5. Bố cục luận văn
2.5.3. Phương pháp tổng hợp, phân tích số liệu và đánh giá
2.5.3.1. Xác định các loài cây tinh dầu
Căn cứ vào các tài liệu đã công bố về tinh dầu ở trong và ngoài nước kết hợp với kinh nghiệm của các chuyên gia để xác định các loài cây tinh dầu [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13, 19, 20].
2.5.3.2. Lập danh lục cây tinh dầu
Danh lục được sắp xếp như sau: sắp xếp theo tiến hóa của ngành; với ngành Ngọc lan, các họ được xếp thành 2 lớp, lớp Ngọc lan xếp trước, lớp Hành xếp sau, các họ trong mỗi lớp cũng được xếp theo vần alphabet tên khoa học. Bảng Danh lục có tên khoa học, tên Việt Nam cùng các thông tin về dạng sống, công dụng, mức độ bị đe doạ,..
2.5.4.3. Đánh giá đa dạng các bậc taxon
Sau khi đã có thống kê số loài, chi, họ từ thấp đến cao và tính tỉ lệ phần trăm, tiến hành thống kê và đánh giá:
- Đánh giá đa dạng họ, chi, loài;
- Đánh giá đa dạng chi, loài của các họ: Thống kê số loài, chi theo từng họ;
- Đánh giá đa dạng loài của các chi: Thống kê các chi có nhiều loài nhất.
2.5.3.4. Đánh giá nguồn gen quý hiếm, bị đe dọa
Được thống kê và sắp xếp theo mức độ nguy cấp theo tiêu chí của Sách đỏ Việt Nam (2007), The criteria for Critically Endangered, Endangered and Vulnerable (IUCN 2012); Nghị định số 32/2006-CP của Chính phủ về Quản lý Cây rừng, Động vật rừng nguy cấp, quý, hiếm.
2.5.4. Phương pháp nghiên cứu tinh dầu
Trên cơ sở kết quả kế thừa và điều tra bổ sung, đề tài lựa chọn một số loài cây tinh dầu theo các tiêu chí: các loài đặc trưng cho khu vực nghiên cứu; trữ lượng lớn (hoặc dễ bắt gặp).
2.5.4.1. Phương pháp chưng cất tinh dầu
Tinh dầu được định lượng theo phương pháp cất kéo hơi nước có hoàn lưu với bình cầu 2l, ống hứng tinh dầu có vạch chia từ 0,01- 0,1ml. Mỗi mẫu được xác định 3 lần, sau đó lấy giá trị trung bình. Chưng cất tinh đâu được thực hiện ngay tại hiện trường hoặc tại Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật.
2.5.4.2. Phân tích thành phần hóa học trong tinh dầu
Định tính và định lượng tinh dầu bằng phương pháp Sắc ký khí và Sắc ký khí-khối phổ. Các phân tích được thực hiện tại Viện Hóa học các Hợp chất thiên nhiên.
Sắc ký khí (GC): Được thực hiện trên máy Agilent Technologies HP 6890N Plus gắn vào detectơ FID của hãng Agilent Technologies, Mỹ. Cột sắc ký HP-5MS với chiều dài 30 m, đường kính trong (ID) = 0,25 mm, lớp phim mỏng 0,25m đã được sử dụng; khí mang H2; nhiệt độ buồng bơm mẫu (Kĩ thuật chương trình nhiệt độ-PTV) 250oC, nhiệt độ Detectơ 260oC. Chương trình nhiệt độ buồng điều nhiệt: 60oC (2phút), tăng 4oC/phút cho đến 220oC, dừng ở nhiệt độ này trong 10 phút.
Sắc ký khí-khối phổ (GC/MS): Việc phân tích định tính được thực hiện trên hệ thống thiết bị sắc ký khí và phổ ký liên hợp GC/MS của hãng Agilent Technologies HP 6890N. Agilent Technologies HP 6890N/ HP 5973 MSD được lắp với cột tách mao quản và vận hành sắc ký như ở trên với He làm khí mang.
Các chất được nhận biết bằng khối phổ (MS) so sánh với thư viện phổ: Database/Wiley 275.L và Database/Nist 98.1.