Phương pháp đo dòng (Amperometric) là một phương pháp của phân tích điện hoá, trong đó tín hiệu phân tích nhận được ở đầu ra là dòng hiện thời. Dòng hiện thời này phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ nhất định của chất cần phân tích. Trong quá trình hoạt động của cảm biến các phản ứng oxi hoá khử sẽ xảy ra trên
điện cực trơ, các điện tử đi chuyển từ dung dịch tới điện cực làm việc hoặc ngược lại. Hướng di chuyển của các điện tử phụ thuộc vào bản chất của chất phân tích và được kiểm soát bởi điện thế áp đặt vào hệ. Phương pháp đo dòng được thực hiện trên hệ điện hoá được thiết lập gồm hai hay ba điện cực. Điện cực đối thường là điện cực Au hay Pt, điện cực chuẩn có thế cố định thông thường là Ag/AgCl và điện cực làm việc. Điện thế được đặt giữa hai điện cực làm việc và điện cực so sánh, người ta sẽ đo dòng chạy qua tế bào. Khi điện thế đạt đến một giá trị nào đó (thường là điện thế oxi hoá), thì hiện tượng oxi hoá xuất hiện và các electron được sinh ra. Dòng điện thu được sẽ tỉ lệ với độ tập trung của các phân tử bị oxi hoá. Tiến hành đo đặc trưng đáp ứng dòng với sự thay đổi nồng độ chất cần phân tích trong dung dịch tại các giá trị điện áp đặt vào điện cực làm việc. Xây dựng đường chuẩn của cảm biến tại các giá trị điện áp.
II.2.Thực nghiệm
II.2.1. Thiết bị, dụng cụ
- Hệ đo điện hoá Máy Palmsen3
Hình II.5. Hệ đo điện hóa Palmsen 3 và thiết bị tích hợp phần mềm đo điện hóa
- Máy rung siêu âm, - Micropipet 0,5- 50 μl
- Cân điện tử có độ chính xác 0,0001g
dụng máy in DEK Albany 247. Hệ điện cực tích hợp gồm 3 điện cực tiêu chuẩn được in trên màng polyetylen teraphthalat. Điện cực làm việc và điện cực đối được in từ mực cacbon, và điện cực giả so sánh là điện cực in bạc (E ≈ +0.3 V so với điện cự chuẩn hydro)
Hình II.6. Hệ điện cực mạch in tích hợp II.2.2. Hóa chất sử dụng
- Monomer pyrrole (Py) C4H4NH (Acros) được tinh chế lại bằng phương pháp
chưng cất, sục khí nitơ và bảo quản ở nhiệt độ thấp (dưới 4oC), tránh ánh sáng trực
tiếp.
- 1,5DAN, Cơ chất Acetylthiocholin chlorua (ATCl), Enzym axetylcholinesteraza (AChE) (VI-S, 1000 IU/mg from electric eel), 1,5 diaminonaphthalene monomer, Triclophon ([2,2,2- trichloro-1-hydroxyethyl]-phosphonic acid dimethyl ester),
dung dịch glutaraldehyde (GA) HCO(CH2)3CHO dạng hơi bão hòa 25%, (Sigma
Aldrich),
Các hóa chất khác: LiClO4, HClO4, Na2HPO4.12H2O, KH2PO4 (Merck), KCl, NaCl
(Sigma Aldrich),
Tất cả các hóa chất có độ tinh khiết phân tích
- Dung dịch đệm PBS (pH = 7,4) là hỗn hợp gồm có KCl 2,7 ×10-3 M ; KCl
0,137 M; Na2HPO4 0,1 M; KH2PO4 0,1 M
0,098M CH3COONa.
- 1,5DAN 1×10-3 M trong HClO4 0,1M
- Dung dịch Pb2+ được chuẩn bị từ dung dịch chuẩn Pb2+ nồng độ 1000 ppm
(Merk).
- Các dung dịch được chuẩn bị từ nước cất 2 lần.
II.2.3. Quy trình biến tính điện cực làm việc