- Xem dịch protein nguyên liệu ban đầu tương đồngvới nước về khả năng hòa tan ammonium sulfate và mức bão hòa 100% =
Tủa phân đoạn của protein bằng dung môi hữu cơ
Nguyên tắc:
Dung môi hữu cơ hoà tan trong nước sẽ làm thay đổi hằng số điện môi của dung dịch, làm tăng lực hút tĩnh điện giữa các phân tử protein
Ngoài ra, các nhóm kỵ nước có thể phá vỡ hay tác động đến tương tác kỵ nước giữa các phân tử.
Thể tích lớn dung môi hữu cơ làm giảm nồng độ hiệu quả của nước, làm quá trình hydrat hóa protein kém hơn.
Nguyên nhân cơ bản của sự kết tủa là do lực đẳng điện và lưỡng cực.
Tuỳ tính chất từng loại protein enzym, dung môi hữu cơ và điều kiện kết tủa mà mỗi enzym được kết tủa ở nồng độ dung môi hữu cơ khác nhau.
Tủa phân đoạn của protein bằng dung môi hữu cơ
Các phân tử lớn kết cụm sớm hơn
Ở pH đẳng điện, sự kết tủa xảy ra ở nồng độ dung môi hữu cơ thấp hơn. Vùng kỵ nước
Tủa phân đoạn của protein bằng dung môi hữu cơ
Thực hiện:
Nhiệt độ luôn thấp hơn 4otrong suốt quá trình.
Khuấy với tốc độ vừa phải trong suốt quá trình bổ sung dung môi.
Dung môi dùng để bổ sung cần làm lạnh trước ở nhiệt độ thấp.
Nồng độ protein khoảng 5-50 mg/mL
Lực ion nên khoảng 0,05-0,2
Bổ sung dung môi dưới dạng nhỏ giọt để giảm hiện tượng nồng độ cao gây tủa cục bộ của dung môi.
Giai đoạn cân bằng sau khi ethanol được bổ sung (10-15 phút)
Nhiệt độ thấp trong suốt quá trình ly tâm
Loại bỏ dịch nổi khỏi protein kết tủa để tối thiểu lượng ethanol quá nhiều..
Hòa tan protein kết tủa trong một thể tích vừa đủ dung dịch đệm lạnh để tránh nồng độ cuối của ethanol cao.