a. Đếm tế bào sau phân lập
* Sau khi lọc dịch phân lập qua màng lọc φ lỗ lọc 70 μm. Thu được 1 ml dịch treo tế bào
- Hút 10 μl dịch treo pha loãng tỷ lệ 1/20 với nước muối sinh lý * Sử dụng buồng đếm Neubauer để đếm tổng số lượng tế bào: - Đặt phiến kính phủ buồng đếm Neubauer khu vực trung tâm. - Hút 10 μl dịch tế bào sau pha loãng nhỏ vào mép của phiến kính
- Tiến hành đếm tế bào ở 5 ô vuông lớn (80 ô vuông nhỏ). Đếm những tế bào chạm vạch giới hạn phía trên và bên trái, không đếm những tế bào chạm vạch giới hạn dưới và bên phải.
- Tính mật độ tế bào phân lập được theo công thức:
Số lượng tế bào/ml= SL tế bào đếm x 4000/80 x 20 = SL tế bào đếm x 10³ /ml
* Tính tỷ lệ sống chết của tế bào sau phân lập:
- Lấy 10µl dung dịch treo tế bào sau pha loãng trộn lẫn với dung dịch Trypan Blue 0,4% theo tỷ lệ 1:1 để đánh giá tỷ lệ sống;
- Những tế bào sống không bắt màu xanh của Trypan Blue; Tế bào sống bắt màu Trypan Blue
- Đếm tế bào sống/tổng số 200 tế bào lặp lại 2 lần. Tính trung bình 2 lần đếm - Tỷ lệ tế bào sống = Trung bình số tế bào sống 2 lần đếm/ 200 x100 (%) b. Các mẫu nuôi cấy
* Các mẫu nuôi cấy tế bào được nhuộm hóa mô miễn dịch với kháng thể TH theo quy trình mục 2.5.3
* Đếm tế bào dưới kính hiển vi Huỳnh quang: Những tế bào TH (+) cho màu đỏ có biểu hiện ít nhất 2 nhánh bào tương
* Tính tỷ lệ cụm có tế bào TH (+) - Quan sát dưới vật kính x 4
- Di chuyển vi trường theo hình zic zắc
- Quan sát trên toàn bộ đĩa nuôi , đếm số lượng cụm có tế bào TH (+) Tỷ lệ cụm có tế bào TH (+) = Số lượng cụm có tế bào TH(+)/tổng số cụm - Thực hiện 2 lần. Tính tỷ lệ trung bình 2 lần đếm coi là tỷ lệ cụm có tế bào TH (+) của mẫu nuôi cấy
* Tính tỷ lệ tế bào TH (+) bằng phương pháp đếm thủ công dưới kính hiển vi huỳnh quang
- Với mỗi vi trường đếm tế bào TH (+) và tổng số tế bào.
Tỷ lệ tế bào TH (+) = Số lượng tế bào TH (+)/ Tổng số tế bào đếm - Tính tỷ lệ tế bào TH trung bình của 10 vi trường coi là tỷ lệ tế bào TH
(+) ở mỗi mẫu nuôi cấy.