1. Chiết dựa vào dung môi
Bột dược liệu được chiết với ether dầu hỏa để loại chất béo rồi chiết saponin bằng methanol – nước (tỷ lệ 4:1). Loại methanol dưới áp suất giảm. Hòa cặn trong nước để có dung dịch 10% rồi lắc với n – butanol. Tách lớp n – butanol, bốc hơi butanol dưới áp suất giảm rồi hòa cặn với methanol để có dung dịch chấm sắc ký. Có thể tinh chế thêm bằng cách rót từ từ dung dịch methanol vào ehter có lượng lớn gấp 10 – 15 lần (có khi dùng aceton hoặc hexan thay ether).
Chiết với cồn
2. Chiết saponin bằng cách tủa trong môi trường axit
Cho nguyên liệu thực vật cần chiết xuất saponin vào dung dịch cồn 70° bằng phương pháp ngấm kiệt. Dịch chiết cồn thu được sẽ đem cô thu hồi còn khoảng 1 lít, sau đó pha loãng với 5 lít nước
-Chiết với este dầu hỏa
-Chiết với hỗn hợp Methanol – nước
Bột rễ cam thảo Dịch chiết cồn Cao cồn Saponin thô / n- butanol Cao saponin thô
-Ethanol (50-90%),MeOH, nước
-Cô thu hồi dung môi
-Lắc với n-Butanol
-Cô quay -Hexan,benzen, PE để loại tạp
(Giàu axit Glycyrrhizar)
29
-Chiết với cồn 70%
-Cô thu hồi dung môi, hòa cắn với nước
-Rót axit HCl đến pH=2, khuấy đều 5 phút Rễ và thân cây ngâm Bột dược liệu Bột dược liệu đã loại béo Bã dược liệu Tủa GA GA -Cắt bỏ rễ con, ủ đống -Thái mỏng, sấy khô, tán bột
-Loại chất béo
-Chiết hồi lưu với cồn 75o
/HCl
-Ly tâm lấy tủa
-Lấy tủa bằng nước đá, hòa tan lại trong 95o sôi, bốc hơi cồn -Rửa với cồn, bốc hơi cồn
3. Chiết xuất Saponin bằng sắc ký cột Diaion HP-20
Dung dịch mẫu trong nước được nạp lên cột có chứa Diaion HP – 20, sau đó triển khai bằng (H20 – MeOH) với nồng độ MeOH tăng dần:
Hình 8: Ảnh hưởng của độ phân cực