Vật liệu nghiên cứu
Chủng virus PRRS độc lực 02HY phân lập từ lợn mắc PRRS ổ dịch Hưng Yên và chủng virus PRRS độc lực 05TB phân lập từ lợn mắc PRRS ổ dịch Thái Bình ở Việt Nam năm 2010 do Trung tâm Nghiên cứu và sản xuất sinh phẩm dược thú y Hanvet cung cấp. Chủng PRRS cường độc VN07196 Việt Nam sử dụng nghiên cứu trong kỹ thuật IPMA và thử thách công cường độc do Trung tâm Chẩn đoán Thú y trung ương, Cục Thú y cung cấp.
Lợn thí nghiệm: Sử dụng lợn khỏe mạnh từ 4-5 tháng tuổi. Tất cả lợn sử dụng trong thí nghiệm đều được kiểm tra xác định âm tính với: Porcine reproductive and respiratory virus (PRRS), Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), Transmissible gastroenteritis virus (TGEV), Classical swine fever virus (CSFV), Porcine circovirus type 2 (PCV2), Porcine parvovirus (PPV).
Tế bào dòng: Marc 145 (Số hiệu CRL 12231) của hãng ATCC.
Địa điểm thực hiện nghiên cứu
Trung tâm Chẩn đoán Thú y trung ương, Cục Thú y. Phòng Vi sinh phân tử, Viện Công nghệ sinh học.
Trung tâm nghiên cứu và sản xuất sinh phẩm dược thú y Hanvet.
Máy móc, thiết bị, hóa chất sử dụng
Tủ an toàn sinh học Cấp II (Esco), tủ ấm CO2 (kính hiển vi soi ngược (Leica), máy PCR (Biorad), máy giải trình tự gen (ABI), máy điện di, máy votex (IKa), máy ly tâm (Eppendorf), tủ -800C, kính hiển vi thường.
Dụng cụ: Pipet (Eppendorf), đầu típ các loại (Corning), bình nuôi cấy tế bào T25, T75 (Corning), màng lọc (corning), khay 96 (Corning), ống Eppendorf, ống ly tâm 15ml, 50ml (corning), bơm tiêm, găng tay, khẩu trang.
Hóa chất: Môi trường nuôi cấy tế bào, MEM, DMEM (Gibco), tế bào dòng Marc 145, Kit tổng hợp cDNA, DNA một số loại virus: SuperSciptTM First-StrDNA Synthesis System for RT-PCR, PCR (Invitrogen). Kit tách dòng gen: TA cloning Kit (Invitrogen). Kit giải trình tự gen: BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems). Các hóa chất dùng trong nghiên cứu sinh học phân tử có độ tinh khiết cao được cung cấp bởi các hãng như Sigma, Merck, Invitrogen, Biosystems: Taq DNA polymerase, Cao nấm men, Trypton, Agar, Amp (Ampicilin), X-gal, EDTA (Ethylendiamin tetraacetic acid), SDS (Sodium dodecyl sulphat), Chloroform, Trizol, Acetat natri, Ethanol, NaCl, Tris-HCl, NaOH, TAE (Tris-Acid acetic-Ethylendiamin tetraacetic acid), các loại hóa chất nuôi cấy tế bào, các loại hóa chất dùng cho phản ứng miễn dich gắn enzyme IPMA (kháng thể gắn enzyme peroxydase, cơ chất AEC…)