Thực hiện theo phương pháp của Ankamwar, 2005 có cải tiến [7].
Cho vào cốc chia độ 100 ml dung dịch AgNO3 1mM cho lên máy khuấy từ, khuấy với tốc độ 480 vòng/phút ở nhiệt độ phòng. Sử dụng ống chia độ được gắn cố định trên một giá đỡ, nhỏ từ từ 10 ml dịch chiết vào cốc đặt trên máy khuấy từ. Tiến hành khuấy trên máy khuấy từ trong thời gian từ 10-15 phút. Kết thúc khuấy từ, cho dung dịch khuấy từ xuống, bảo quản trong lọ màu ta được dung dịch có chứa nano Bạc.
2.2.4. Phương pháp phân tích hạt nano bạc
a) Sử dụng kính hiển vi điện tử truyền qua
Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) hoạt động trên nguyên tắc giống thấu kính quang học, chỉ khác là sử dụng sóng điện tử thay cho bước sóng ánh sáng nên có bước sóng rất ngắn) và sử dụng các thấu kính điện từ - magnetic lens thay cho thấu kính quang học [3].
Các mẫu tổng hợp hạt nano bạc được gửi chụp ảnh TEM tại Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương trên hệ thống kính hiển vi điện tử truyền qua JEM 1010 của hãng JEOL – Nhật Bản.
b) Phân tích phổ UV-VIS
UV-VIS (Ultraviolet–visible spectroscopy) là phương pháp phân tích sử dụng phổ hấp thụ hoặc phản xạ trong phạm vi vùng cực tím cho tới vùng ánh sáng nhìn thấy được. Do các thuộc tính quang học của dung dịch chứa hạt nano phụ thuộc vào hình dạng, kích thước và nồng độ của hạt, nên ta có thể sử dụng UV-VIS để xác định các thuộc tính trên [3].
Các mẫu nano bạc sau khi tổng hợp được phân tích quang phổ UV-VIS trên máy quang phổ U-2900 Spectrometer của hãng HITACHI – Nhật Bản với dải bước sóng 200-800 nm.
2.2.5. Phương pháp thử khả năng kháng khuẩn của nano bạc
Hoạt tính kháng khuẩn được thử nghiệm bằng phương pháp khuếch tán trên thạch. Cấy vi khuẩn vào các đĩa môi trường LB, sau đó đục 4 giếng thạch, nhỏ 100 µl dung dịch nano bạc vừa tổng hợp vào 3 giếng và giếng còn lại nhỏ kháng sinh (Akamicine với hàm lượng 10 mg/giếng) làm đối chứng. Các đĩa được ủ ở 37C sau 24h tiến hành quan sát khả năng kháng khuẩn và đo kích thước vòng ức chế [10].
2.2.6. Phương pháp xử lý số liệu
Các kết quả thu được được xử lý thống kê bằng phần mềm Microsoft Excel để xác định giá trị trung bình và sai số chuẩn.
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN