Hiệu lực của cột thường được đo bằng hai thông số: số đĩa lý thuyết N và
chiều cao đĩa lý thuyết H.
Ta có thể coi nhưcột sắc ký được chia thành N phần mỏng hay N lớp, ở mỗi lớp sự phân bố chất tan vào hai pha lại đạt đến một trạng thái cân bằng mới (sắc ký là một quá trình động, thực ra pha động chảy liên tục và thời gian không đủ để thiết lập trạng thái cân bằng). Những phần mỏng (lớp) giả định này được gọi là đĩa lý thuyết (vì không có thực).Nếu cột sắc ký có chiều dài là L thì ta có biểu thức:
H = L / N
Trong đó N: là số đĩa lý thuyết của cột.
L : chiều dài cột
H: là chiều cao của đĩa lý thuyết.
Cột có N lớn (hay có H nhỏ) là cột có hiệu lực cao.
Chiều cao đĩa lý thuyết và sự doãng peaks.Ta có thể xác định H và N dựa vào thực nghiệm.
Hình 1.6 Peaks sắc ký (a) so sánh với đường cong phân bố chuẩn Gauss (b)
Dựa vào sắc đồ (xem hình a) ta có thể tính số đĩa lý thuyết N
N = 16 trong đó Wb = chiều rộng peaks ở đáy peaks.
hay N = 5,54 với W1/2 = chiều rộng peaks đo ở nửa chiều cao của peaks. Và từ đó tính H : H = L/N 2 b R W t 2 2 / 1 W tR
13
Qua đây ta thấy rõ : khi cột có hiệu lực cao (H nhỏ N lớn) thì Wb nhỏ (độ doãng
peaks nhỏ).
b. Độ phân giải và các yếu tố ảnh hưởng (sự tách hai chất).
Độ phân giải (Resolution) là đại lượng đo mức độ tách hai chất trên một cột sắc
ký.
Hình 1.7. RS và sự tách 2 peaks
Độ phân giải RS được định nghĩa như sau:
RS = ha RS =
trong đó W là chiều rộng peaks ở đáy và W1/2 là chiều rộng peaks ở nửa chiều cao Với hai peaks có độ lớn tương đương thì:
Rs = 0,75 hai pic không tách tốt, còn xen phủ nhau nhiều.
Rs = 1,0 hai peaks tách khá tốt,còn xen phủ nhau 4%
Rs =1,5 hai peaks tách gần hoàn toàn (chỉ xen phủ 0,3%)
1.6.Ứng dụng của sắc ký (HPLC) trong phân tích