song song với chuẩn đối chiếu Tinh chế acid oleanolic thu đƣợc:
Khảo sát, chọn lựa phương pháp tinh chế acid Oleanolic: sắc kí cột, bản mỏng, sắc kí điều chế, …
Những phân đoạn chứa acid oleanolic sau khi kiểm tra bằng sắc kí lớp mỏng được gom lại, cho bay hơi dung môi, lấy cắn kiểm tra và cho chạy qua sắc kí cột nhiều lần để có độ sạch cao, có thể cho chạy qua sắc kí cột điều chế nếu chất vẫn chưa sạch. Kết hợp những phương pháp kết tinh và kết tinh lại cho cắn acid oleanolic thu được để có những tinh thể tinh khiết. Những tinh thể này được thu gom nhiều lần, lọc qua giấy lọc dày, và đem sấy khô với nhiệt độ thích hợp, trong quá trình nghiên cứu này chúng tôi sử dụng nhiệt độ 40 oC. Sau đó, tinh thể được đựng trong bình nâu kín, bảo quản ở nhiệt độ từ 2 – 8 oC.
Xác định cấu trúc nguyên liệu thu đƣợc:
Từ những tinh thể phân tách bằng sắc kí cột, định tính với chuẩn đối chiếu acid oleanolic bằng sắc kí lớp mỏng, và dùng những phương pháp kết tinh, kết tinh lại để có được những tinh thể tinh khiết; sau đó
gom lại và đem phân tích cấu trúc, độ tinh khiết với mục đích định danh nguyên liệu acid oleanolic phân lập được từ cây ngưu tất.
Xác định cấu trúc của những tinh thể thu được bằng các phương pháp : UV, IR, MNR, để từ những kết quả khảo sát chúng tôi tiến hành xác thực những tinh thể thu được đúng là acid oleanolic.
Định lượng hàm lượng acid oleanolic nguyên liệu thu được bằng phương pháp UV và HPLC, để đánh giá chất lượng của nguyên liệu so với chuẩn đối chiếu được mua từ các hãng hóa chất có tiếng như hãng Sigma.
Đánh giá chất chuẩn cho acid oleanolic nguyên liệu
Acid oleanolic nguyên liệu sau khi qua phân tích kiểm tra là đúng và tinh khiết, chúng tôi đánh giá chất chuẩn nguyên liệu acid oleanolic thực hiện dựa trên các tiêu chuẩn: cảm quan, điểm chảy, phổ UV-VIS, thời gian lưu trên sắc kí đồ HPLC, phổ IR, MNR, ....
Xây dựng quy trình thẩm định phương pháp xác định acid oleanolic bằng phương pháp HPLC/PDA.