3. Nội dung nghiên cứu
2.3.2. Kỹ thuật xác định độ nhạy cảm với kháng sinh
Tiến hành theo kỹ thuật kháng sinh đồ phương pháp khoanh giấy kháng sinh khuếch tán trong thạch (Kỹ thuật Kirby – Bauer) [43]. Dùng khoanh giấy có tẩm sẵn kháng sinh ở một nồng độ nhất định đặt vào mặt đĩa thạch đã được cấy vi khuẩn ở một nồng độ 106 tế bào/ ml. Để tủ ấm 370C/ 18 - 20 giờ cho vi khuẩn mọc, đọc kết quả sau 24 giờ và đo đường kính vòng vô khuẩn xung quanh khoanh kháng sinh. So sánh kết quả đo được với giới hạn chuẩn của kháng sinh tương ứng để xác định mức độ nhạy cảm của vi khuẩn đó với kháng sinh được thử.
Quy trình kỹ thuật
Khoanh giấy kháng sinh được lấy ra khỏi tủ lạnh và để ở nhiệt độ phòng 30 phút trước khi đặt.
Dùng que cấy vô trùng lấy vài khuẩn lạc trên đĩa thạch cấy qua đêm, nghiền vào ống nước muối sinh lý vô trùng, lắc đều, so sánh với độ đục chuẩn để có được nồng độ vi khuẩn khoảng 106
tế bào/ ml.
Dùng que tăm bông vô trùng nhúng vào hỗn dịch vi khuẩn, ria đều tăm bông lên mặt đĩa Mueller - Hinton. Chờ se mặt thạch, đặt các khoanh giấy kháng sinh đã lựa chọn phù hợp với từng loại vi khuẩn lên bề mặt thạch. Khoảng cách giữa các khoanh giấy kháng sinh từ 20 – 25mm, cách thành đĩa 15mm. Để đĩa thạch ở nhiệt độ phòng 30 phút cho kháng sinh khuếch tán, sau đó để tủ ấm 370C qua đêm.
Đọc kết quả: Đo đường kính vòng vô khuẩn từ phía sau đĩa thạch bằng thước đo tính bằng mm. So sánh kết quả đo được với giới hạn chuẩn của kháng sinh tương ứng, đánh giá kết quả cho từng loại kháng sinh.
Kiểm soát chất lượng:
Hai chủng chuẩn quốc tế Escherichia coli ATCC 25922 và Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 được thử nghiệm song song với các chủng vi khuẩn nghiên cứu nhằm đảm bảo sự chính xác của kết quả. So sánh kết quả nhạy cảm của chủng chuẩn với bảng giới hạn chuẩn. Nếu phù hợp nghĩa là qui trình thực hiện với các chủng vi khuẩn nghiên cứu là đúng. Nếu không phù hợp, qui trình thực hiện chưa đúng hoặc hóa chất sinh phẩm hỏng, không phù hợp, cần phải tiến hành lại.