2.3.1 Khái quát về tỉnh Đồng Nai
Đồng Nai là tỉnh thuộc khu vực Miền Đơng Nam Bộ, cĩ nền kinh tế phát triển năng động. Đồng Nai cùng với các tỉnh khác như: Bình Dương, Thành Phố Hồ Chí Minh, Bà Rịa-Vũng Tàu tạo thành tứ giác kinh tế trọng điểm và là đầu mối giao lưu quốc tế cho khu vực Đơng Nam Bộ nĩi chung và cả nước nĩi riêng.
Đồng Nai cĩ diện tích 5.894,73 km2, chiếm 1,76% diện tích tự nhiên cả nước, trong đĩ dân số trong độ tuổi lao động trên 1 triệu người, mật độ dân số 381 người/km2. Tỉ lệ tăng dân số tự nhiên của tồn tỉnh năm 2006 là 1,23%.
Tỉnh cĩ 11 đơn vị hành chính trực thuộc gồm: Thành Phố Biên Hịa, thị xã Long Khánh và 9 huyện: Long Thành, Nhơn Trạch, Trảng Bom, Thống Nhất, Cẩm Mỹ, Vĩnh Cửu, Xuân Lộc, Định Quán, Tân Phú.
Hình 2.3. Bản đồ hành chính tỉnh Đồng Nai
Là một tỉnh cĩ hệ thống giao thơng thuận tiện với nhiều tuyến đường huyết mạch quốc gia đi qua như quốc lộ 1A, quốc lộ 20, quốc lộ 51; tuyến đường sắt Bắc – Nam; gần cảng Sài Gịn; sân bay quốc tế Tân Sơn Nhất và sắp tới đây là sân bay quốc tế Long Thành đã tạo điều kiện thuận lợi cho hoạt động kinh tế trong vùng cũng như giao thương với cả nước đồng thời cĩ vai trị gắn kết vùng Đơng Nam Bộ với Tây Nguyên. (Nguồn: http://www.dongnai.gov.vn)
2.3.2 Tình hình chăn nuơi gia cầm của tỉnh Đồng Nai
Đồng Nai là một tỉnh cĩ nền chăn nuơi gia cầm tương đối mạnh. Các trang trại chăn nuơi gà, vịt được trải rộng từ thành phố Biên Hịa, thị xã Long Khánh đến các huyện trên địa bàn tồn tỉnh. Xu thế phát triển chăn nuơi gà trong những năm gần đây theo hướng quy mơ lớn, hình thức trang trại đã giúp người chăn nuơi chủđộng từ khâu giống tới thức ăn và thú y nên mang lại hiệu quả kinh tế cao, tuy nhiên do các trại chăn nuơi phát triển tự phát trên nền đất tự cĩ của các gia đình nên thường nằm đan xen với
các khu dân cưđã ảnh hưởng lớn đến mơi trường, khĩ kiểm sốt dịch bệnh. Hiện tại Đồng Nai cĩ khoảng 8.000.000 con gà với sản lượng thịt 10.000 tấn/năm.
Ngồi ra Đồng Nai cịn là nơi thu hút đầu tư chăn nuơi gà, vịt từ các xí nghiệp, cơng ty chăn nuơi lớn trong và ngồi nước như cơng ty TNHH CP Việt Nam, cơng ty TNHH Thanh Bình, cơng ty TNHH Cargill, cơng ty TNHH Topmill… Đây cũng là nhân tố giúp cho nền chăn nuơi gia cầm đặc biệt là chăn nuơi gà, vịt ở Đồng Nai ngày càng phát triển. Tuy nhiên, do sựảnh hưởng của dịch cúm gia cầm đã làm tổng đàn gia cầm, đặc biệt là tổng đàn gà trong tồn tỉnh giảm đáng kể (số gia cầm bị tiêu hủy 6,4 triệu con), nhưng đến nay đang cĩ chiều hướng phục hồi trở lại (bảng 2.2) (báo cáo tình hình chăn nuơi tỉnh Đồng Nai giai đoạn 2001 – 2005 và định hướng phát triển 2006 – 2010).
Bảng 2.2 Tổng đàn gia cầm Đồng Nai (từ 2000-2007) tính đến ngày 1/8/2007 (đơn vị 1000 con)
Loại gia cầm 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 Gà 7.652 8.296 8.429 8.115 6.264 4.752 4.179 5.380
Vịt 551 618 820 641 598 521 567 581
Ngan, ngỗng 30 51 50 60 58 49 54 61
(Nguồn: Báo cáo tổng kết của phịng kế hoạch - Sở Nơng Nghiệp và Phát Triển Nơng Thơn Đồng Nai, 2007).
PHẦN 3
NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. Thời gian và địa điểm
Thời gian: Từ ngày 25/1/2007 đến ngày 25/5/2007
Địa điểm
Địa điểm lấy mẫu: Mẫu được lấy tại các trại chăn nuơi gà đẻ trứng thương phẩm ở các huyện Trảng Bom, Vĩnh Cửu, Long Thành, Tân Phú, Xuân Lộc, Thống Nhất và Thị Xã Long Khánh Tỉnh Đồng Nai.
Địa điểm xét nghiệm: Trạm chẩn đốn xét nghiệm - Chi cục Thú Y tỉnh Đồng Nai.
3.2. Vật liệu Mẫu xét nghiệm
Mẫu huyết thanh gà đẻ trứng thương phẩm Isabrow. Số lượng 1330 mẫu.
Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm
Thiết bị: Máy ly tâm, máy lắc Multishaker, máy lắc Vortex, tủ mát (4-80C), tủ âm (-200C)
Dụng cụ: Micropipette 1 đầu (kênh), micropipette 12 đầu (kênh), đồng hồ bấm giờ, kim tiêm lấy máu, máng nhựa đựng hĩa chất, hộp đựng đầu type, chai lọđựng hĩa chất, vỉ làm phản ứng ngưng kết (đáy chữ U), ống chứa mẫu Eppendorf, găng tay, khẩu trang, bơng, cồn, túi nilon đựng mẫu, hộp đựng mẫu, đá lạnh bảo quản mẫu.
Hĩa chất: NaCl, KCl, NaHPO4, KH2PO4, NaOH, HCl, nước cất, dung dịch Phosphate bufer saline 0,01M (PBS ).
Kháng nguyên Newcastle chuẩn do Trạm chẩn đốn xét nghiệm – Chi cục thú y
Đồng Nai cung cấp.
Huyễn dịch hồng cầu gà 1%. 3.3. Nội dung nghiên cứu
Khảo sát hiệu giá kháng thể chống bệnh Newcastle trên đàn gà đẻ trứng thương phẩm tại 7 huyện, thị thuộc tỉnh Đồng Nai.
Đánh giá khả năng tạo kháng thể theo huyện, thị, theo nhĩm lứa tuổi và theo quy mơ chăn nuơi.
3.4. Phương pháp nghiên cứu 3.4.1. Bố trí lấy mẫu xét nghiệm
Mẫu huyết thanh: Lấy ngẫu nhiên theo các trại chăn nuơi ở 7 huyện, thị thuộc tỉnh Đồng Nai.
Để tính tốn số mẫu cần lấy chúng tơi dựa vào phần mềm Win-episcope 2.0 với các thơng số như sau: Tổng đàn: 650570 con, tỉ lệ bảo hộước đốn: 90%, sai số: 5%, độ tin cậy: 95%.
Số lượng mẫu huyết thanh cần thiết cho việc khảo sát được trình bày ở bảng sau:
Bảng 3.1: Bố trí lấy mẫu huyết thanh gà
STT Huyện, thị xã Số lượng trại Số lượng mẫu 1 2 3 4 5 6 7 Vĩnh Cửu Tân Phú TX.Long Khánh Xuân Lộc Trảng Bom Long Thành Thống Nhất 2 2 16 7 18 4 7 50 50 220 110 620 170 110 Tổng cộng 56 1330
3.4.2. Phương pháp lấy mẫu
Lấy mẫu huyết thanh:
- Một người dùng tay trái giữ hai chân gà, tay phải giữ hai cánh gà (lật ngửa). - Một người chuẩn bị ống tiêm và thực hiện lấy máu: dùng cồn sát trùng vị trí lấy máu và thực hiện lấy máu ở tĩnh mạch cánh của gà (với số lượng khoảng 2ml đến 3ml máu/con). Sau khi lấy máu song đậy ống tiêm lại và để nghiêng chờ máu đơng tự nhiên rồi cho vào thùng lạnh. Tất cả các mẫu sau khi thu thập đều được đánh dấu theo kí hiệu cĩ kèm theo danh sách với đầy đủ các chi tiết cụ thể như: địa điểm lấy mẫu
(tên trại, huyện), lồi, giống, lứa tuổi, ngày tiêm vaccine…Khi về phịng thí nghiệm mẫu được ly tâm tách lấy huyết thanh và cho vào eppendorf.
Bảo quản mẫu
- Mẫu huyết thanh phải được bao gĩi cẩn thận tránh ơ nhiễm mơi trường xung quanh.
- Bảo quản và vận chuyển trong điều kiện lạnh (từ 2-80C).
- Mẫu huyết thanh được gửi đến phịng xét nghiệm càng sớm càng tốt, kèm theo phiếu gửi bệnh phẩm.
- Nếu mẫu chưa được xét nghiệm ngay trong vịng 48-72 giờ thì nên giữ trong tủ âm sâu (-700C).
3.4.3. Chuẩn bị huyễn dịch hồng cầu 1%
Gà lấy máu là gà trống đã trưởng thành khỏe mạnh, chưa tiêm phịng Newcastle và kiểm tra khơng cĩ hàm lượng kháng thể chống bệnh Newcastle.
Dùng bơm tiêm từ 5ml đến 10ml, hút sẵn 1ml dung dịch chống đơng (Natri xitrat 4%, Alsever,…) rồi hút lấy máu gà (ở tĩnh mạch cánh hoặc tim gà). Cho máu vào ống nghiệm.
Rửa hồng cầu: Cho nước sinh lý (NaCl 0,85%) vào ống nghiệm, một lượng gấp đơi lượng máu trong ống, lắc đều. Ly tâm từ 1500 vịng/phút đến 2000 vịng/phút, trong 10 phút, đổ bỏ huyết tương ở trên.
Rửa như trên từ 2 đến 3 lần, sau lần ly tâm cuối bỏ nước ở trên để lấy hồng cầu đặc.
Sau khi hồng cầu đã được rửa song ta pha thành huyễn dịch hồng cầu 1% (1ml hồng cầu + 99ml nước muối sinh lý).
Bảo quản huyễn dịch hồng cầu ở nhiệt độ 4-80C.
3.4.4. Phản ứng ngưng kết hồng cầu HA (Haemagglutination Test)
Nguyên lý: Trên bề mặt virus Newcastle cĩ cấu trúc kháng nguyên H (Haemagglutinin) cĩ khả năng kết hợp với các thụ thể trên bề mặt hồng cầu của các lồi gà, vịt, bị sát, chuột, bị, heo, người…làm ngưng kết các loại hồng cầu này.
Trình tự tiến hành phản ứng:
Trên một hàng giếng (12 giếng), dùng micropipette hút cho vào vĩ nhựa theo trình tự sau:
- Cho 25 µl PBS vào tất cả các giếng từ 1đến 12 (theo hàng). - Cho kháng nguyên chuẩncần kiểm tra vào giếng 1 (25 µl).
- Pha lỗng kháng nguyên: Trộn đều kháng nguyên với dung dịch PBS ở giếng 1, hút 25 µl chuyển sang giếng 2 trộn đều, hút 25 µl chuyển sang giếng 3 trộn đều, tiếp tục làm như vậy đến giếng 11, hút bỏ 25 µl đi.
- Cho hồng cầu 1% vào mỗi giếng từ 1 đến 12 (theo hàng) với số lượng 25µl, lắc nhẹ 1 phút. Đểđĩa phản ứng ở nhiệt độ phịng, sau 15-30 phút đọc kết quả. Bảng 3.2: Sơ đồ thực hiện phản ứng HA Giếng Các chất 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Dung dich PBS (µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 KN chuẩn (µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Bỏ 25 - Độ pha lỗng KN 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 1/2048 - Huyễn dịch HC 1% (µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Trộn đêu để yên 15-30 phút Kết quả (HC: hồng cầu; KN: kháng nguyên)
Đọc kết quả
Phản ứng dương tính: cĩ hạt ngưng kết lấm chấm.
Phản ứng âm tính: hồng cầu lắng xuống đáy tạo thành chấm trịn ( đĩng nút ). Hiệu giá ngưng kết được tính ởđộ pha lỗng kháng nguyên cao nhất cịn xuất hiện ngưng kết hồn tồn.
Giả sử từ giếng 1 đến giếng 8 là dương tính (hồng cầu ngưng kết ) ta đọc hiệu giá ngưng kết là 1/256.
- Giếng thứ 8 cĩ nồng độ kháng nguyên tương ứng 1 đơn vị HA. - Giếng thứ 7 cĩ nồng độ kháng nguyên tương ứng 2 đơn vị HA. - Giếng thứ 6 cĩ nồng độ kháng nguyên tương ứng 4 đơn vị HA.
Để dùng cho phản ứng HI, ta sử dụng kháng nguyên pha theo nồng độ virus đạt 4 đơn vị HA/25µl.
3.4.5 Xác định hiệu giá kháng thể kháng Newcastle
Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI (Haemagglutination Inhibition Test ). Nguyên lý: Khi kháng thể cĩ trong huyết thanh của gà gặp virus Newcastle tương ứng sẽ xảy ra phản ứng kết hợp kháng nguyên – kháng thể. Do đĩ khi thêm hồng cầu gà vào thì khơng xảy ra hiện tượng ngưng kết. Ngược lại nếu kháng thể khơng tương ứng với kháng nguyên (virus Newcastle) thì cĩ hiện tượng ngưng kết hồng cầu gà.
Mục đích: xác định hàm lượng kháng thể chống bệnh Newcastle trên đàn gà.
Trình tự tiến hành phản ứng:
- Cho 25 µl PBS vào tất cả các giếng từ 1-12 (theo hàng). - Cho huyết thanh cần kiểm tra vào giếng 1 (25 µl).
- Pha lỗng huyết thanh: trộn đều huyết thanh với PBS ở giếng 1, rồi hút 25 µl chuyển sang giếng 2 trộn đều, hút 25 µl chuyển sang giếng 3, tiếp tục làm như vậy đến giếng 10, đổ bỏ 25 µl đi.
- Cho kháng nguyên 4 đơn vị HA vào giếng 1 đến giếng 11, mỗi giếng 25 µl. - Lắc nhẹđể 5 - 10 phút ở nhiệt độ phịng.
- Cho hồng cầu 1% vào mỗi giếng từ 1 đến 12 (theo hang) với số lượng 25 µl, lắc nhẹ 1 phút. Đểđĩa phản ứng ở nhiệt độ phịng sau 15-30 phút.
Chú ý:
- Giếng 11: Đối chứng (-). Gồm 25µl PBS + 25µl kháng nguyên virus (4 đơn vị HA) + 25µl huyễn dịch hồng cầu gà 1%. - Giếng 12: Đối chứng . Gồm 25µl PBS + 25µl huyễn dịch hồng cầu gà 1%. Bảng 3.3: Sơ đồ thực hiện phản ứng HI Giếng Các Chất 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Dung dịch PBS(µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 HT gà(µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Bỏ 25 - - Độ pha lỗng HT 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 - - KN virus(µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Lắc nhẹ, để yên 30 phút Huyễn dịch HC 1% (µl) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Kết quả
( ĐC: Đối chứng; HC: Hồng cầu ; KN: kháng nguyên ; HT: Huyết thanh) Đọc kết quả
Khi giếng 12 cĩ hiện tượng đĩng nút hồng cầu và giếng 11 cĩ hiện tượng ngưng kết ta bắt đầu đọc kết quảở mỗi giếng phản ứng.
Phản ứng dương tính: Hồng cầu khơng bị ngưng kết (đĩng nút). Phản ứng âm tính: Hồng cầu bị ngưng kết.
Hiệu giá kháng thể chống bệnh Newcastle là độ pha lỗng cao nhất của huyết thanh cho phản ứng dương tính.
Giả sử từ giếng 1 đến giếng 4 cĩ hiện tượng đĩng nút hồng cầu cịn từ giếng 5 trở đi cĩ hiện tượng ngưng kết, thì ta nĩi ở độ pha lỗng 1/16 huyết thanh vẫn cịn tính ngăn trở ngưng kết hồng cầu ở 4 đơn vị HA. Như vậy huyết thanh gà cần xét nghiệm cĩ hiệu giá kháng thể HI = 1/16.
Theo quy định của cơng ty chăn nuơi gia cầm trung ương thì hiệu giá kháng thể HI ≥1/16 là cĩ khả năng bảo hộ cho đàn gà chống bệnh Newcastle.
Nếu từ lỗ đầu tiên trở đi khơng cĩ hiện tượng đĩng nút mà là ngưng kết thì kháng huyết thanh gà cần xét nghiệm cĩ hiệu giá HI = 0.
3.5. Các chỉ tiêu theo dõi
- Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thểđủ bỏa hộ (≥1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻ.
- Phân bố hiệu giá kháng thể trên đàn gà đẻ.
- Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thểđủ bỏa hộ (≥1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻ theo huyện, thị.
- Phân bố hiệu giá kháng thể trên đàn gà đẻ theo huyện, thị.
- Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thểđủ bỏa hộ (≥1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻ theo lứa tuổi.
- Phân bố hiệu giá kháng thể trên đàn gà đẻ theo lứa tuổi.
- Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thểđủ bỏa hộ (≥1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻ theo quy mơ chăn nuơi.
- Phân bố hiệu giá kháng thể trên đàn gà đẻ theo quy mơ chăn nuơi. Phương pháp tính hệ số MG (Medica Geometrica).
Hệ số MG là giá trị bình quân hình học hàm lượng kháng thể ở các nồng độ pha lỗng với logarit theo cơ số 2.
- Phương pháp này do W.H. Allan (Anh) B. Toth (Hungary) và L.E.Lancaster (Canada) tìm ra.
∑ số lượng mẫu*log2ở cùng độ pha lỗng
Log 2 N =
Số lượng mẫu kiểm tra Tra bảng xác định được MG.
Phương pháp tính tỉ lệ chuyển dương (% CD)
Tỉ lệ chuyển dương là % số mẫu cĩ hiệu giá HI ≥1/16.
Số mẫu huyết thanh cĩ hiệu giá HI ≥1/16
Tỉ lệ chuyển dương(%) = *100 Tổng số mẫu huyết thanh kiểm tra
3.6. Xử lý thống kê
Các số liệu được chúng tơi tính tốn dựa trên trắc nghiệm χ2 thuộc phần mền Minitab 12.21.
PHẦN 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Qua khảo sát hiệu giá kháng thể chống bệnh Newcastle trên 1330 mẫu huyết thanh gà đẻ trứng thương phẩm được lấy một cách ngẫu nhiên ở 7 huyện: Vĩnh Cửu, Tân Phú, Xuân Lộc, Trảng Bom, Long Thành, Thống Nhất, thị xã Long Khánh thuộc tỉnh Đồng Nai cho chúng tơi một số kết quả sau:
4.1 Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thể đủ bảo hộ (≥ 1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻ
Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thểđủ bảo hộ (≥ 1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻđược trình bày qua bảng 4.1 sau đây:
Bảng 4.1: Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thể đủ bảo hộ (≥1/16) và chỉ số MG trên đàn gà đẻ
Số lượng mẫu Số mẫu đạt bảo hộ(≥ 1/16) Tỷ lệ % MG
1330 1251 94,06 52
Qua bảng 4.1 cho thấy:
- Tỷ lệ mẫu huyết thanh cĩ kháng thểđủ bảo hộ (≥1/16) trên đàn gà đẻ ở những trại khảo sát đạt 94,06%. Theo Lê Văn Hùng (2002) thì tỷ lệ tiêm phịng chỉ cần đạt 80% đã đủđểđàn gà chống được bệnh, từđĩ cho thấy hiệu quả tiêm phịng trên đàn gà