men
Xác định độ bền nhiệt : Lấy 3 ống dịch lọc dịch lên men, mỗi ống khoảng 5- 7ml. Một ống đun sôi trực tiếp 10 phút, một ống đun sôi cách thủy 30 phút, một ống để ở nhiệt độ thường. Đem thử hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp giếng thạch.
Xác định độ bền pH: Lấy 5 ống dịch lọc dịch lên men, mỗi ống khoảng 5 ml. Chỉnh pH dịch lên men trong ống về pH 3, 5, 7, 9, 11 bằng dung dịch NaOH 0,1N và HCl 0,1N. Thử hoạt tính dịch trong ống sau 1 ngày, và sau 5 ngày.
Xác định độ bền pH: Lấy 5 ống dịch lọc dịch lên men, mỗi ống khoảng 5 ml. Chỉnh pH dịch lên men trong ống về pH 3, 5, 7, 9, 11 bằng dung dịch NaOH 0,1N và HCl 0,1N. Thử hoạt tính dịch trong ống sau 1 ngày, và sau 5 ngày. bằng dung dịch NaOH 0,1N và HCl 0,1N. Dịch lọc và dung môi hữu cơ được cho vào bình gạn với tỷ lệ 5:1 (v:v), lắc 1- 3 phút, để phân lớp 1h sau đó gạn riêng lớp dung môi và lớp nước . Thử hoạt tính của lớp dung môi và lớp nước sau mỗi lần chiết bằng phương pháp khoanh giấy lọc . Có thể chiết một lần hoặc chiết lặp để chiết kiệt được kháng sinh trong dịch lọc.
2.3.9. Phương pháp tách kháng sinh bằng sắc ký
Sắc ký lớp mỏng: Chuẩn bị:
-Bản mỏng sắc ký được hoạt hóa ở 1100
C trong 30 phút.
-Dung môi pha đúng theo tỷ lệ , đổ vào bình sắc ký (lớp dung môi không quá 1 cm), để bão hòa trong 30 phút.
-Dùng mao quản chấm dịch chiết DMHC hoặc các phân đoạn quá trình sắc ký cột lên bản mỏng , cách mép dưới 1,5 cm, cách 2 mép bên 1 cm. Để khô tự nhiên hoặc sấy ở 500C, lặp lại 3-5 lần.
Khai triển sắc ký : Đặt bản mỏng vào bình sắc ký , khi dung môi chạy đến ¾ bản mỏng thì lấy ra, đánh dấu đường dung môi chạy.
Hiện sắc đồ : Sấy khô bản mỏng , sau đó soi đèn UV hoặc hiện hình bằng vi sinh vật