Đánh giá tiềm năng và độ an toàn của tinh dầu hoa- 123docz.net

5 Ứng dụng chất mùi trong thực phẩm

5.5 Đánh giá tiềm năng và độ an toàn của tinh dầu hoa Myrtus Communis, chất bảo quản tự nhiên hiệu quả chống lại sự phát triển của Listeria monocytogenes trong

quản tự nhiên hiệu quả chống lại sự phát triển của Listeria monocytogenes trong thịt bò băm bảo quản trong tủ lạnh. (Dhifi, Jazi et al. 2020)

5.5.1 Nguyên liệu

 Tên khoa học: Myrtus Communis

 Nguồn gốc: Hoa Myrtle được thu thập trong tháng 6 năm 2016 từ vùng Elkef ở Tunisia (nằm ở 35,23 ° N và 11,11 ° E). Việc xác định hoa được thực hiện bởi Giáo sư Ferigate Ben Abduallah, nhà thực vật học thuộc Khoa Khoa học Sfax Tunisia.‐

5.5.2 Phương pháp thực hiện:

 Chiết xuất tinh dầu: Quá trình thủy hóa trong một chiếc Clevenger trong 3 giờ bằng 1 kg không khí, hoa khô cho phép chiết xuất các loại tinh dầu của nó. Dichloromethane (3 × 50 ml) và natri sulfat khan được sử dụng để chiết xuất và sau đó làm khô pha nước tương ứng. Sau khi lọc, thiết bị bay hơi quay được sử dụng để loại bỏ dung môi bằng cách chưng cất dưới áp suất giảm. Dầu được chiết xuất sau đó được làm lạnh (4 ° C) trong bóng tối.

 Chuẩn bị Nisin: Các dung dịch gốc nisin đã được thực hiện với nồng độ cuối cùng là 25.000 IU (Đơn vị quốc tế) / ml từ 20 mg purenisin (Nisaplin; 50 × 10 6 IU / g; Danisco) hòa tan trong 0,02 N hydro clorua (HCl; Sigma Aldrich) , lọc và giữ ở −20 ° C.‐ Dự trữ đông lạnh các dung dịch nisin sau đó đã tan băng ở 25 ° C trước khi thử nghiệm, và pha loãng đến 500 IU / ml được thực hiện bằng nước cất vô trùng.

 Hoạt động kháng khuẩn: Vi sinh vật, điều kiện sinh trưởng và phương pháp thử

Hoạt tính kháng khuẩn của Mc EO được đánh giá bởi sự khuếch tán agar tốt và các phương pháp canh pha loãng với một bảng điều khiển của vi khuẩn gây bệnh tham khảo gồm sáu chủng Gram dương khác nhau (bao gồm cả vi khuẩn Bacillus cereus ATCC14579, B. subtilis ATCC6633, Enterococcus faecalis ATCC 29.212, L monocytogenes ATCC 19117 , Staphylococcus aureus ATCC 25923 và S. cholermidis ATCC 12228) và ba loại vi khuẩn gram âm ( Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 và Salmonella entericaATCC 43972). Các chủng đã được trồng trong 12 mùa 14 giờ ở 37 ° C trong môi trường vô trùng Mueller mật Hinton (BioRad). Các chế phẩm được chuẩn bị bằng cách pha loãng đến ~ 10 7 đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) / ml trong dung dịch muối vô trùng )

 Phương pháp khuếch tán giếng Agar: Khoảng 100 μl chất cấy được trải đều trên bề mặt các đĩa thạch Mueller Tiết Hinton. Pipet Pasteur vô trùng đã được sử dụng để đưa một lượng chất có kích thước khoảng 6 mm vào các đĩa thạch sau khi chúng được sấy khô vô trùng. Mc EO được hòa tan trong dung dịch DMSO / nước 1: 9 và pha loãng đến nồng độ cuối cùng là 50 mg / ml bằng nước vô trùng. Khoảng 50 μl dung dịch Mc EO đã chuẩn bị được đặt vào vùng đã được cấy chất vào. Các đĩa sau đó được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ. Khoảng 50 μl mỗi gentamicin (10 Phag) và dung dịch DMSO / nước 1: 9 (1: 9) (50 μl) lần lượt được dùng làm đối chứng dương và âm. Đường kính vùng thử nghiệm ức chế tăng trưởng xung quanh vùng cấy dung dịch được đo.

 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) và nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC): Phương pháp vi lọc nước dùng được sử dụng để xác định MIC của Mc EO. Phạm vi nồng độ tinh dầu là 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60 và 50 Laul / ml. Các biện pháp kiểm soát tiêu cực bao gồm dung dịch DMSO và nước (theo tỷ lệ 1: 9 DMSO đến nước).‐ Do đó, khoảng 10 μl vi khuẩn từ pha loãng tương ứng với MIC được mạ lên môi trường thạch máu cừu (Thermo Fisher khoa học) để xác định CFU / ml khả thi. Việc ủ được thực hiện

ở 37 ° C trong 24 giờ. Tỷ lệ MBC / MIC được tính toán để đánh giá loại tác dụng kháng khuẩn của Mc EO.

 Chuẩn bị mẫu:

Thịt bò băm thô được mua từ một siêu thị ở Sfax (Tunisia) và được vận chuyển đến phòng thí nghiệm trong điều kiện làm lạnh trong vòng chưa đầy 30 phút. Mỗi mẫu thịt được chia thành sáu mẫu như sau: một mẫu đối chứng (C, mẫu không được xử lý), hai mẫu (T1 và T2) được xử lý bằng Mc EO (tương ứng 0,4 và 0,8%), mẫu (T3) được xử lý bằng nisin ( ở mức 500IU / g) và hai mẫu (T4 và T5) được xử lý bằng sự kết hợp của Mc EO và nisin (ở mức 0,4%: 500 AU / g và 0,8%: 500 AU / g Mc EO với nồng độ nisin, tương ứng). các McEO đã được hòa tan trong 10% DMSO, được lọc (0,22 Bộ lọc Millipore polycarbonate đen; Merck KGaA), được thêm vào nồng độ 1 MIC và 2 MIC tương ứng với 0,4% và 0,8% v / w thịt, và trộn lẫn để phân phối vi sinh vật như nhau. Do đó, mỗi mẫu hình thành một hỗn hợp đồng nhất được bảo quản trong điều kiện chân không trong túi nhựa để tạo thành ba bản sao. Các mẫu sau đó được làm lạnh trong 21 ngày ở 4 ° C.

 Phân tích hóa lý:

- Xác định pH: Năm gram của mỗi mẫu được đồng nhất hóa trong 50 ml nước cất (pH 7.00), được lọc và sau đó được đo bằng pH.

- Axit thiobarbituric value giá trị các chất phản ứng (TBARS): Phương pháp chưng cất được sử dụng để đo TBARS và đánh giá quá trình oxy hóa lipid trong các mẫu thịt bò băm. Kết quả được tính theo mg tương đương malonaldehyd (MDA) trên mỗi kg mẫu (mg / kg) bằng hệ số tuyệt chủng mol của axit MDA 2 thiobarbituric (TBA) ở bước‐ ‐ sóng 532nm (1,56 × 10 5 M 1 cm - 1 ).

 Phân tích vi sinh:

Khoảng 25 g mỗi mẫu thịt được hòa tan trong 225 ml nước peptone vô trùng (0,1 g / 100 ml) và đồng nhất trong một máy thổi khí trong 90 giây ở nhiệt độ phòng. Một loạt pha

loãng 10 lần nối tiếp đã được chuẩn bị trong nước peptone (0,1 g / 100 ml). 100 pha loãng độ pha loãng thích hợp của từng mẫu được chuyển trên đĩa thạch để kiểm tra chất lượng vi sinh của nó bằng cách sử dụng số lượng tấm hiếu khí (APC; tấm đếm thạch [PCA] được ủ ở 30 ° C trong 48 giờ), số lượng vi khuẩn loạn thần (PTC; PCA các đĩa được ủ ở 7 ° C trong 10 ngày) và Enterobacteriaceae được tính bằng phương pháp mạ (các đĩa thạch Glucose Violet Red được ủ ở 37 ° C trong 48 giờ).

Để ước tính hiệu quả của Mc EO được thử nghiệm riêng lẻ và kết hợp với nisin đối với L. monocytogenes ATCC 19117 trong 21 ngày ở 4 ° C, các mẫu thịt bò băm được tiêm với 100 ml huyền phù tế bào của L. monocytogenes , chứa 10 6 CFU / ml.

Các mẫu được lưu trữ đã được kiểm tra sau 1, 3, 6, 9, 12, 15, 18 và 21 ngày. Mẫu được cấy và được bổ sung nước vô trùng được dùng làm đối chứng âm và chịu các điều kiện bảo quản tương tự. L. monocytogenes được liệt kê trên môi trường thạch PLACAM (Oxoid) và các khuẩn lạc được đếm sau 24 giờ ủ ở 30 ° C .

 Đánh giá cảm quan:

Mười tám tham luận viên có kinh nghiệm đã được chọn từ các nhân viên của Đại học Sfax để đánh giá màu sắc, hình thức, mùi và khả năng chấp nhận tổng thể của các mẫu thịt băm. Việc đánh giá được thực hiện bằng thang điểm chín, trong đó chín điểm tương ứng với rất tốt và một điểm tương ứng với rất tệ. Các giá trị từ năm trở lên được coi là chấp nhận được.

 Phân tích thống kê:

Phần mềm thống kê SPSS 19 (SPSS Ltd.) đã được khai thác để đánh giá sự khác biệt đáng kể giữa các mẫu thịt được xử lý bằng cách sử dụng phân tích phương sai một chiều (ANOVA). Dữ liệu về số lượng vi khuẩn được chuyển thành logarit của CFU trên mỗi g thịt bò xay. Phương tiện tương ứng, lỗi tiêu chuẩn và phương sai được phân tích. Sự khác biệt giữa các giá trị trung bình của các phương pháp điều trị khác nhau được đánh giá bằng thử nghiệm khác biệt có ý nghĩa nhỏ nhất. Mức xác suất p <0,05 đã được thông qua để kiểm tra ý nghĩa thống kê của tất cả các dữ liệu thử nghiệm.

5.5.3 Kết quả

Các thành phần Mc EO được xác định ( n = 17), tỷ lệ phần trăm, thời gian lưu (Rt) và các Chỉ số Kovats tương ứng của chúng. Phân tích thành phần Mc EO xác định 17 hợp chất chiếm 93,82% tổng lượng dầu. Năng suất Mc EO là 2,8% (v / w). Các thành phần được xác định được chia thành ba loại: hydrocarbon monoterpenes, monoterpen oxy hóa và sesquiterpenes. Lớp chiếm ưu thế trong Mc EO là hydrocarbon monoterpenes (59,25%) chủ yếu được đại diện bởi α Pinene (35,20%), 1,8 Cineole (17%) và limonene‐ (8,94%). Các thành phần chính khác được xác định trong Mc EO bao gồm methyl eugenol (6,98%), linalool (6,17%), geranyl acetate (4,42%), terpenyl acetate (4,30%), transcaryophyllene (4,04%), α terpineol (3,86%) oxit (2,49%), myrtenyl acetate (1,26%)‐ và myrcene (1,21%). α Pinene được báo cáo là thành phần chính của‐ Mc EO được chiết xuất từ hoa của cây Tunisia trong nghiên cứu này (35,20%), và là thành phần chính của Mc EO được chiết xuất từ lá và lá myrussy của Ý (lần lượt là 30% và 28,5% ), nó đã được báo cáo như là một thành phần nhỏ của Mc EO được chiết xuất từ lá myricate Algeria (0,33% ). Tương tự như các nghiên cứu trước đây được thực hiện trên lá và quả của M. Communis của Algeria và Ý , 1,8 cineole đã được báo cáo là một trong những‐ chất bay hơi quan trọng nhất của Mc EO được chiết xuất từ hoa mộc nhĩ Tunisia. Rõ ràng là sự biến đổi hóa học trong Mc EO của myrussy phụ thuộc vào cơ quan (lá, quả, hoa), nguồn gốc địa lý, mùa của bộ sưu tập và vào các điều kiện phù du. Trong thực tế, các yếu tố này ảnh hưởng đến con đường sinh tổng hợp của myrussy, do đó ảnh hưởng đến thành phần hóa học của Mc của nóEO và các hoạt động sinh học tương ứng.

 Xét nghiệm độc tính tế bào:

Mc EO thể hiện độc tính tế bào độc tính nồng độ đáng kể chống lại HepG2 và MCF 7‐ dòng tế bào ung thư ở người với giá trị IC 50 tương ứng là 131,3 và 204,33). Đây là báo cáo đầu tiên về hoạt động gây độc tế bào của Mc EO chống lại các dòng tế bào ung thư ở người. Tuy nhiên, tác dụng gây độc tế bào của các loại tinh dầu được chiết xuất từ các cây thuốc khác nhau đã được nghiên cứu. Các thành phần chính của tinh dầu như limonene, terpinen 4 ol và Caryophyllene đã được báo cáo để thể hiện hoạt động chống‐

ung thư chống lại các dòng tế bào khác nhau. Độc tính tế bào của tinh dầu có thể được quy cho các cơ chế khác nhau bao gồm sự gián đoạn của con đường mevalonate, gây ra apoptosis và sự thay đổi màng tế bào, bằng cách tăng tính thấm và / hoặc giảm hoạt động của các enzyme của nó.

 Tóm lại, Mc EO đã ức chế sự tăng trưởng của tất cả các chủng vi khuẩn được thử nghiệm ở nồng độ không gây độc tế bào. Mc EO thể hiện một hoạt động kháng khuẩn mạnh hơn trong trường hợp vi khuẩn gram dương. Tác dụng của Mc EO đối với L. monocytogenes là diệt khuẩn. Hơn nữa, Mc EO cũng thể hiện một hoạt động chống oxy hóa mạnh mẽ. Dựa trên các hoạt động kháng khuẩn và chống oxy hóa, Mc EO có thể phục vụ như một chất bảo quản tự nhiên cho thịt bò băm.

Mc EO (ở mức 0,4% và 0,8%) thể hiện các hoạt động chống oxy hóa và chống oxy hóa. Sự kết hợp của nó với nisin đã tăng cường tiềm năng của các hiệu ứng sinh học đã nói ở trên. Trong số các phương pháp điều trị khác nhau được thử nghiệm (T 1 5‐ ), thì 0,8% Mc EO / 500 IU / g của nisin tựa là hiệu quả nhất trong việc ức chế sự tăng trưởng của tất cả các chủng được thử nghiệm, bao gồm cả các chủng L. Monocytogenes . Kết quả chỉ ra rằng sự kết hợp của 0,8% Mc EO với 500 IU / g nisin là hiệu quả nhất trong việc ngăn chặn quá trình oxy hóa lipid, kéo dài thời hạn sử dụng và cải thiện các thuộc tính chất lượng cảm quan của thịt bò băm trong quá trình làm lạnh (4 ° C). Điều tra thêm về sự kết hợp của McEO với nisin để phát triển chất bảo quản thực phẩm tự nhiên là cần thiết.