DNA tổng số là vật liệu khởi đầu cho mọi nghiên cứu ở mức phân tử. Chất lƣợng của DNA tổng số có vai trò quan trọng quyết định sự thành công
0 10 20 30 40 50 60 a b c d e g h i k l m n
của các thí nghiệm phân tích sinh học phân tử. Do đó, chúng tôi đã tiến hành tách chiết DNA tổng số của hai giống đậu tƣơng là Xuân Lạng Sơn và Lơ Bắc Giang theo phƣơng pháp của Gawel và Jarret (1991) [33].
Lá non đậu tƣơng đƣợc nghiền thành bột mịn trong cối chày sứ trong nito lỏng. DNA của hệ gen đƣợc chiết ra khỏi tế bào nhờ dung dịch đệm: Tris HCl 1M; EDTA 0.5M; pH=8; Sorbitol 2M; NaH2PO4 0 .4%; H2O và dung dịch đệm tách: Tris HCl 1M; EDTA 0.5M; pH=8; NaCl 5M; CTAB 4%; H2O. Đặc biệt đối với đậu tƣơng, tế bào của chúng ch ứa nhiều protein nên chúng tôi x ử lý dịch chiết nhận đƣợc bằng chloroform để loại bỏ hoàn t oàn protein ra khỏi chế phẩm DNA . Từ 0,5g mẫu nghiên c ứu chúng tôi thu đƣợc 200µl dung dịch chiết DNA . Các mẫu DNA có độ tinh sạch đƣợc kiểm tra trên máy quang phổ ở bƣớc sóng = 260/280nm và kết quả phân tích phổ thấy có đỉnh cực đại ở sóng 260nm. Kết quả đo trên máy quang phổ để xác định hàm lƣợng và kiểm tra độ tinh sạch của DNA tổng số tách chiết đƣợc, kết quả đƣợc trình bày ở bảng 3.4.
Bảng 3.4 cho thấy tỷ số A260/A280 dao động trong khoảng 1,83 -1,93 chứng tỏ rằng các mẫu DNA tách chiết có độ tinh sạch cao, ít lẫn protein có thể sử dụng để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.
Bảng 3.3. Giá trị mật độ quang của phổ hấp thụ DNA ở bƣớc sóng 260nm
và 280nm của giống đậu tƣơng XLS và LBG
Tên giống A260 A280 Tỷ số
A260/A280
Hàm lƣợng DNA (ng/µl)
XLS 0,318 0,165 1,93 795
Sau khi tách DNA tổng số, chúng tôi tiếp tục kiểm tra chất lƣợng DNA tổng số bằng phƣơng pháp điện di trên gel agarose 0,8% trong đệm TAE 1X, nhuộm bản gel trong ethydium bromide và soi dƣới ánh đèn cực tím và chụp ảnh, kết quả đƣợc thể hiện ở hình 3.4.
Hình 3.4. Hình ảnh điện di DNA tổng số tách từ lá non đậu tƣơng
1 - 2: Xuân Lạng Sơn; 3 – 4: Lơ Bắc Giang
Hình 3.4 cho thấy mẫu DNA tách chiết đƣợc biểu hiện sáng rõ và gọn. Ðiều này một lần nữa chứng tỏ DNA đƣ ợc tách chiết t ừ hai giống đậu tƣơng đều tƣơng đối sạch, không bị đứt gãy, ít tạp chất và có thể s ử dụng để nhân gen bằng kỹ thuật PCR.