B (%) Độ lệch chuẩn tương đối đuực phép tối đa
PHỤ LỤC 5 DƯỢC ĐILN VIỆT NAM V đến 1/20 lượng monomcr (C = từ 10 % đển 5 %), tỷ ]ệ
đến 1/20 lượng monomcr (C = từ 10 % đển 5 %), tỷ ]ệ
phần trăm nhỏ hơn được dùng cho giá trị cao hơn của T. Trong quá trình điều che gel, bể của dụng cụ điện di chửa dung dịch nước của monomer và tác nhân tạo mạch nhánh, thường dược cân bằng bang dune dịch đệm đến pH mong muốn trong những lần chạy cuối và được polymer hóa tại chỗ bàng quá trình gốc tự do. Quá trình polymcr hóa được kích hoạt bởi quá trinh hóa học, thône thường sử đựng amoni persulĩat két hợp với N,N,N’,N'- tetramelhylendiamin hay quang hóa hỗn hợp riboílavin và N,N,N',N'-tetramethylendiamin. Quá trình polymcr hóa bị càn trở bời các phân từ oxy và môi trường acid. Lựa chọn thành phần của gel và điều kiện poỉymer hóa phải bảo đàm chất lượng cùa gcl.
Thiết bị cho điện di geỉ
Nói chung bể hay môi trường đê thực hiện quá trình điện di có thể được đặt theo phương thẳng dửng hay nằm ngang tùy theo thiết ke của thiết bị. Đe so sánh sự tách có thể thực hiện trong một sổ ống riêng biệt hay đưa các mẫu khác nhau vào các hổ kề bên nhau vào khuôn hay cắt vào phiến cùa gel. Phiến gel thẳng đứng như mô tà trong Hình 5.6.2 thuận lợi cho sự so sánh trực tiếp một số mẫu.
Ị lình 5.6.2 - Thiết bị điện di gel phiến thẳng đứng Tốt nhất là sự so sánh các mẫu trong cùng một bàn geỊ như vậy sẽ đồng nhất hơn về mặt thành phần so với các khuôn gel trong nhiều bể điện di.
Đặc tính của nhiều loại thiết bị lá phài hàn kín buồng đệm phía dưới với chân đế của bc điện di. cho phcp mức đệm trong buồng đệm phía dưới bằng mức đệm trong buồng độm phía trcn đề loại trừ áp suất thủy tĩnh trên gcl. Ngoài ra có một vài bộ phận tuần hoàn làm lạnh cà hai mặt bể điện di gcl.
Đe diều chế gel, buồng gel được đ ậ y băng nẳp thích hợp có chửa dung dịch monomer, tác nhân lạo mạch nhánh và chất xúc tác. Một cái lược có răng với kích thước thích hcTp đ ư ợ c đặt lên p h í a trôn và c h o p h c p quá trình p o l y m c r hóa xảy ra hoàn toàn. Sau khi lẩv lược ra sẽ tạo thành các hố trên bản gel được polymer hóa.
Trong điện di gcl đơn giàn, chi sử dụng một dung dịch đệm cho vào buồng đệm phía trên và phía dưới giống nhau. Sau khi cho dung dịch dệm vào buồng đệm, mẫu được hòa tan
trong nước đường hay dung dịch đặc và hơi nhớt khác (lể đồ phòng sự khuếch tán. Sau đó mẫu được đưa vào đáy các hô dựng mẫu bàng bơm tiêm hay micropipet và bắt đầu thực hiện quá trình diện di.
Điện di đĩa
Điện di geỉ polyacrylamiđ sử dụng một dãy không Hên tục các đệm và cũng thường sử dụng nhiều lớp gel không liên tục. được gợi là điện di đĩa. Tên của phương pháp xuất phát tư dạng hình dạng đĩa của các dài hẹp được tạo thành. Do tạo thành các dài hẹp, nên kỷ thuật này có độ phân giải đặc biệt cao và thường được sừ dụng trong phân tích đặc tinh của hỗn hợp protein và phát hiện tạp chất mà có thể có linh dộ gần thành phần chính.
Cơ sờ cùa điện di đĩa được trình bày trong phần sau có licn quan đến các hệ anion thích họp cho việc phân tách protcin mang điện tích âm. f)c hiểu dược điện di đĩa cần phải có kiến thức chung về điện di và dụng cụ dã được mô tà.
Cơ sở của điện di đĩa
Độ phân giải cao thu được trong điện di đìa phụ thuộc vào việc sử dụng hệ đệm không liên tục vè pH và thành phần. Thường phối họp hai hoặc ba gel khác nhau về tỷ trọng. Hẹ thống điển hình được mô tả trong Hình 5.6.3.
Tỳ trọng thấp ihấp pH_ 8,3 6.7 6.7 8,9 8,3
Hình 5.6.3 - Thuật Iieữ, pH đệm và thành phần đệm cho
điện di đĩa acrylamid
Gel phân tách cỏ chi cu cao vài crn với tý trọng cao (T ~ 10 % - 30 %) được polymer hóa trong đệm tris-clorid trong bế của thiết bị. Trong quá trình polymer hóa dệm được phủ lên một lóp nước mòng đổ đề phùng hiện tượng tạo thành mặt khum trôn bề mặt của gcl. Lớp nước phù lên sau đỏ dược loại đi, lớp gcl mong tỳ trọng thấp (T = 3 %), cỏ bồ dày 3 mm đến 10 mrn được gọi là khoảng trống hay gcl phân cách, được polymer hóa trong đệm tris-clorid trên mặt cùa gel phân tách. Lớp nước phủ phía trên lại tiểp tục được sử dụng để tạo mặt phăng. Mầu dược trộn với một lượng nhỏ dung dịch monomer dùng đê tạo gcl phân cách, dỏ lén mặt của gcl phân cách và được polymcr hóa. pH cua gcl phân tách thường lả 8,9, trong khi