Từ những mẫu bệnh phẩm có các biến đổi đại thể được lấy mẫu ngâm trong formol trung tính 10% để làm tiêu bản vi thể. Cần tiến hành làm tiêu bản để xác định bệnh tích vi thể chủ yếu của bệnh. Phương pháp làm tiêu bản vi thể theo quy trình tẩm đúc bằng parafin, nhuộm Haematoxilin-Eosin (HE). Các bước của quá trình làm tiêu bản vi thể như sau:
Cố định bệnh phẩm: Ngâm miếng tổ chức vào dung dịch formol 10%. Vùi bệnh phẩm:
- Rửa formol: Rửa dưới vòi nước chảy nhẹ trong 24 giờ. - Đưa mẫu vào hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động.
Đúc block: Đúc mẫu bệnh phẩm trong parafin. Cắt dán mảnh và cố định tiêu bản:
- Cắt mảnh: Bằng máy microtom.
- Tãi mảnh: Dàn lát cắt bằng phẳng trên phiến kính trong nước ấm 48oC. Sau đó để tủ ấm 37oC đến khi bệnh phẩm khô là có thể đem nhuộm được.
Nhuộm tiêu bản:
- Khử parafin: Cho tiêu bản qua hệ thống xylen gồm 3 lọ: Xylen I: 6h; Xylen II: 6h; Xylen III: 12h.
- Khử xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ: Cồn 100o: 2 lần (mỗi lần 1 phút). Cồn 95o: 1 lần; Cồn 70o: 1 lần; Cồn 50o: 1 lần.
- Khử cồn: Cho dưới vòi nước chảy 15 phút. - Nhuộm Haematoxylin (Nhuộm nhân).
Nhỏ haematoxylin ngập tiêu bản trong 5 phút, rửa nước. Sau đó cho tiêu bản qua hệ thống cồn: Cồn 50o: 1 lần; Cồn 70o: 1 lần; Cồn 95o: 1 lần; Cồn 100o: 2 lần.
Rửa tiêu bản:
- Nhuộm Eosin (Nhuộm bào tương).
Nhỏ Eosin ngập tiêu bản khoảng 5-10 phút, rửa nước. Cho tiêu bản qua hai lọ cồn 1000 mỗi lọ 1 phút.
- Tẩy cồn, làm trong tiêu bản: Cho tiêu bản đi qua xylen.
Gắn Baume canada:
Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản khi vẫn còn xylen trên tiêu bản. Kiểm tra tiêu bản trên kính hiển vi quang học.