2.3.2.1. Phát hiện các flavonoit
Cân 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 10ml metanol, đun nóng cho tan rồi lọc qua giấy lọc. Lấy 2ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ít bột magie (Mg), sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bình cách thuỷ vài phút. Dung dịch xuất hiện màu đỏ, hoặc màu hồng là phản ứng dương tính với các flavonoit.
Mẫu lá khô nghiền 2kg nhỏ
n-butanol (BuA) Cặn tổng Metanol
1. MeOH
2. Cất thu hồi dung môi áp suất thấp
Etyl axetat (EA) EA-1 EA2 n- hexan (HA) HA-1 HA- 2 HA-3
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.2.2. Phát hiện các ancaloit
Cân 0,01g cặn các phân đoạn, thêm 5ml HCl, khuấy đều, lọc qua giấy lọc, lấy vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước lọc axit.
Ống (1): 1 - 2 giọt thuốc thử Dragendorf, nếu xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tính.
Ống (2): 3 - 5 giọt thuốc thử Mayer, nếu xuất hiện tủa trắng là phản ứng dương tính.
Ống (3): 1 - 2 giọt dung dịch silicostungtic axit 5%, nếu có tủa trắng và nhiều là phản ứng dương tính.
2.3.2.3. Định tính các saponin
Cân 0,01g cặn của các phân đoạn. Hoà tan cặn trong 5ml clorofom, lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính.
Lấy 2 ống nghiệm mỗi ống cho 2ml dịch thử. Ống 1 cho 1ml HCl loãng, ống 2 cho 1ml NaOH loãng rồi bịt miệng ống nghiệm, lắc trong vòng 5 phút theo chiều dọc, quan sát sự xuất hiện và mức độ bền vững của bọt. Nếu bọt cao quá 3 - 4cm và bền trên 15 phút là phản ứng dương tính.
2.3.2.4. Phát hiện các cumarin
Cân 0,01g cặn của các phân đoạn. Hoà tan cặn trong 5ml clorofom, lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính.
Lấy vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml dịch thử cho vào một trong 2 ống đó 0,5ml dung dịch NaOH 10%. Đun cách thuỷ cả hai ống trên đến sôi, để nguội rồi mỗi ống cho thêm 4ml nước cất. Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ở ống không kiềm có thể xem là phản ứng dương tính. Nếu đem axit hoá ống có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc sẽ làm cho dịch đang trong mất màu vàng sau đó xuất hiện vẩn đục và có thể tạo ra kết tủa là phản ứng dương tính.
Ngoài ra, có thể làm phản ứng điazo hoá với axit sulfanilic trong môi trường axit, nếu cho màu da cam đến cam nhạt, sẽ là dương tính cho cumarin.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.2.5. Định tính các glucosit tim
Chuẩn bị dịch thử định tính cũng làm như mục 2.3.2.4.
+ Phản ứng Legal: cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch thử, thêm vào 1 giọt dung dịch natri prussiat 0,5% và 2 giọt NaOH 10% nếu xuất hiện màu đỏ là phản ứng dương tính với vòng butenolit.
+ Phản ứng Keller-Kilian: Thuốc thử gồm 2 dung dịch. Dung dịch 1: 100ml axit H2SO4đậm đặc+1ml FeCl3 5% Dung dịch 2: 100ml axit axetic loãng+1ml FeCl3 5%
Cách tiến hành: cân 0,01g cặn các dịch chiết cho vào ống nghiệm thêm vào 1ml dung dịch 1, lắc đều cho tan hết, nghiêng ống nghiệm và cho từ từ 1ml dung dịch 2 theo thành ống nghiệm, quan sát sự xuất hiện của màu đỏ hay nâu đỏ, giữa hai lớp chất lỏng. Nếu không xuất hiện màu là phản ứng âm tính với các glucosit tim.
2.3.2.6. Phát hiện các hợp chất steroit
Cân 0,01g cặn của các phân đoạn, thêm 2ml dung dịch NaOH 10% đun cách thuỷ đến khô. Hoà tan cặn trong 3ml clorofom, lấy dịch clorofom để làm phản ứng định tính các steroit và thuốc thử Lieberman-Bourchardt (gồm hỗn
hợp 1ml anhydrit axetic+1ml clorofom để lạnh ở 00
C, sau đó cho thêm 1 giọt H2SO4đậm đặc). Lấy 1ml dịch clorofom rồi thêm 1 giọt thuốc thử, dung dịch xuất hiện màu xanh trong 1 thời gian là phản ứng dương tính.
Kết quả phân tích định tính các nhóm chất trong lá cây Cối xay được nêu trong bảng 2.2.
2.3.2.7. Phát hiện các hợp chất đường khử
Cân 0,01g cặn hòa vào 5ml etanol, lắc đều, lấy dịch etanol làm dịch thử. Lấy 2ml dịch thử vào ống nghiệm và cho thêm vào đó 2ml thuốc thử Felinh, đun sôi 2-3 phút. Nếu có kết tủa đỏ gạch của Cu2O thì chứng tỏ có mặt của đường.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.2.8. Xác định chất béo
Lấy 5 gam nguyên liệu thực vật ngâm trong cồn 960
, lọc lấy dịch chiết cồn để định tính chất béo.
Lấy một giọt dung dịch nghiên cứu nhỏ lên giấy lọc, để cho dung môi bay hơi hết, trên giấy lọc có vết giống như mỡ thì chứng tỏ trong thực vật nghiên cứu có chất béo.
2.3.2.9. Định tính poliphenol .
Lấy 5 gam thực vật khô nghiền nhỏ cho vào 10ml C2H5OH, ngâm trong
24h rồi lọc lấy dung dịch nghiên cứu.
Lấy 1ml dung dịch nghiên cứu cho vào ống nghiệm, thêm vào đó 2ml nước
và một giọt dung dịch FeCl3. Nếu có màu xanh đến xanh đen thì chứng tỏ có
poliphenol.
2.3.2.10. Xác định catechin .
Lấy 5 gam nguyên liệu thực vật nghiền nhỏ ngâm trong 15ml dung dịch C2H5OH. Lắc đều và để yên trong 24h, lọc lấy dung dịch nghiên cứu. Lấy 1ml dung dịch nghiên cứu cho vào ống nghiệm, thêm vào đó vài giọt vanilin 2% trong axit HCl đặc. Nếu có màu đỏ xuất hiện thì chứng tỏ có catechin.
2.3.3. Kết quả khảo sát định tính các dịch chiết
Dùng các thuốc thử đặc hiệu để phát hiện các nhóm hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh lí cao trong than và lá cây Cối xay, chúng tôi thu được kết quả thử định tính với các nhóm chất, kết quả được chỉ ra ở bảng 2.2.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 2.2. Phát hiện các nhóm chất trong thân cây Cối xay (Abutilon indicum(L) Sweet)
STT Tên nhóm
chất Thuốc thử Quan sát thấy
Kết quả
1 Ankaloit
Dung dịch Đragendooc Dung dịch axit picric 10% Kết tủa vàng da cam Kết tủa màu vàng ( Tinh thể hình kim) +++ +++
2 Cumarin Phản ứng lacton hoá Kết tủa bông +++
3 Saponin Nước cất Tạo bọt bền vững sau 3h +++
4 Đường khử Dung dịch thuốc thử Fellinh Kết tủa đỏ gạch +
5 Glycozit
tim Phản ứng Keller- Kilian Vành đỏ hay đỏ nâu giữa hai lớp +++
6 Chất béo Giấy lọc Không có vết tương tự như mỡ —
7 Catechin Vanilin 2% trong HCl
đặc Dung dịch không có màu đỏ —
8 Poliphenol Dung dịch FeCl3 Màu xanh đến xanh
đen + 9 Flavonoit Mg + dung dịch HCl đặc Dung dịch AgNO3 Dung dịch NaOH 10% Dung dịch H2SO4đặc Màu hồng Kết tủa đen Vàng đậm Đỏ tím +++ +++ +++ ++ 10 Steroit Phản ứng Libecman-
Bơcsa Hồng đến xanh lá cây ++
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn