng Nucleocapside virus dại gắn huỳnh quang (Bio-Rad cung cấp) (Bảo quản ở 2- 8oC), dung dịch Glycerol buffer (Bảo quản ở 2-8oC), dung dịch đệm phosphate pH 7,4 (PBSx10), glycerine, Evans Blue 1% (Bio-Rad cung cấp) (Bảo quản ở 2-8oC), nước cất, acetone, cồn, crezyl, NaCl, KH2PO4, Tampon (PBS 10X của Bio-rad cung cấp), tiêu bản dương tính, âm tính, bộ kit SERELISA®Rabies Ab Mono Indirect (Pháp), bộ kit chiết xuất QIAamp* Viral RNA Mini Kit (Cat.No 52904), QIAquick ® PCR Purification kit, (hãng Qiagen), Cat. 28104, Kit QIAquick Gel Extraction kit, (hãng Qiagen), cat:28704……
3.3.3 Trang thiết bị, dụng cụ chính sử dụng trong nghiên cứu
Thiết bị: Autoclave, tủ ấm, tủ sấy, tủ lạnh -20oC, tủ ấm 37oC, máy ly tâm, máy Real time PCR, máy ELISA, máy vortex, đèn cực tím, buồng cấy vơ trùng (Biosafety cabinet Class II), máy đo bước sĩng hiệu BIO-TEX (Mỹ) model Epoch, Hệ thống điện di Gelmate 2000 (Toyobo), máy chụp hình gel Chemdoc XRS, máy luân nhiệt Minicycler (MJ Research), máy giải trình tự 3130 genetic analyzer…
Hình 3.3: Máy giải trình tự gen
Hình 3.4: Hệ thống Real time PCR (Viện Pasteur TP. HCM, 2020)
Hình 3.6: Máy ly tâm Hermle
Dụng cụ: Ống nghiệm nút vặn, đĩa Petri, bình tam giác, đèn cồn, lam kháng acetone, Lammel, giấy thấm, kẹp giải phẫu, pen, kéo, tube Eppendorf (Rnase/Dnase free), Micropipette đơn: 0,5 - 10 µl, 2 - 20 µl, 20 - 200 µl, 200 - 1000 µl, đầu tube cĩ
lọc: 10 µl, 20 µl, 200 µl, 1000 µl, Micropipette đa kênh…
3.3.4 Biểu mẫu thu thập thơng tin
Nghiên cứu tiến hành thu thập thơng tin thơng qua các biểu mẫu được thể hiện qua phụ lục, bao gồm:
- Phiếu điều tra tổng đàn chĩ, tỷ lệ tiêm phịng, tỷ lệ chĩ mắc bệnh dại các năm từ 2017 đến 2020 và tình hình tiêm phịng dại trên người do chĩ, mèo cắn (cào);
- Phiếu lấy mẫu máu xét nghiệm kháng thể kháng virus dại; - Phiếu khảo sát cộng đồng về bệnh dại.
3.4 Phương pháp nghiên cứu
3.4.1 Phương pháp điều tra tình hình tiêm phịng và bệnh dại ở chĩ và tìnhhình tiêm phịng bệnh dại trên người từ 2017 đến 2020. hình tiêm phịng bệnh dại trên người từ 2017 đến 2020.
Phương pháp dịch tễ học mơ tả (điều tra hồi cứu, điều tra cắt ngang và phỏng vấn trực tiếp) được tiến hành thơng qua các phiếu điều tra (phụ lục) tại 13 tỉnh/thành ĐBSCL để thu thập các số liệu sau:
- Tổng đàn chĩ từ các năm 2017 - 2020; - Tỷ lệ tiêm phịng dại chĩ 2017 - 2020;
- Tình hình tiêm phịng dại trên người do chĩ, mèo cắn (cào); - Tình hình bệnh dại trên chĩ và người.
Ngồi ra, số liệu cịn được thu thập từ các cơ quan như Chi cục Chăn nuơi và Thú y, Trung tâm y tế dự phịng, Cục thống kê, các bệnh viện và các hộ nuơi chĩ, mèo tại 13
tỉnh/thành ĐBSCL (TP. Cần Thơ, Long An, Tiền Giang, Bến Tre, Kiên Giang, Đồng Tháp, Hậu Giang, Vĩnh Long, Trà Vinh, Sĩc Trăng, Bạc Liêu, An Giang và Cà Mau).
3.4.2 Phương pháp khảo sát nhận thức của cộng đồng về bệnh dại
Để khảo sát nhận thức chủ vật nuơi về bệnh dại, tiến hành lập phiếu khảo sát (phụ lục 2) và thực hiện khảo sát các hộ nuơi trên thực địa để thu thập và thống kê các thơng tin như:
- Hiểu biết bệnh dại là truyền chủ yếu từ chĩ; - Bệnh dại cĩ gây chết người;
- Cần phải tiêm phịng dại cho chĩ, - Tiêm phịng dại đúng lịch cho chĩ; - Gia đình cĩ người bị chĩ cắn;
- Số trẻ em nhỏ hơn 15 tuổi bị chĩ cắn; - Tiêm phịng dại sau khi bị chĩ cắn, …
3.4.3 Khảo sát sự hiện diện của kháng thể kháng virus dại trên đàn chĩ, mèo