Trong đó:
Mẫu 1 2 3 4
Dung dịch H2O Tb(Tyr)3.3H2O Tb3+ Tyr
Nồng độ (ppm) 0 120 120 360
Nhận xét: Từ kết quả ở bảng 2.10, hình 2.13 cho thấy cũng như phức chất, phối tử và ion kim loại có tác dụng ức chế sự phát triển mầm của hạt lạc. Phức chất có tác dụng ức chế kém hơn phối tử và tốt hơn ion kim loại.
2.6.3. Ảnh hưởng của phức chất đến một số chỉ tiêu sinh hóa có trong mầm hạt lạc hạt lạc
- Phương pháp thí nghiệm: Cân mỗi mẫu 3 gam cây giá lạc nghiền bằng
cối chày sứ, thêm vào 50 ml dung dịch đệm photphat có pH = 10. Trộn đều, sau đó để trong tủ lạnh trong 10 giờ ở 4o
C lọc và li tâm, lấy phần dịch trong. Dịch này đem xác định hàm lượng protein, làm tương tự như trên
thay dung dịch đệm photphat có pH = 6,5 để xác định hàm lượng proteaza
và dung dịch đệm photphat có pH = 6 đểxác định hàm lượng α- amilaza có
trong mầm lạc.
- Để xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry, hoạt độ proteaza theo phương pháp Anson cải tiến, chúng tôi tiến hành xây dựng các đường chuẩn:
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
* Xây dựng đường chuẩn xác định protein: Dùng ống hút lấy 0,1 ÷ 0,5 ml dung dịch protein huyết thanh bò (0,5 mg/ml) cho vào 5 ống nghiệm đánh số
từ 1 đến 5. Cho vào mỗi ống 5 ml dung dịch D (gồm 48 ml dung dịch Na2CO3
2% trong NaOH 0,1N, 1 ml dung dịch CuSO4 0,5% và 1ml dung dịch
NaKC4H4O6 1%), thêm nước cất đến cùng thể tích là 9 ml. Lắc đều, để yên
15 phút, bổ sung vào mỗi ống 1 ml dung dịch E (thuốc thử Folin-Ciocalto pha loãng với nước cất tỉ lệ 1:1), lại lắc đều và để yên 30 phút.
Mẫu so sánh không có protein: 5 ml dung dịch D, 4 ml nước và 1 ml dung dịch E. Đo độ hấp thụ quang A của các dung dịch ở bước sóng 750 nm [3]. Kết quả được trình bày ở bảng 2.11, hình 2.14.
Bảng 2.11. Sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào khối lƣợng protein
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng protein
(huyết thanh bò) (mg) 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 A750 0,0601 0,0986 0,1331 0,1821 0,2153 y = 0.7878x + 0.0197 R2 = 0.9968 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 mg protein M ật độ qu ang Hình 2.14. Đƣờng chuẩn xác định protein
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
* Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt độ proteaza: Dùng ống hút lấy
những thể tích xác định dung dịch chuẩn tyrosin 1μmol/ml cho vào các bình định mức cỡ 25 ml. Dùng dung dịch HCl 0,2N pha loãng đến vạch để được các dung dịch tyrosin có nồng độ 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 μmol/ml. Lấy 1 ml ở mỗi ống nghiệm trên cho vào 5 ống nghiệm có đánh số thứ tự,
thêm vào mỗi ống 4 ml dung dịch Na2CO3 6%. Lắc đều, thêm vào 1ml thuốc
thử Folin-Ciocalteu đã pha loãng 5 lần, để yên 30 phút ở nhiệt độ phòng.
Mẫu so sánh không có tyrosin: 1 ml nước cất, 4 ml dung dịch Na2CO3
6% và 1 ml thuốc thử Folin-Ciocalteu.
Đo độ hấp thụ quang của các dung dịch ở bước sóng 750 nm [3]. Kết quả được trình bày ở bảng 2.12, hình 2.15
Bảng 2.12. Sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào nồng độ tyrosin
Mẫu 1 2 3 4 5
Tyrosin (μmol/ml) 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10
A750 0,0454 0,0903 0,1410 0,1772 0,2212
Hình 2.15. Đƣờng chuẩn xác định proteaza
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
* Xây dựng đường chuẩn xác định hoạt độ -amilaza: Dùng ống hút
lấy 2, 4, 6, 8, 10ml dung dịch tinh bột 1% cho vào 5 ống nghiệm đánh số thứ tự từ 1 đến 5, thêm nước cất đến 10ml. Lấy 0,1ml dung dịch tinh bột ở mỗi ống nghiệm trên cho vào 5 ống nghiệm khác, thêm vào đó 0,1ml dung dịch NaCl 0,1%, 0,2ml dung dịch đệm pH=6, 0,1ml nước cất và 0,5ml dung dịch axit sunfosalisilic 20%. Lắc đều và thêm vào 3ml dung dịch iot đã pha loãng 150 lần.
Dung dịch so sánh có thành phần tương tự nhưng không có tinh bột.
Đo độ hấp thụ quang của các dung dịch ở bước sóng 560nm [3]. Kết
quả được trình bày ở bảng 2.13, hình 2.16
Bảng 2.13. Sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào khối lƣợng tinh bột
Mẫu 1 2 3 4 5
Khối lượng tinh bột (mg) 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 A560 0,08 0,19 0,28 0,37 0,48 y = 0.49x - 0.014 R2 = 0.9983 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 mg tinh bột m ật độ qu ang
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.6.3.1. Ảnh hưởng của phức chất đến protein của mầm hạt lạc
Lấy mỗi mẫu 0,2 ml dịch chiết cho vào các ống nghiệm có đánh số, thêm vào mỗi ống nghiệm 5 ml dung dịch D, bổ sung thêm nước cất đến cùng thể tích 9 ml, lắc đều, để yên 15 phút. Sau đó lại thêm vào mỗi ống 1 ml dung dịch E, lắc đều và tiếp tục để yên 30 phút.
Mẫu so sánh không có dịch chiết: 5 ml dung dịch D, 4 ml nước và 1 ml dung dịch E. Đo độ hấp thụ quang của các mẫu thí nghiệm ở bước sóng 750 nm. Đối chiếu với đường chuẩn protein, tính số mg protein có trong mỗi mẫu.
Hàm lượng protein được tính theo công thức :
X= 100%
m HSPL a
Trong đó:
X: Hàm lượng protein (% khối lượng khô) a: Nồng độ thu được khi đo trên máy (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng
m: Khối lượng mẫu (mg).
Kết quả phân tích hàm lượng protein của hạt đậu tương khi tác động phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O (dựa theo công thức và đường chuẩn hình 2.14) được trình bày ở bảng số 2.14.
Bảng 2.14. Ảnh hƣởng của phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O đến hàm lƣợng protein của mầm hạt lạc
Nồng độ phức (ppm) Hàm lượng protein (%) % so với đối chứng
0 23,12 100 30 23,94 103,55 60 24,57 106,27 120 25,46 110,12 180 26,08 112,76 240 26,97 116,65
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Qua bảng 2.14 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O có tác dụng làm tăng hàm lượng protein. Hàm lượng protein tăng theo nồng độ.
2.6.3.2. Ảnh hưởng của phức chất đến hoạt độ proteaza của mầm hạt lạc
Cho vào mỗi ống nghiệm có đánh số thứ tự 2 ml tyrosin, 1 ml dịch chiết của từng mẫu, lắc đều, để yên ở 300
C trong 10 phút. Thêm vào mỗi ống 5 ml axit tricloaxetic 5%, lắc đều, tiếp tục giữ ở 300
C trong 30 phút.
Mẫu kiểm tra làm tương tự như trên nhưng cho dung dịch axit tricloaxetic vào trước. Mẫu so sánh thay 2 ml tyrosin bằng nước cất.
Cho vào các ống nghiệm khác 1 ml dung dịch lọc của mỗi mẫu thí nghiệm, mẫu kiểm tra và mẫu so sánh, thêm vào mỗi ống 4 ml dung dịch
Na2CO3 6% và 1 ml thuốc thử Folin-Ciocalto đã pha loãng 5 lần, lắc đều và
giữ 30 phút ở nhiệt độ phòng.
Đo độ hấp thụ quang của các mẫu thí nghiệm và mẫu kiểm tra ở bước
sóng 750 nm. Lấy hiệu số giá trị độ hấp thụ quang giữa mẫu thí nghiệm và
mẫu kiểm tra. Dựa vào đồ thị chuẩn proteaza tính lượng μmol tyrosin tương ứng. Từ đó tính đơn vị hoạt độ của proteaza.
Hoạt độ proteaza được tính theo công thức: ĐVHĐ/mg = m T HSPL k n ) ( Trong đó:
n: Số đo trên máy mẫu thí nghiệm (mg/ml) k: Số đo trên máy mẫu kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng
T: Thời gian ủ enzim với cơ chất m: Khối lượng mẫu (mg)
Kết quả phân tích hàm lượng proteaza của hạt đậu tương khi tác động phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O (dựa theo công thức và đường chuẩn hình 2.15) được trình bày ở bảng số 2.15.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 2.15. Ảnh hƣởng của phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O đến hàm lƣợng proteaza của mầm hạt lạc Nồng độ phức chất (ppm) Đơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với đối chứng 0 0,465 100 30 0,478 102,80 60 0,496 106,67 120 0,510 109,68 180 0,523 112,47 240 0,551 118,49
Qua bảng 2.15 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm đến 240 ppm, phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O có tác dụng làm tăng hàm lượng proteaza. Hàm lượng proteaza tăng theo nồng độ.
2.6.3.3. Ảnh hưởng của phức chất đến hoạt độ α-amilaza của mầm hạt lạc:
- Cho vào mỗi ống nghiệm có đánh số thứ tự 1ml dung dịch tinh bột 1%,
1ml dung dịch NaCl 0,1%, 2ml dung dịch đệm phốt phát 0,05M ( pH= 10), lắc
đều và giữ ở 30o
C trong 15 phút , thêm vào mỗi hỗn hợp 1ml dung dịch chiết
của từng mẫu, lắc đều và tiếp tục giữ ở 30o
C trong 30 phút sau đó cho 5ml dung dịch axit sunfosalisilic 20%.
- Mẫu so sánh : gồm 1ml dung dịch chiết của mỗi mẫu thí nghiệm, 9ml dung dịch iốt đã pha loãng 150 lần
Đo độ hấp thụ quang A của các dung dịch ở bước sóng 560 nm. Lấy hiệu số giá trị độ hấp thụ quang giữa mẫu kiểm tra và mẫu thí nghiệm. Dựa vào đồ thị chuẩn hoạt độ -amilaza tính được khối lượng tinh bột tương ứng. Từ đó tính đơn vị hoạt độ α-amilaza.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hoạt độ α-amilaza được tính theo công thức:
ĐVHĐ/mg = (k n HSPL)
m
Trong đó:
n: Số đo trên máy mẫu thí nghiệm (mg/ml) k: Số đo trên máy mẫu kiểm tra (mg/ml) HSPL: Hệ số pha loãng
m: Khối lượng mẫu (mg)
Kết quả phân tích hàm lượng α-amilaza của hạt đậu tương khi tác động phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O (dựa theo công thức) được trình bày ở bảng số 2.16.
Bảng 2.16. Ảnh hƣởng của phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O đến hàm lƣợng α-amilaza của mầm hạt lạc Nồng độ phức chất (ppm) Đơn vị hoạt độ (mg/ml) % so với đối chứng 0 0,368 100 30 0,376 102,17 60 0,389 105,70 120 0,407 110,59 180 0,420 114,13 240 0,431 117,12
Qua bảng 2.16 thấy rằng: Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30 ppm
đến 240 ppm, phức chất Tb(Tyr)3 .3H2O có tác dụng làm tăng hàm lượng α-
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
KẾT LUẬN 1.Đã tổng hợp được phức rắn của Ln3+
với L - tyrosin. (Ln3+
: Gd3+, Tb3+, Dy3+)
2. Bằng các phương pháp: phân tích nguyên tố, phân tích nhiệt, đo độ dẫn điện và quang phổ hồng ngoại có thể kết luận:
Các phức rắn có thành phần Ln(Tyr)3.nH2O (n: 3).
Mỗi phân tử L - tyrosin chiếm 2 vị trí phối trí trong phức chất, liên kết
với ion Ln3+
qua nguyên tử nitơ của nhóm amin -NH2 và qua nguyên
tử oxi của nhóm cacboxyl -COO-
.
Phức chất trong đimetyl sunphoxit là chất không điện li.
3. Đã thử hoạt tính kháng khuẩn của phức chất Tb(Tyr)3.3H2O, muối TbCl3, phối tử L - tyrosin đối với 2 loại vi khuẩn Salmonella và E.Coli. Kết quả cho thấy phối tử không có hoạt tính kháng khuẩn, phức chất có hoạt tính kháng khuẩn thấp hơn muối clorua tương ứng.
4 . Bước đầu thăm dò ảnh hưởng của phức Tb(Tyr)3.3H2O đến sự nảy mầm,
phát triển mầm và hàm lượng protein, proteaza , α- amilaza của mầm hạt lạc chúng tôi đi đến kết luận:
+ Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 30÷240 ppm của phức chất
Tb(Tyr)3.3H2O có tác dụng ức chế sự nảy mầm và phát triển mầm của hạt lạc, sự ức chế tăng theo nồng độ. Phức chất có tác dụng ức chế kém hơn phối tử và tốt hơn ion trung tâm.
+ Phức chất làm tăng hàm lượng protein, proteaza và α- amilaza có trong mầm hạt lạc.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt
1. Đàm Anh (2010), Đất hiếm là gì, http:// lao động.com.vn/ tin tức/ Đat- hiem-la-gi/ 19140, ngày 03/11/2010.
2. Phạm Thị Trân Châu, Trần thi Áng, (1999), Hoá sinh học. NXB Giáo dục, Hà Nội.
3. Nguyễn Lân Dũng , Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thanh Hiền, Lê Đình
Lương, Đoàn Xuân Mượu, Phạm Văn Tý (1978), Một số phương pháp
nghiên cứu vi sinh vật học, tập III, NXB KH và KT, Hà Nội.
4.Trần Ích (1978), Hóa sinh học, NXB Giáo dục, Hà Nội, Tr. 12-20.
5. Lê Chí Kiên (2007), Hóa học phức chất, NXB Giáo dục, Hà Nội.
6. Koroxotelev P. P (1974), Chuẩn bị dung dịch cho phân tích hóa học, NXB KH & KT, Hà Nội.
7. Hoàng Nhâm (2001), Hóa học vô cơ tập 3, Nxb Giáo dục.
8. Hồ Viết Quí (2009), Các phương pháp phân tích công cụ trong hóa học
hiện đại, Nxb Đại học Sư pham.
9. Lê Hữu Thiềng (2002), Nghiên cứu sự tạo phức của một số nguyên tố đất
hiếm với axit L - phenylalanin và thăm dò hoạt tính sinh học của chúng, Luận án tiến sĩ Hóa học, Hà Nội.
10. Nguyễn Trọng Uyển (1979), Giáo trình chuyên đề nguyên tố hiếm, Trường Đại học Tổng hợp Hà Nội, Hà Nội.
Tài liệu tiếng Anh
11. http://dictionary.bachkhoatoanthu.gov.vn
12. Greenwood N. N, Earnshaw A (1984), Chemistry of the elements, Pergamon Press, Oxford-New York-Toronto-Sydney-Paris-Frankfurt.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
13. Gschnerdner KA.et al (1989), Handbook on the physics and chemistry of
rare earths, Vol 13, North-Holland, tr. 213-230.
14. Haoxu, Liang Chen (2003), ''Study on the complex site of L - tyrosin with rare - earth element Eu3+'', Spectrochim Acta Part 59, 657 - 662.
15. Iaximitxki KB (1996), Complex of rare earth element, A. N. Uocain, Kiev.
16. Indrasenan P, Lakshmy M (1997), ―Synthesis and infraed spectral studies of some lanthanide complexes with leucine‖, Indian Journal of Chemistry, Vol 36A, pp 998-1000.
17. Moamen S.Refat, Sabry A.El-Korashy, Ahmed S.Ahmed (2008),
''Preparation, structural characterization and biological evaluation of
L - tyrosinate metal ion complex'', Journal of Molecular Structure 881, 28-45.
18. http:// pure bulk.com/L-tyrosine.
19. R. Celia Carubelli, Ana M. G. Massabni and Sergio R. de A.l eite (1997), ''Study of the binding of Eu3+ and Tb3+ to L - phenylalanin and
L - triptophan'', J Brazil. Chem. Soc, Vol8, No6, Brazil, pp 597 - 602.
20. Xie Higuand, Chang, Qing zhong (1985), ― Study on the effect of rare earth elements on yield of wheat‖, New front rare earth, Proc, Int, Conf, Rare Earth Dev, Appl 2, England.