- Phổ cộng hởng từ hạt nhân 1HNMR đợc đo trên máy Bruker 500MHz, phổ
4.3. Xác định cấu trúc của
Chất 157 là chất rắn màu vàng. Nhiệt độ nóng chảy 195-1960C.
Phổ khối lợng va chạm electron (EI-MS) của hợp chất 157 cho pic ion phân tử m/z [M]+ 284, hợp chất 157, ứng với công thức C16H12O5.
Phổ cộng hởng từ hạt nhân 1H-NMR cho thấy một tín hiệu singlet sắc nét của một proton của nhóm hydroxy hình thành liên kết cầu hydro nội phân tử với nhóm cacbonyl ở δ 12,49 ppm.
Phổ cộng hởng từ hạt nhân 1H-NMR cũng cho thấy có 2 tín hiệu singlet trong vùng thơm ở δ 6,97 và 6,95 ppm đợc quan sát và gán cho tín hiệu của các proton của vòng thơm tơng ứng H-6, H- 8.
Phổ cộng hởng từ hạt nhân 1H-NMR cũng cho thấy có tín hiệu multiplet ở δ
7,61 ppm tơng ứng các proton H-3’, H-4’, H-5’.
Các tín hiệu doublet ở δ 8,09 ppm đợc quan sát và gán cho tín hiệu của các proton tơng ứng H-2’ và H-6’ và 1 tín hiệu ở δ 3,92 ppm là của nhóm OCH3 đợc gắn với cacbon C-7.
Phổ cộng hởng từ hạt nhận 13C-NMR và DEPT cho thấy tín hiệu 16 cacbon. + 7 cacbon metin.
+ 8 cacbon bậc 4.
+ cacbon thuộc nhóm OCH3.
Bảng 4.2:Số liệu phổ 13C-NMR của hợp chất 157 Cacbon DEPT Độ dịch chuyển hoá học (ppm)
Thực nghiệm Tài liệu [15]
2 C 146,1 145,2 3 C 132,0 133,0 4 C 182,3 181,0 5 C 154,6 153,5 6 CH 104,7 103,3 7 C 163,1 164,9 8 CH 91,3 92,0 9 C 149,8 150,5 10 C 105,3 104,0
1’ C 130,8 131,3 2’ CH 126,3 127,0 3’ CH 129,1 128,4 4’ CH 130,1 129,3 5’ CH 129,1 128,4 6’ CH 126,3 127,0 OCH3 56,3 56,0
Nh vậy các số liệu phổ UV, ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC
và COSY so sánh với tài liệu [21], cho thấy cấu trúc của chất 157 là 3,5-dihydroxy-7- methoxyflavone (5-hydroxy-7-methoxyflavonol hoặc izalpinin).
Hợp chất này lần đầu tiên tìm thấy trong cây Alpinia spp., Populus spp. và một số loài khác [11]. 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 1' 2' 3' 4' 5' 6' OH O O CH3O OH (157) Izalpinin
Hình 4.15: Phổ khối lợng (EI-MS) của hợp chất 157
Hình 4.17: Phổ 1H-NMR của hợp chất 157 (phổ dãn)
Hình 4.19: Phổ 13C-NMR của hợp chất 157
4.3. Xác định cấu trúc hợp chất 158
Chất 158 là chất rắn màu vàng. Nhiệt độ nóng chảy 235-2370C.
Phổ tử ngoại (UV) của hợp chất 158 cho hấp thụ cực đại tại 277, 290, 330, 380 nm, đặc trng cho hợp chất flavon.
Phổ khối lợng phun mù electron (EI-MS) postive [M+H]+ cho pic 285, negative cho pic [M-H]+ 283, hợp chất 158 có khối lợng phân tử 284, ứng với công thức C16H12O5
Phổ 1H-NMR và 13C-NMR của 158 cho thấy hợp chất này là một dihydroflavone. Tín hiệu vòng C còn cha bị thế một vị trí nào đợc khẳng định bằng các tín hiêu bị chập tại các vị trí 2’, 6’ [δH7,54 (2H, m)], và 3’, 4’, 5’ [δH7,45 (3H, m)]. ở
vòng B, ba tín hiệu chuẩn xác tại các vị trí C-2, C-3 và C-4 với các giá trị tơng ứng là [δC78,6 (d), 42,5 (t), 197,2 (s)/ δH 5,58 (1H, dd, J =3,0; 13,0 Hz) và hai proton tại δ 3,34 (1H, m, Ha-3) và 2,82 (1H, m, Hb-3)] khẳng định 158 là một dihydroflavone. Ngoài ra trên phổ cũng khẳng định vòng A còn một vị trí cha bị thế bởi một proton còn sót lại bằng tín hiệu đơn [δC 91,7 (d)/ δH 6,28 (1H, s)]. Phổ 1H-NMR còn xuất hiện hai proton hydroxy của vòng thơm (δH 11,72 và 8,21ppm), trong đó một nhóm OH đợc cố định tại C-5 (δH 11,72) do tạo liên kết cầu hydro với nhóm cacbonyl tại C-4. Vị trí còn lại của một nhóm OH và một nhóm metoxy đợc xác định tại C-6 và C-7.
Tơng tác HMBC của proton thuộc nhóm C-5-OH (11,72) với các cacbon C-4 (102,5), C-5 (148,9), C-6 (127,4) khẳng định thêm vị trí C-5 của nhóm OH này. Cũng
tơng tự nh vậy, tơng tác HMBC giữa proton của nhóm OH còn lại (8,21) với các
cacbon C-7 (156,5), C-6 (127,4), C-5 (148,9) hoàn toàn khẳng định nhóm OH này định vị tại C-6. Tơng tác HMBC của H-8 (δH 6,28) với C-10 (δ102,5), C-7 (156,5), C-6 (127,4) cũng nh tơng tác của các proton metoxy với C-7 (δ156,5) hoàn toàn xác định vị trí của C-7-metoxy.
Cacbon DEPT Độ dịch chuyển hoá học (ppm) Thực nghiêm Tài liệu [15]
2 C 78,6 80,0 3 CH2 42,5 43,9 4 C 197,2 197,0 5 C 149,0 148,3 6 C 127,4 127,8 7 C 156,5 156,2 8 CH 91,7 91,9 9 C 155,1 155,1 10 C 102,5 103,4 1’ C 138,7 138,8 2’,6’ CH 126,6 126,5 3’,4’, 5’ CH 128,5 129,3 11 OCH3 56,1 56,1
Nh vậy các số liệu phổ UV, ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC
so sánh với tài liệu [15], cho thấy cấu trúc của chất 158 là 5,6-dihydroxy-7-methoxy- dihydroflavone.
Hợp chất này lần đầu tiên tìm thấy trong các loài Desmos chinensis [15].
56 6 7 8 9 10 1 2 3 4 1' 2' 3' 4' 5' 6' O H CH3O O O OH (158)5,6-dihydroxy-7-methoxy-dihydroflavone
Hình 4.26:Phổ tử ngoại (UV) của hợp chất 158
Hình 4.28: Phổ 1H-NMR của hợp chất 158
Hình 4.30: Phổ 13C-NMR của hợp chất 158
Hình 4.32:Phổ DEPT của hợp chất 158.
Kết luận
Nghiên cứu thành phần hoá học dây chân chim núi (Desmos cochinchinensis
var. fulvescens Ban)ở Việt Nam chúng tôi đã thu đợc một số kết quả nh sau:
- Bằng các phơng pháp ngâm chiết với các dung môi chọn lọc rồi cất thu hồi dung môi đã thu đợc các cao tơng ứng là cao etylaxetat (47g), cao butanol (60g), pha nớc.
- Phân lập các hợp chất từ cao butanol bằng các phơng pháp sắc ký và kết tinh phân đoạn thu đợc chất 156, 157 và 158.
- Đã tiến hành sử dụng các phơng pháp phổ hiện đại: phổ tử ngoại (UV), phổ khối lợng phun mù (ESI-MS), phổ cộng hởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC và COSY để xác định cấu trúc hợp chất tách đợc. Các kết quả phổ đã cho phép khẳng định chất 156 là 5-hydroxy-3,7-dimethoxyflavone, 157 là izalpinin và