3.1.1.1. P ƣơng p áp ĩ ọc
Chuẩn bị mẫu thử nhƣ mục (a) phần 2.2.1.1, sau đĩ lấy 6 ml dung dịch mẫu cho vào 6 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml.
- Ống 1 (Ống chứng): Khơng thêm thuốc thử. - Ống 2: Thêm 2 giọt thuốc thử Dragendorff (TT).
- Ống 3: Thêm 2 giọt thuốc thử Bouchardat (TT).
- Ống 4: Thêm 2 giọt thuốc thử Bertrand (TT).
- Ống 5: Thêm 2 giọt thuốc thử Valse-Mayer (TT).
- Ống 6: Thêm 2 giọt thuốc thử Hager (TT).
Sau khi cho các thuốc thử chung alkaloid vào các ống nghiệm, so sánh với ống 1 (ống chứng), quan sát thấy các hiện tƣợng nhƣ bảng 3.1:
Bảng 3. 1. Kết quả định tính alkaloid trong thuốc tiêm Cytoblastin bằng phƣơng pháp hĩa học
Ống Thuốc thử Kết quả Đán g á
1 Khơng thêm thuốc thử
2 Dragendorff Xuất hiện tủa cam +++
3 Bouchardat Xuất hiện tủa nâu ++
4 Bertrand Xuất hiện tủa trắng +
5 Valse-Mayer Xuất hiện tủa trắng +
6 Hager Xuất hiện tủa vàng +++
Chú thích: (+) dung dịch đục mờ nhƣng khơng lắng (++) Dung dịch đục, cĩ tủa lắng sau vài phút
(+++) Cĩ tủa lắng ngay. Dung dịch đục sau khi thêm giọt TT thứ 2.
Nhận xét: Khi cho thêm các thuốc thử vào, thấy xuất hiện kết tủa và dung dịch bị đục, chứng tỏ trong mẫu thuốc tiêm Cytoblastin cĩ alkaloid.
3.1.1.2. Sắc ký lớp mỏng
Chuẩn bị mẫu thử nhƣ mục (b) phần 2.2.1.1 và tiến hành sắc ký với điều kiện: - Bản mỏng: Silica gel F254.
- Dung mơi khai triển: Chloroform – Methanol (9:1).
- Phát hiện vết bằng UV 254 nm, UV 365 nm và phun thuốc thử Dragendorff.
(a) Dƣới ánh sáng thƣờng (b) Dƣới ánh sáng UV 254 nm
(c) Dƣới sáng sáng UV 365 nm (d) Sau khi phun thuốc thử Dragendorff
Hình 3. 1. Sắc ký đồ định tính alkaloid (vinblastine) trong thuốc tiêm Cytoblastin (1) và dịch chiết ra từ thuốc tiêm (2)
Nhận xét: Trong điều kiện sắc ký đã chọn, nhận thấy khi soi bản mỏng ở ánh sáng bƣớc sĩng 254 nm, vết vinblastin sulfat trong thuốc tiêm Cytoblastin (1) và vết của dịch chiết từ thuốc tiêm (2) cĩ Rf bằng nhau và hiện màu tím lơ. Đồng thời, sắc ký đồ của 2 dung dịch sau khi phun thuốc thử Dragendorff cho 2 vết màu cam.