3. Các ch tiêu ki ỉ ểm tra chất lượng sữa
3.5. Phản ứng xanh methylene/resaruzin
39
• Mục đích
Xét nghi m kh thu c nhuệ ử ố ộm xanh Methylene thường được g i là xét nghi m MBRT ọ ệ đượ ửc s dụng như một phương pháp nhanh chóng đểđánh giá chất lượng vi sinh của sữa tươi nguyên li u và sệ ữa tiệt trùng. [36].
Thử nghi m này dệ ựa trên th c t là màu xanh lam c a dung dự ế ủ ịch thu c nhu m thêm ố ộ vào s a b kh màu khi oxy có trong s a c n ki t do hoữ ị ử ữ ạ ệ ạt động c a vi sinh v ủ ật. Việc kh màu ử càng s m thì chớ ất lượng vi khu n c a s a càng kém. ẩ ủ ữ Thử nghiệm này được s d ng r ng rãi ử ụ ộ tại các đơn vị chế biến bến tiếp nhận s a và các trung tâm làm l nh sữ ạ ữa, nơi nó được tuân theo như tiêu chí loại bỏ chấp nhận đối với sữa tươi nguyên liệu và sữa đã qua chế biến [36].
• Quy trình th c hi n: ự ệ
(1)Khử trùng tất cả các dụng cụ thủy tinh và nút cao su trong n i hồ ấp hoặc trong nước sôi. Đảm b o r ng t t c các d ng c ả ằ ấ ả ụ ụthủy tinh đều s ch v m t hóa hạ ề ặ ọc.
(2)Đong 1 ml dung dịch metylen xanh thiocyanat vào ống nghiệm. (3)Thêm 10 ml sữa và đậy nắp.
(4)Có thểđặt ngay ống vào nồi cách thủy hoặc có thể bảo quản trong tủ lạnh ở0oC đến 4oC để có thời gian ủ thuận tiện hơn. Khi sẵn sàng thực hiện phép thử, nhiệt độ của mẫu phải được đưa về 35oC trong vòng 10 phút.
(5)Khi nhiệt độđạt 36 ° C, từ từđảo ngược ống vài lần đểđảm bảo hỗn h p tợ ạo cream đều. Không l c ng. Ghi l i thắ ố ạ ời gian này là thời điểm bắt đầu của thời k b nh. ỳ ủ ệ Đậy nắp để tránh ánh sáng.
(6)Kiểm tra độ khử màu của mẫu sau khi ủ 30 phút. Đọc và ghi số liệu sau mỗi 30’ trong nhiều gi ờtiếp theo.
(7)Sau mỗi lần đọc, loại bỏ các ống đã khửmàu và sau đó từ từ đảo ngược hoàn toàn các ống còn l i. ạ
(8)Ghi lại th i gian giờ ảm màu trong cả gi giờ ữa nh ng lữ ần đảo ngược cuối cùng và khử màu. Ví d , n u m u v n có màu xanh lam sau 5 gi ụ ế ẫ ẫ ờ nhưng đã được khử màu (tr ng) ắ ở lần đọc 2,5 gi thì th i gian kh xanh metylen s ờ ờ ử ẽ được ghi là 2 gi . Quá trình kh màu ờ ử được coi là hoàn thành khi 4/5 màu đã biến mất.
• Kết qu ả
Loại 1: Không kh màu trong 8 giử ờ. K t qu này cho th y sế ả ấ ữa không b nhi m vi sinh vị ễ ật nhất mang đến chất lượng sữa nguyên liệu cao nhất
Loại 2: Khử màu trong kho ng t 6 gi ả ừ ờ đến 8 gi ờ(tốt). K t qu này cho thế ả ấy sữa ít b nhiị ễm vi sinh v t, ậ điều này cho th y sấ ữa đạt ch t l ng t t ấ ượ ố
Loại 3: Khử màu trong kho ng t 2 giả ừ ờđến 6 gi (khá). K t qu này cho th y ch t l ng ờ ế ả ấ ấ ượ sữa trung bình, l ng vi sinh v t b nhi m tượ ậ ị ễ ương đối nhi u. ề
Loại 4: Kh ửmàu trong vòng chưa tới 2 giờ (kém). Kết quả này cho thấy chất lượng sữa kém, b nhiị ễm vi sinh vật nhiều.
- Phép thử resazurin
• Mục đích
Phép th resazurin ử được tiến hành tương tựnhư phép thử kh metylen xanh v i viử ớ ệc đánh giá chất lượng dựa trên màu t o ra sau m t th i gian ạ ộ ờ ủđã nêu hoặc vào th i gian c n thiờ ầ ết để ả gi m thu c nhuố ộm đến điểm cuối nhất định. Nhiều sửa đổi đã được đề xuất. Hai phương pháp ph bi n nhổ ế ất được s d ng là ử ụ "thử nghi m m t gi " và "th nghiệ ộ ờ ử ệm đọc ba lần" được thực hi n sau m t hai và ba giệ ộ ờ . Các sủ ửa đổi khác có giá trị trong các ng d ng c ứ ụ ụthể [36].
• Quy trình th c hi n ự ệ
Quy trình th c hi n phép th ự ệ ử resazurin như sau Chuẩn b dung d ch resazurin b ng cách ị ị ằ hòa tan m t viên resazurin (viên thu c nhuộ ố ộm có hàm lượng khoảng 11 mg được Ủy ban vết bẩn sinh học chứng nhận) trong 200 ml nước cất nóng như đã thực hiện trong phép thử xanh methylen. Cho 1 ml dung d ch thu c nhu m vào ng nghiị ố ộ ố ệm vô trùng sau đó thêm 10 ml mẫu. Đậy kín ống đặt trong tủấm và khi nhiệt độđạt 36oC đảo tr n s a và thu c nhuộ ữ ố ộm. Ủở 36oC. Các ống được kiểm tra và phân lo i vào cu i m t gi trong "phép th m t gi " ho c vào ạ ố ộ ờ ử ộ ờ ặ cuối ba kho ng th i gian liên ti p hàng gi trong "phép th ba l n." Các m i quan h sau v ả ờ ế ờ ử ầ ố ệ ề màu s c và chắ ất lượng thường được ch p nh n [36]. ấ ậ
• Màu s c c a m u và ắ ủ ẫ chất lượng s a ữ
o Màu xanh lam (không thay đổi màu): Chất lượng sữa rất tốt
o Màu xanh lam đến màu hoa cà đậm: Chất lượng sữa tốt
o Màu hoa cà đậm đến màu hồng đậm: Chấ ượt l ng sữa khá
o Màu hồng đậm đến màu h ng tr ng: Ch t l ng s a kém ồ ắ ấ ượ ữ