3.1. TINH SẠCH TSP TỪ HẠT ME
Bột hạt me khô xay (20 g) được hòa với nước cất (1000 mL) sau đó được khuấy và đun nóng ở 100°C trong 20 phút. Dung dịch huyền phù sau đó được làm nguội đến nhiệt độ phòng, để qua đêm để loại bỏ protein và chất xơ rồi tiến hành ly tâm ở tốc độ 5000 vòng/phút trong 20 phút để thu phần hòa tan và loại bỏ phần cặn không hòa tan. Trong bước tiếp theo, dung dịch hòa tan được cất cô quay để thu cặn và sau đó cho thêm hai thể tích ethanol để thu được polysaccharide hạt me (TSP). Các mẫu TSP thu được sẽ được tinh sạch bằng túi thẩm tách SnakeSkin để thu được TSP có độ tinh khiết cao (Hình 3.1). Sơ đồ quá trình thu nhận TSP được trình bày ở hình 3.2 với hiệu suất đạt 13,4%.
A B
Hình 3.1. Sản phẩm TSP từ hạt me. A) Bột hạt me đun trong nước trong 20 phút; B) TSP thu được sau khi kết tủa trong ethanol và lọc qua rây (kích thước 0.125 mm).
Hình 3.2.Sơ đồ quá trình thu nhận TSP từ hạt me
3.2. TỔNG HỢP CÁC DẪN SUẤT SULFATE CỦA TSP
3.2.1. Tổng hợp dẫn suất TSPS
Quá trình sulfatehóa polysaccharide của hạt me được thực hiện theo phản ứng như mô tả của Fan và cs., [32] và Chen và cs., [33]. Sơ đồ phản ứng được minh họa trong Hình 3.3.
Bột nguyên liệu
Ly tâm 5000 rpm/20 phút
Dịch huyền phù
Dịch trên tủa
Thêm nước, đun ở 100oC, 20 phút
Tủa ethanol
Tủa ethanol
TSP
Hình 3.3. Phản ứng tổng hợp TSPS từ TSP của hạt me (Fan và cs., [32]
Sơ đồ quá trình thu nhận TSP được trình bày ở hình 3.4.
Hình 3.4. Sơ đồ quá trình thu nhận TSPS từ hạt me
Trong thí nghiệm này, dung dịch Na2NO3 5% được thêm vào dung dịch