a. Nhuộm Hematoxylin – Eosin (H-E):
* Mục đích: nghiên cứu cấu trúc vi thể của não giữa phôi chuột, phôi người * Các bước tiến hành:
- Cố định Formol: 1- 4giờ; - Rửa bằng nước thường: 30 phút;
- Hút nước bằng cồn 70°, 80°, 90°, 95°, 100°; - Làm trong mô bằng toluene;
- Ngấm nến ở tủ 60℃ trong 2 giờ; - Đúc block paraffin;
- Cắt lát 3-4μm;
- Nhuộm tiêu bản bằng Hematoxylin- Eosin, quy trình như sau: (1)Mẫu mô cắt mỏng được đưa lên lam kính;
(2)Dán đều mẫu mô bằng dung dịch Mayer trên mặt phẳng ấm; (3)Để tiêu bản khô trong tủ ấm 45℃ 2 ngày;
(4)Sử dụng 3 lọ toluene để tẩy nến;
(5)Sử dụng 3 lọ cồn 90° (10 phút/1 lọ) để loại bỏ toluene; (6)Rửa bằng nước cất;
(7)Nhuộm Hematoxylin trong 5 phút; (8)Rửa dưới vòi nước lã 30 phút; (9)Nhuộm Eosin trong 5 phút;
(10)Nhúng lam tiêu bản qua 2 cốc cồn 100° trong 10 giây; (11)Tiếp tục ngâm trong toluene nóng 56℃ trong 1 giờ; (12)Dán lamelle phủ mẫu vật lên lam kính;
- Đọc tiêu bản bằng kính hiển vi quang học với độ phóng đại x10, x20 và x40. b. Nhuộm Giemsa:
* Mục đích: Quan sát bề mặt của mẫu tế bào nuôi cấy. * Các bước tiến hành:
(1) Lấy đĩa nuôi cấy ra khỏi tủ ấm và hút bỏ môi trường nuôi cấy; (2) Cố định bằng cồn 100°;
(3) Rửa lại bằng nước thường;
(4) Chuẩn bị Giemsa 10% (Merck – Đức) pha trong nước cất ngay trước khi sử dụng;
(5) Nhuộm Giemsa trong 10 phút;
(6) Rửa đĩa nuôi cấy nhiều lần bằng nước cất; (7) Để khô sau đó kiểm tra trên kính
c. Nhuộm Cajal II:
* Mục đích: Để xác định sự có mặt của xơ thần kinh trong mô não giữa phôi chuột, trong mẫu tế bào nuôi cấy.
* Các bước tiến hành:
(1) Cố định mô trong cồn Amoniac 1 ngày; (2) Rửa nước 30 phút;
(4) Ngâm vào nước cất 1 phút;
(5) Ngâm vào dung dịch Acid pyrogalic 1%, 37℃ trong 1 ngày; (6) Rửa nước cất 5 phút;
(7) Khử nước bằng cồn; (8) Khử cồn bằng toluene; (9) Đúc block;
(10) Cắt tiêu bản;
(11) Tẩy paraffin qua 3 cốc toluene (12) Qua toluene ấm 1 – 2 giờ; (13) Gắn lamelle
Đọc tiêu bản bằng kính hiển vi quang học với độ phóng đại x10 và x40.