6. Bố cục uận vn
2.2.5. Xác định thành phần hóa học bằng phƣơng pháp quang phổ hấp
hấp thụ phân tử UV – VIS và phƣơng pháp GC/MS
a. P ươn p p qu n p ổ ấp t p n t UV - VIS
tích dựa trên việc đo độ hấp thụ bức xạ đơn sắc của dung dịch nghiên cứu ở các ƣớc s ng xác định trong vùng tử ngoại - khả kiến.
Cơ sở lý thuyết của phƣơng pháp à định luật Lamber - Beer và đƣợc biểu diễn bằng phƣơng trình sau:
A = lg1 T = lgIo I = ɛ.C.L Trong đ : ɛ: Hệ số tắt phân tán T: Hệ số truyền qua
L: Chiều dày lớp dung dịch
Io: Cƣờng độ ánh sáng đơn sắc tới
: Cƣờng độ ánh sáng sau khi truyền qua dung dịch C: Nồng độ của chất tan trong dung dịch
Điều kiện áp dụng định luật Lamber - Beer: - Ánh sáng phải đơn sắc
- Khoảng nồng độ phải thích hợp - Dung dịch phải trong suốt
- Chất thử phải bền trong dung dịch và bền ƣới tác dụng của ánh sáng UV - VIS
* Sơ đồ nguyên lý của máy:
Nguồn sáng → Bộ chọn s ng đơn sắc → Mẫu đo → Detector → Xử lý số liệu
b. P ươn p p GC/M [30]
* Nguyên tắc: Nhờ c kh mang c trong ơm kh , mẫu từ buồng ơm
hơi đƣợc dẫn vào cột tách nằm trong buồng điều nhiệt. Quá trình sắc k đƣợc diễn ra tại đ . Sau khi rời khỏi cột tách tại các thời điểm khác nhau, các cấu tử lần ƣợt đi vào etector, tại đ chúng đƣợc chuyển thành tín hiệu điện. Tín
hiệu nà đƣợc khuếch đại rồi chuyển sang bộ phận ghi. Các tín hiệu đƣợc xử lý ở đ rồi chuyển sang bộ phận in và ƣu kết quả.
* Cấu tạo
Thiết ị đƣợc cấu tạo ởi 2 phần: Phần sắc k kh ( C) ùng để ph n t ch hỗn hợp các chất và tìm ra chất cần ph n t ch, phần phổ khối (MS), m tả các hợp phần ri ng ẻ ằng cách m tả số khối.
Sắc k kh đƣợc ùng để chia tách các hỗn hợp của h a chất ra các phần ri ng ẻ, mỗi phần c một giá trị ri ng iệt. Trong sắc k kh chia tách xuất hiện khi mẫu ơm vào pha động, pha động à một kh trơ. Pha động mang hỗn hợp mẫu đi qua pha tĩnh, pha tĩnh đƣợc sử ụng à h a chất, chất nà c độ nhạ và hấp thụ thành phần hỗn hợp trong mẫu.
Sắc k ghép khối phổ ( C/MS) c thể ph n t ch các hỗn hợp h a chất phức tạp nhƣ kh ng kh , nƣớc... ếu trong mẫu c một chất ạ xuất hiện, khối phổ c thể nhận ạng cấu trúc h a học độc nhất của n (giống nhƣ việc ấ ấu v n ta ). Cấu trúc của chất nà sau đ đƣợc so sánh với một thƣ viện cấu trúc các chất đã iết. ếu kh ng tìm ra đƣợc chất tƣơng ứng trong thƣ viện thì nhà nghi n cứu c thể ựa tr n cấu trúc mới tìm ra đƣợc để phát triển các tƣởng về cấu trúc h a học.
* T n p ần tron mỗi t ượ nh bằng GC/MS vớ ươn tr n ạ n ư s u
- Mẫu dịch chiết đƣợc làm khan bằng Na2SO4, chạy trên hệ thống sắc ký khí khối phổ.
Hệ thống sắc ký khí khối phổ: GC-MS 7890A/5975C, Agilent technology, Mỹ. C ươn tr n sắc ký Cột sắc ký mao quản: HP-5: 30 m x 250 µm x 0.25 µm C ươn tr n n ệt lò c t t ng 7oC/phút t ng 4oC/phút t ng 20o C/phút 50oC 120oC 200oC 300oC (0 phút) (0 phút) (5 phút) (10 phút)
Buồng tiêm mẫu
- Nhiệt độ buồng tiêm mẫu: 280°C - Áp suất: 10 psi - Tỷ lệ chia dòng: 5 :1 - Thể tích tiêm: 1 µL Kh i phổ - Khoảng phổ quét: 28 – 600 m/z - Nhiệt độ nguồn: 230oC - Nhiệt độ bộ tứ cực: 150oC Ưu m c p ươn p p -Độ chính xác cao. -Chỉ cần một ƣợng mẫu nhỏ. -Trang thiết bị không quá phức tạp.
-Có khả n ng tách tốt các cấu tử ra khỏi hỗn hợp phức tạp. -Kết quả thu nhận đƣợc một cách nhanh chóng (từ 1-100 phút ).
-Độ nhạy cao, có khả n ng phát hiện các cấu tử có nồng độ thấp.
N ượ m c p ươn p p
-Độ ay hơi: Mẫu phải a hơi đƣợc
-Độ bền nhiệt: Mẫu buộc phải tồn tại ở nhiệt độ cao. -Khối lượng phân tử: Đặc trƣng < 500 amu.
-Chu n bị mẫu: Dung môi phải a hơi và c nhiệt độ sôi thấp hơn các chất phân tích.
-Lượng mẫu: Thƣờng từ 1-5 l.
-Detecter - Đầu dò: Chỉ c pha động là mang mẫu.
CHƢƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN