Hu nh Th鵜 Mai Trang (2012): B茨pi"eƒe"rj逢挨pi"rjƒr"u逸c ký k院t h嬰r"8«"rj¤p"n壱p và tinh ch院 2 h嬰p ch医t labdan diterpen lacton (hispanon và leoheteromin) có trong cao hexan c栄a cây ích m磯ụ C医u trúc hoá h丑e"8逢嬰e"zƒe"8鵜nh b茨pi"rj逢挨pi"rjƒr"rj鰻 nghi羽m và so sánh v噂i tài li羽w"8«"e»pi"d嘘. S違n ph育o"vjw"8逢嬰e"e„"8瓜 tinh khi院v"@;7"'."8衣t yêu c亥u cho ch医v"8嘘i chi院u chi院t t瑛f逢嬰c li羽ụ Xây d詠ng b瓜 d英 li羽u chu育n các ho衣t ch医t v瑛a phân l壱r"8吋
làm ch医v"8嘘i chi院u nh茨o"j逢噂ng t噂i thi院t l壱p ch医v"8嘘i chi院u chi院t t瑛f逢嬰c li羽u ph映c v映 cho công tác ki吋m tra ch医v"n逢嬰ng các s違n ph育m có ch泳a ích m磯w"n逢w"j pj"vt‒p"vj鵜vt逢運ng [30]
Nguy宇n H英u L衣c Th栄y (2014): Thi院t l壱r"8逢嬰c 6 h嬰p ch医t có ngu欝n g嘘c t瑛f逢嬰c li羽u trinh n英jq pi"ewpi"8衣t yêu c亥u ch医v"8嘘i chi院u hóa h丑c th泳 c医p v噂i b瓜 d英 li羽u chu育n g欝m
8k吋m ch違y, ph鰻 UV, IR, MS, NMR và tiêu chu育p"e挨"u荏8吋8ƒpj"ikƒ"ej医v"n逢嬰ng [31]
Hà Minh Hi吋n (2014): Thi院t l壱r"8逢嬰c calophylloid và 4 Î hydroxyxanthon làm chu育n
Trang | 14
EJ姶愛PI"4<"""A渦K"V姶営PI"XÉ"RJ姶愛PI"RJèR"PIJKçP"E永W
2.1 A嘘k"v逢嬰ng nghiên c泳u Mｄu nghiên cとu
Lá c栄a gi嘘ng trà LD 97, thu mua t衣i Trung Tâm Nghiên c泳u Th詠c Nghi羽m Lâm
A欝ng vào th運k"ikcp"e¤{"vt "ejq"p<pi"uw医v"ecq"*vjƒpi";"8院n tháng 11).
Thiｘt bお, dつng cつ, hóa chＸt
Thi院t b鵜 và d映ng c映8«"8逢嬰c hi羽u chu育n theo ISO/IEC 17025 và GLP. Máy s逸c ký l臼ng Shimadzu v噂i detector PDẠ
Máy quang ph鰻 h欝ng ngo衣i Nicolet. Máy Mettle Toledo TGA/DSC 1SF/1240.
Oƒ{"8q"pjk羽v"8瓜 nóng ch違y Buchi
Oƒ{"e瓜pi"j逢荏pi"v瑛"j衣v"pj¤p"Dtwmgt"CO"722"HV-POT"Urgevtqogvgt"*"Vt逢運ng KHTN TP.HCM).
Máy cô quay Heidolph, b吋 siêu âm Branson 3510, các d映ng c映 th栄y tinh c亥n thi院t.
Oƒ{" JRNE" 8k隠u ch院 Knauer Î Merck, c瓜t Phenomenex (250 mm x 210 mm, 5µm)
Máy quang ph鰻 Shimadzu UV- Vis 1700
B違ng m臼ng Silica gel (Merck), silica gel 60 (Merck) c叡 h衣t 0,040 Î 0,060 mm.
Hóa chＸt, chＸt chuｂn
Acetonitril (HPLC), methanol (HPLC), clorofrom (PA), n-hexan (HPLC), ethyl acetat (PA),..
Trang | 15
2.2 Rj逢挨pi"rjƒr"pijk‒p"e泳u
2.2.1 Chi院t xu医t[2],[4],[5]
Lá trà sau khi hái v隠 ph違i x穎 lý, di羽v"ogp0"Ikck"8丑cp"p {"8„pi"xck"vt”"t医t quan tr丑ng trong vi羽e"8違m bào thành ph亥n catechin c栄a trà. Nguyên li羽w"ucw"mjk"8逢嬰c di羽t men b茨pi"j挨k"p逢噂c, s医y khô 荏 400C, xay nh臼, trích ly b茨ng m瓜t s嘘rj逢挨pi"rjƒr."v雨 l羽 f逢嬰c li羽u -dung môi (1:6 g/ml)
Rj⇔￢pi"rjƒr"3: Trích ly có h厩 tr嬰 vi sóng, th運i gian vi sóng 6 phút, dung môi là ethanol 60 o, công su医t lò vi sóng 800W.
Rj⇔￢pi"rjƒr"4<"Vt ej"n{"vj逢運ng b茨pi"eƒej"8wp"j欝k"n逢w"e„"mjw医y tr瓜n, th運i gian chi院t 60 phút, nhi羽v"8瓜 chi院t 70oC, dung môi chi院t ethanol 60o
Rj⇔￢pi"rjƒr"5: Trích ly có h厩 tr嬰 c栄a siêu âm, th運i gian chi院t 30 phút, dung môi chi院t ethanol 60 o.
Rj⇔￢pi"rjƒr"6< Trích ly b茨ng cách ngâm d亥o"f逢嬰c li羽u trong dung môi ethanol 60 o trong 24 gi運荏 nhi羽v"8瓜 phòng.
Rj逢挨pi"rjƒr"rj¤p"v ej"uq"o w"8逢嬰c l詠a ch丑n nh茨o"8吋 8鵜pj"n逢嬰pi"j o"n逢嬰ng polyphenol t鰻ng và so sánh nhanh hi羽u qu違 trích ly trong quá trình kh違q"uƒv"rj逢挨pi" rjƒr"vt ej"n{0"Rj逢挨pi" rjƒr"Hqnkp"- ciocalteu s穎 d映pi"8吋 8q"j o"n逢嬰ng polyphenol t鰻ng.
Thu嘘c th穎 FolinÎciocalteu (h厩n h嬰p mu嘘i ph泳c polyphosphotungstat - molydat) r医t nh衣{"8嘘i v噂i ch医t kh穎, n院u có m員t h嬰p ch医v"rqn{rjgpqn"vtqpi"o»k"vt逢運ng ki隠m nh姻
s胤 b鵜 kh穎 thành s違n ph育m ph泳c molydenium-tungsten có màu xanh.
Hóa ch医t: Thu嘘c th穎 Folin-ciocalteu, dung d鵜ch Na2CO3 d«q"jq ."p逢噂c c医t. Ch医t chu育n : Dung d鵜ch (+/-) catechin.
Rj逢挨pi"rjƒr"vj詠c hi羽n: L医y 0,5 ml dung d鵜ch (chu育n ho員c dung d鵜ch c亥p"8q"8«"
pha loãng- m磯u tr逸pi"f́pi"p逢噂c c医v+"ejq"x q"d·pj"8鵜nh m泳c 10ml, cho ti院p 4,5ml
p逢噂c c医t, l逸e"8隠u, cho nhanh 0,2 ml Folin và 0,5 ml Na2CO3 bão hòa, l逸e"8隠u dung d鵜ej."ucw"8„"8鵜ch m泳c b茨pi"p逢噂c c医v"8院n 10 ml, l逸e"8隠w0"A吋 yên trong 1gi運."ucw"8„"
Trang | 16
2.2.2 Phân l壱p, tinh ch院 [3],[4]
L丑c thu d鵜ch chi院t ethanol, l医y ph亥n g衣n cho ti院p dung môi ethanol 60O ti院p t映c siêu âm. G瓜p t医t c違 d鵜ch l丑c, chi院t v噂i cloroform lo衣i b臼enqtqrj{nn"s d鵜ch l丑c. Dung d鵜ch gelatin 25% (t益 l羽 1:60) cho vào d鵜ch l丑c nh茨m lo衣i các h嬰p ch医v"vcppkp"pi逢pi"
t映, làm l衣nh 10OC, xu医t hi羽n t栄a ti院n hành l丑e"j¿v"ej¤p"mj»pi"8吋 lo衣i t栄cs"f鵜ch l丑c. D鵜ch l丑c vjw"8逢嬰c chi院t v噂i ethyl acetat, cô quay thu h欝k"fwpi"o»k."vjw"8逢嬰c cao thô.
S逸c ký c瓜t silica gel nhi隠u l亥n cao thô, h羽 dung môi r穎a gi違k" p-jgzcp"-" gvj{n" cegvcv"*;"<3+0"N亥p"n逢嬰v"t穎c"ik違k"d茨pi"fwpi"o»k"mfio"rj¤p"e詠e"x "vjc{"8鰻k"v益 l羽 duni" o»k"8吋"v<pi"f亥p"8瓜"rj¤p"e詠e0"E»"f逢噂k"ƒr"uw医v"ik違o"8吋"nq衣k"fwpi"o»k"eƒe"rj¤p"8丑an.
G瓜r"eƒe"rj¤p"8q衣n có EGCG, catechin, gallic acid khi so sánh v院t Rf v噂i các ch医v"8鵜nh tính Sigma, ti院n hành s逸c ký c瓜t silica gel l亥n 2 v噂i h羽 dung môi cloroform : aceton (4,5 Î 5,5) k院t h嬰p v噂i s逸c ký l丑c gel trên Sephadex LH-42"*OgQJ+"vjw"8逢嬰c ba h嬰p ch医t catechin, acid gallic, EGCG thô. S違n ph育o"vj»"8逢嬰c tinh ch院 b茨ng s逸c ký l臼pi"8k隠u ch院 Kanuer Î Merck, c瓜t Rjgpqogpgz"*472"oo"z"432"oọ"7" ơ"vjw"8逢嬰c h嬰p ch医t tinh khi院t
2.2.3 Zƒe"8鵜nh c医u trúc
S違n ph育o" 8逢嬰e" zƒe" 8鵜nh b茨pi" eƒe" rj逢挨pi" rjƒr" rj鰻 nghi羽m 1H-NMR, 13C - NMR, IR, ph鰻WX."e pi"pj逢"uq"uƒpj"eƒe"u嘘 li羽u ph鰻e„"8逢嬰c v噂i tài li羽u tham kh違ọ