IV. Nhận xét và giải thích
2. Môi trường và mẫu thưc hiện:
Môi trường M5 (Potato dextrose agar) 200g khoai tây xắt lát, không gọt vỏ 1000ml nước 20g agar 10g glucose Rose bengal 0.025g Chloramphenicol 0.05g Mẫu thực hiện: nấm mốc II. Mục đích
Có thể quan sát cấu trúc đặc trưng về hình thái mà không gây ảnh hưởng gì đến sự phát triển của nấm mốc. Phương pháp này có thể quan sát một cách dễ dàng các
35
cấu trúc liên quan đến sự sinh sản. Việc định danh nấm mốc thường dựa vào các cấu trúc liên quan đến sự sinh sản, các đặc tính về hình thái học và sự phát triển của khuẩn lạc. (Sơn, 2018)
III. Nguyên tắc và cách tiến hành 1. Nguyên tắc 1. Nguyên tắc
Nồng độ đường cao và pH thấp (5.6) của môi trường này không thích hợp cho sự phát triển của hầu hết vi khuẩn, do đó đảm bảo hạn chế sự tạp nhiễm. Hầu hết nấm mốc phát triển tốt ở pH 5.6. Khuẩn lạc nấm mốc có thể được quan sát trực tiếp bằng cách lấy một ít sinh khối và đặt trên phiến kính (slide) với một giọt nước hay thuốc nhuộm (tiêu bản giọt ép). Có một cách khác là tiêu bản phòng ẩm (slide culture), đây là tiêu bản có nhiều ưu điểm vì có thể quan sát cấu trúc đặc trưng về hình thái mà không gây ảnh hưởng gì đến sự phát triển của nấm mốc.
2. Cách tiến hành
- Chuẩn bị các phiến kính hình chữ nhật (glass slide) và phiến kính hình vuông (coverslips). Ngâm phiến kính trong ethanol 80% trong tối thiểu 15 phút.
- Hơ bề mặt của các phiến kính này trên ngọn lửa để vô trùng (dùng kẹp để cầm).
- Đun chảy ống nghiệm chứa môi trường Sabouraund dextrose agar hay Potato dextrose agar, sau đó làm nguội đến 48 – 50oC. Đổ môi trường vào trong đĩa petri.
- Để đĩa nguội sau đó dùng dao cắt một ô vuông khoảng ô kính hình vuông - Cho miếng thạch đã cắt vào giữa phiến kính hình chữ nhật và đặt phiến kính hình vuông lên.
36
- Cho một ít giấy thấm nước (vô trùng) vào đĩa petri. Cho một vài que tăm vào bên trên phần giấy thấm. Đặt các phiến kính vừa chuẩn bị ở phần trước lên trên các que tăm. Ủ ở nhiệt độ phòng từ 2 – 4 ngày.
- Quan sát dưới kính hiển vi. Có thể dùng dung dịch methylen blue (0.3% trong ethanol) để nhuộm màu giúp quan sát rõ hơn cấu trúc của nấm mốc (cồn giúp làm mềm vách tế bào nấm mốc giúp thuốc nhuộm dễ đi vào tế bào hơn)
IV. Kết quả
Figure: Kết quả tiêu bản phòng ẩm
IV. Nhận xét và giải thích 1. Ưu điểm 1. Ưu điểm
Việc sử dụng tiểu bản phòng ẩm giúp chúng ta hạn chế được thời gian thực hiện mà còn không gây ảnh hưởng gì đến sự phát triển của nấm mốc
Quan sát một cách dể dàng các cấu trúc liên quan của nấm mốc bằng các vật kính khác nhau.
Dựa vào các cấu trúc liên quan đến sự sinh sản, các đặc tính về hình thái học và sự phát triển của khuẩn lạc mà chúng ta có thể định dang được nấm mốc.
37
2. Nhược điểm
Trong quá trình cấy mẫu, để lẫn vi sinh vật khác vào làm một số mẫu nấm khó quan sát thậm chí không nhìn thấy gì.
Thời gian phải phù hợp nếu để quá dài không xem kết quả sẽ dẫn đến việc mọc nấm trở nên dày đặt khó quan sát.
3. Nhận xét và giải thích
Từ kết quả cho thấy, nấm quan sát được có dạng sợi, theo như tài liệu cho thấy hình dạng kết quả thu được giống với Penicillium thuộc lớp nấm bất toàn
Deuteromycetes, không có hình thức sinh sản hữu tính. Hệ sợi có vách ngăn. Bào tử vô tính là bào tử trần.
38
KẾT LUẬN
Tóm lại, Thí nghiệm Vi sinh Thực Phẩm không những là một môn học thực hành về vi sinh vật mà còn là một bài học kinh nghiệm quý báu qua các bài học. Cung cấp kiến thức về sử dụng thiết bị phòng thí nghiệm, an toàn phòng thí nghiệm, cách quan sát vi khuẩn, ….Chắc chắn rằng qua các bài học này sinh viên sẽ ngày càng tiến bộ, vững kiến thức, vững thao tác hơn rất nhiều.
39
TÀI LIỆU THAM KHẢO
- TS. Trịnh Khánh Sơn, Giáo trình thực hành vi sinh vật học,01/2018.
-TS. Trịnh Khánh Sơn, Các kỹ thuật cơ bản trong thực nghiệm vi sinh vật học, nhà xuất bản Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh,2018.