Bã bụp giấm được bổ sung ethanol 60° theo tỷ lệ 1:10 và đặt ở nhiệt độ phòng trong khoảng thời gian là 30 phút, 60 phút, 90 phút, 120 phút, 150 phút. Kết quả thí nghiệm được thể hiện qua bảng 3.2 và hình 3.2.
Bảng 3. 2: Phần trăm anthocyanin trong dịch chiết với các thời gian chiết khác nhau
STT Thời gian chiết % Anthocyanin toàn phần
1 30p 0,441 ± 0,012d
2 60p 0,663 ± 0,026c
3 90p 0,904 ± 0,038a
4 120p 0,772 ± 0,036b
a, b, c, d theo sau giá trị trung bình trong cùng một cột thể hiện sự khác biệt giữa các nghiệm thức với mức ý nghĩa P≤0,05
Qua kết quả ở bảng 3.2 ta thấy phần trăm Anthocyanin thấp nhất là 0,441% ở 30 phút, tăng dần đến 0,904% ở 90 phút, sau đó giảm xuống.
Tại thời điểm 30 phút, thời gian chiết quá ngắn, dung môi chưa hòa tan được hết anthocyanin dẫn đến % Anthocyanin thu được thấp. Do đó khi tăng thời gian lên thì % Anthocyanin thu được tăng và đạt cao nhất ở 90 phút. Sau đó lượng Anthocyanin giảm xuống ở các mốc thời gian 120 phút và 150 phút. Jaafar NF và cộng sự (Jaafar và cộng sự, 2020) cũng đưa ra thời gian tối ưu để tách chiết anthocyanin là 90 phút.
Thời gian trích ly cũng ảnh hưởng đến quá trình trích ly anthocyanin. Nếu thời gian quá ngắn, dung môi không hòa tan được hết anthocyanin trong nguyên liệu. Ngược lại, thời gian quá dài ảnh hưởng đến chất lượng của sản phấm chiết, do dung môi có thể hòa tan các chất khác trong nguyên liệu. Ngoài ra nếu thời gian trích ly quá dài có thề làm giảm lượng anthocyanin trích ly được do anthocyanin có thể bị phân hủy khi tiếp xúc với không khí và ánh sáng trong thời gian dài.
0.441 0.663 0.904 0.772 0.68 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 30p 60p 90p 120p 150p Ph ần t ră m An th ocya ni n to àn p hầ n (% ) Thời gian trích ly (phút)
Hình 3. 2: Biểu đồ thể hiện phần trăm Anthocyanin trong dịch chiết với các thời gian chiết khác nhau
CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1 Kết luận
Nghiên cứu này xác định một số yếu tố hưởng đến quá trình trích ly anthocyanin từ bã bụp giấm như:
-Ethanol là dung môi được sử dụng trong quá trình. Tỷ lệ dung môi 6 ethnol: 4 nước -Thời gian chiết 90 phút cho phần trăm anthocyanin toàn phần cao nhất là 0,904. 4.2 Kiến nghị
-Khảo sát thêm các yếu tố có ảnh hưởng đến quá trình chiết tách Anthocyanin từ bụp giấm: enzyme, tác động nhiệt,...
TÀI LIỆU THAM KHẢO: TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
Cúc, Nguyễn Thị Hồng (2015). "KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH TÁCH CHIẾT ANTHOCYANIN TỪ HOA BỤP GIẤM, KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA VÀ ĐỘ BỀN CỦA DỊCH CHIẾT
ANTHOCYANIN."
Linh, Đào Thị Mỹ, et al. (2019). "Nghiên cứu quá trình tạo bột màu betacyanin thu nhận từ vỏ quả thanh long (Hylocereus undatus)." 17(1): 21.
Nguyễn, Thị Lan and Lạc Quyên Lê Thị (2004). "NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA HỆ DUNG MÔI ĐẾN KHẢ NĂNG CHIẾT TÁCH CHẤT MÀU
ANTHOCYANIN CÓ ĐỘ MÀU CAO TỪ QUẢ DÂU HỘI AN."
Nguyễn, Thị Tuyết and Thị Duyên Trần (2019). "Nghiên cứu tách chiết chất màu ANTHOCYANIN từ hoa đậu biếc (CLITORIA TERNATEAN)."
Nhi, Kiều Thị, et al. (2020). "NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT TÁCH
ANTHOCYANIN HIỆU QUẢ TỪ HÀNH TÍM, HÀNH LÁ, TỎI TÍA, CẦN TÂY, CẦN TA." 12(1): 100.
TÀI LIỆU TIẾNG ANH
Abu‐Tarboush, Hamza M, et al. (1997). "Some nutritional and functional properties of karkade (Hibiscus sabdariffa) seed products."
Ademiluyi, A. O. and G. Oboh (2013). "Aqueous extracts of Roselle (Hibiscus sabdariffa Linn.) varieties inhibit α-amylase and α-glucosidase activities in vitro." J Med Food.
Bae, In Young, et al. (2017). "Optimized preparation of anthocyanin-rich extract from black rice and its effects on in vitro digestibility." 26: 1415-1422.
Bridle, Pꎬ and CF %J Food chemistry Timberlake (1997). "Anthocyanins as natural
food colours—selected aspects."
Brouillard, R, et al. (1993). "Polyphenols and pigmentation in plants."
Chewonarin, T, et al. (1999). "Effects of roselle (Hibiscus sabdariffa Linn.), a Thai medicinal plant, on the mutagenicity of various known mutagens in Salmonella
typhimurium and on formation of aberrant crypt foci induced by the colon carcinogens azoxymethane and 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo [4, 5-b] pyridine in F344 rats."
37: 591-601.
Dahiru, D, et al. (2003). "Effect of Hibiscus sabdariffa calyx extract on carbon tetrachloride induced liver damage."
Francis, Frederick John, et al. (1989). "Food colorants: anthocyanins." 28(4): 273- 314.
Ghasemzadeh, Ali, et al. (2018). "Optimization of flavonoid extraction from red and brown rice bran and evaluation of the antioxidant properties."
Harborne, JB %J Plant pigments. (1988). "The flavonoids: recent advances." Harborne, Jeffrey B, et al. (2013). The flavonoids, Springer.
Herrera-Arellano, A, et al. (2004). "Effectiveness and tolerability of a standardized extract from Hibiscus sabdariffa in patients with mild to moderate hypertension: a controlled and randomized clinical trial."
Jaafar, Nurjamalina Fasihah, et al. (2020). "Optimum extraction condition of Clitorea ternatea flower on antioxidant activities, total phenolic, total flavonoid and total anthocyanin contents." 31: 1.
Khazaei, K Mahdavee, et al. (2016). "Optimization of anthocyanin extraction from saffron petals with response surface methodology." 9(7): 1993-2001.
Kong, Jin-Ming, et al. (2003). "Analysis and biological activities of anthocyanins."
Mahadevan, N and Pradeep Kamboj (2009). "Hibiscus sabdariffa Linn.–an overview." Mat Isa, A, et al. (1985). "Analisis kimia dan pemprosesan roselle (Hibiscus
sabdariffa L.)."
Mat Isa, A, et al. (1985). "Analisis kimia dan pemprosesan roselle (Hibiscus sabdariffa L.)." 13: 68-74.
Mazza, G, et al. (1993). "Introduction pp. 1-28."
Morton, J and FL %J Fruits of warm climates. Editor: JF Morton Miami, Miami, Florida, USA (1987). "Tamarind in: fruits of warm climates."
Omobuwajo, TO, et al. (2000). "Physical properties of sorrel (Hibiscus sabdariffa) seeds."
Peng, Chiung-Huei, et al. (2011). "Hibiscus sabdariffa polyphenolic extract inhibits hyperglycemia, hyperlipidemia, and glycation-oxidative stress while improving insulin resistance."
Robert, SM (2005). "Roselle production: Botanical description."
Wrolstad, RE %J Journal of Food Science (2004). "Anthocyanin pigments— Bioactivity and coloring properties."
PHỤ LỤC 1. Cách pha dung dịch đệm
Chuẩn bị dung dịch đệm kali clorua 0,025 M (pH = 1): cân 1,86 g KCl cho vào cốc thủy tinh, bổ sung nước cất đến khoảng 980 mL. Điều chỉnh pH của dung dịch đệm về 1 ± 0,05 bằng dung dịch HCl (khoảng 6,3 mL). Cho vào bình định mức 1 L và bổ sung nước cất đến vạch.
Chuẩn bị dung dịch đệm natri acetate 0,4 M (pH = 4,5): cân 54,43 g CH3CO2Na.3H2O cho vào cốc thủy tinh, bổ sung nước cất đến khoảng 980 mL. Điều chỉnh pH của dung dịch đệm về 4,5 ± 0,05 bằng dung dịch HCl (khoảng 6,3 mL). Cho vào bình định mức 1 L và bổ sung nước cất đến vạch.
2. Hình ảnh trong quá trình thí nghiệm
Hình ảnh hỗn hợp bã bụp giấm và dung môi ethanol sau khi ly tâm
Hình ảnh dịch anthocyanin đã bổ sung dung dịch đệm và đem đi đo OD 3. Kết quả xử lý ANOVA cho các thí nghiệm
Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ ethanol đến quá trình tách chiết Anthocyanin.
Nồng độ ethanol (%) pH 1 pH 4,5 Hàm lượng Anthocyanin
(%) 520 nm 700nm 520 nm 700 nm 20 0,409 0,003 0,067 0,004 0,390429139 20 0,434 0,003 0,062 0,003 0,436671657 20 0,53 0,069 0,004 0,001 0,465955015 20 0,454 0,003 0,064 0,003 0,457800931
40 0,618 0,006 0,063 0,003 0,647964394 40 0,639 0,003 0,072 0,004 0,666745971 40 0,74 0,116 0,003 0,002 0,655676799 40 0,659 0,003 0,073 0,004 0,689049093 60 0,738 0,002 0,09 0,005 0,879959551 60 0,715 0,006 0,068 0,004 0,848905921 60 0,858 0,123 0,005 0,008 0,854379495 60 0,735 0,006 0,07 0,004 0,872596319 80 0,6195 0,022 0,152 0,035 0,6665859 80 0,671 0,035 0,104 0,022 0,768550653 80 0,681 0,113 0,013 0,018 0,703563306 80 0,677 0,035 0,105 0,022 0,775487031 99 0,196 0,044 0,029 0,012 0,177677984 99 0,356 0,07 0,053 0,028 0,371362993 99 0,4 0,02 0,023 0,006 0,44571288 99 0,386 0,07 0,054 0,028 0,412625547
Summary Statistics for so lieu
% Anthocyanin Count Average Standard deviation Coeff. of variation Minimum Maximum Range Stnd. skewness
20 4 0,43775 0,0341016 7,79019% 0,39 0,466 0,076 -1,07095 40 4 0,665 0,0177951 2,67596% 0,648 0,689 0,041 0,791122 60 4 0,864 0,0148549 1,71931% 0,849 0,88 0,031 0,0747258 80 4 0,72925 0,0519254 7,12039% 0,667 0,775 0,108 -0,370234 tuyet doi 4 0,352 0,119992 34,0885% 0,178 0,446 0,268 -1,32444 Total 20 0,6096 0,201097 32,9884% 0,178 0,88 0,702 -0,673059
ANOVA Table for so lieu by % Anthocyanin
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Between groups 0,711979 4 0,177995 47,35 0,0000
Within groups 0,0563835 15 0,0037589 Total (Corr.) 0,768363 19
Multiple Range Tests for so lieu by % Anthocyanin
Method: 95,0 percent LSD
% Anthocyanin Count Mean Homogeneous Groups
tuyet doi 4 0,352 X
20 4 0,43775 X
40 4 0,665 X
80 4 0,72925 X
60 4 0,864 X
Thí nghiệm 2: Khảo sát sự ảnh hưởng của thời gian chiết đến quá trình tách chiết anthocyanin từ bã bụp giấm.
Nồng độ ethanol (%) pH 1 pH 4,5 Hàm lượng Anthocyanin
(%) 520 nm 700nm 520 nm 700 nm 30p 0,452 0,003 0,062 0,004 0,445066452 30p 0,43 0,003 0,063 0,003 0,430802414 30p 0,518 0,069 0,003 0,001 0,454763956 30p 0,431 0,003 0,064 0,003 0,430802414
60p 0,657 0,006 0,063 0,003 0,693744487 60p 0,628 0,003 0,072 0,003 0,652659788 60p 0,728 0,116 0,003 0,002 0,64304739 60p 0,635 0,003 0,073 0,004 0,660876728 90p 0,735 0,002 0,08 0,004 0,888069777 90p 0,724 0,006 0,069 0,005 0,86075112 90p 0,94 0,123 0,005 0,008 0,949310549 90p 0,771 0,006 0,07 0,003 0,918660982 120p 0,639 0,022 0,102 0,019 0,740805142 120p 0,661 0,035 0,104 0,022 0,754677898 120p 0,778 0,114 0,012 0,018 0,822665646 120p 0,672 0,035 0,106 0,022 0,767163378 150p 0,587 0,045 0,032 0,015 0,690969936 150p 0,592 0,08 0,054 0,029 0,69292635 150p 0,56 0,02 0,023 0,006 0,642170348 150p 0,586 0,07 0,054 0,025 0,69292635
Summary Statistics for Ket qua
Thoi gian Count Average Standard deviation Coeff. of variation Minimum Maximum Range Stnd. skewness
30 4 0,440558 0,0117134 2,65878% 0,431051 0,455071 0,0240194 0,484297 60 4 0,662639 0,021589 3,25803% 0,643331 0,693298 0,0499668 1,13037 90 4 0,904006 0,0382076 4,22648% 0,860155 0,949092 0,0889368 0,0639039 120 4 0,771595 0,0356922 4,62577% 0,740915 0,822503 0,0815886 1,17836 150 4 0,680015 0,0253379 3,72608% 0,642033 0,693318 0,0512847 -1,62677 Total 20 0,691763 0,157944 22,8321% 0,431051 0,949092 0,518041 -0,54066
ANOVA Table for Ket qua by Thoi gian
Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value
Between groups 0,462042 4 0,11551 145,15 0,0000
Within groups 0,0119372 15 0,000795811 Total (Corr.) 0,473979 19
Multiple Range Tests for Ket qua by Thoi gian
Method: 95,0 percent LSD
Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups
30 4 0,440558 X
60 4 0,662639 X
150 4 0,680015 X
120 4 0,771595 X