Hợp chất A là chất bột màu trắng. Phổ tử ngoại (UV) cho hấp thụ cực đại 211 và 285nm
Phổ hồng ngoại (IR) cho hấp thụ cực đại ở 3433 (OH), 2959, 1726, 1090 cm-1.
Phổ khối lượng va chạm electron (EI-MS) cho pic ion phân tử m/z
396 tương ứng với công thức phân tử C28H44O.
Phổ 1H-NMR cho thấy có tín hiệu của 6 nhóm metyl δ 0,61 (3H, s), 0,82 (3H, d, J = 6,5 Hz), 0,85 (3H, d, J = 6,5), 0,93 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,96 (3H,s) và 1,05 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1 tín hiệu của proton carbinol ở δ 3,48 (1H, m) và 4 tín hiệu của proton olefinic ở δ 5,28 (1H, dd, J = 15,5, 7,5 Hz), 5,25 (1H, dd, J = 15,5, 7,0Hz), 5,35 (1H, m) và 5,49 (1H, m).
Phổ 13C-NMR cho thấy tín hiệu 28 nguyên tử cacbon bao gồm 6 cacbon olefinic ở δ 116,3, 119,6, 130,0, 135,6, 140,7 và 142,0 và 1 tín hiệu cacbon liên kết với oxy ở δ 70,5.
Bảng 3.1. Số liệu phổ 13C - NMR của hợp chất A
C DEPT δ (ppm)
Thực nghiệm Tài liệu [8]
1 CH2 39,0 38,4 2 CH2 31,5 32,0 3 CH 68,3 70,5 4 CH2 40,4 40,8 5 C 140,3 141,3 6 CH 118,2 119,6 7 CH 115,8 116,3 8 C 139,8 139,8 9 CH 45,5 46,3 10 C 37,7 37,0 11 CH2 20,6 21,1
12 CH2 38,2 39,113 C 42,2 42,8 13 C 42,2 42,8 14 CH 53,6 54,6 15 CH2 22,2 23,0 16 CH2 27,4 28,7 17 CH 55,0 55,7 18 CH3 11,5 12,0 19 CH3 15,8 16,3 20 CH 40,0 40,4 21 CH3 19,1 19,6 22 CH 131,2 132,0 23 CH 135,0 135,6 24 CH 41,8 42,8 25 CH 32,2 33,1 26 CH3 19,4 19,9 27 CH3 20,4 21,1 28 CH3 17,0 17,6
Từ số liệu phổ UV, IR, EI-MS, 1H-, 13C-NMR, DEPT và so sánh với tài liệu [8]cho phép xác định hợp chất A là ergosterol.
Hợp chất ergosterol (hợp chất có trong nhiều loài nấm) được tách ra từ cordyceps, dưới tác dụng của tia cực tím ergosterol có thể bị biến đổi thành vitamin D2 một yếu tố dinh dưỡng có lợi cho sự phát triển của xương ở cả người và động vật. Bên cạnh đó ergosterol là hợp chất có nhiều hoạt tính dược học khác, chẳng hạn như nó có tính độc kháng virus, tác động rõ rệt đối với chứng loạn nhịp tim, chống khối u, điều hòa miễn dịch [36].
OH H
H H
Hình 3.1: Phổ tử ngoại (UV) của chất A
Hình 3.3: Phổ khối lượng (EI-MS) của chất A
Hình 3.5: Phổ 1H-NMR của hợp chất A
Hình 3.7: Phổ 13C-NMR của hợp chất A
Hình 3.9: Phổ 13C-NMR của hợp chất A
Hình 3.13: Phổ HMBC của hợp chất A
Hình 3.20: Phổ COSY của hợp chất A 3.2. Hợp chất B
Hợp chất B thu được dưới dạng thể hình kim không màu.
Trên phổ 13C-NMR xuất hiện tín hiệu của 28 nguyên tử carbon, trong đó có 6 cacbon methyl, 7 methylen, 11 methyl và 4 cacbon không nối với nguyên tử nào được xác định bằng các phổ DEPT 90 và DEPT 135.
Hai nối đôi được xác định 135,2 (C-6), 130,1 (C-7), 135,6 (C-22) và 131,5 (C-23), hai cacbon bậc ba nối với nguyên tử oxi tại 81,4 (C-5) và 78,4 (C-8) cùng với hai tín hiệu carbon của nối đôi tại C-6/C-7 rất đặc trưng cho sự tạo thành liên kết peroxit tại C-6/C-7.
Ngoài ra cũng trên phổ 13C-NMR còn xuất hiện tín hiệu của một cacbon oxymethyl tại δ 64,6 (C-3), và sáu nhóm methyl tại δ 12,5 (C-18), 17,9 (C-19), 20,2 (C-21), 19,4 (C-26), 19,7 (C-27) và 17,2 (C-28).
Trên phổ 1H-NMR, sự có mặt của hai nhóm methyl bậc bốn được nhận biết là hai singlet tại δ 0,87 (s, H-18) và 0,95 (s, H-19), ba nhóm methyl bậc ba tại 0,87 d (J=6,5 Hz, H-26), 0,89 d (J=6,5 Hz, H-27) và 0,96 d (J=7,0 Hz, H-28). Bốn proton của hai nối đôi cũng được xác định tại δ 6,23 (J=8,5 Hz, H-6), 6,44 d (J=8,5 Hz, H-7), 5,28 (m, H-22) và 5,18 (m, H-23) và một proton oxymethyl tại δ 3,58 (m, H-3).
Những dấu hiệu này điện hình cho một hợp chất sterol mà cấu trúc hoá học của nó có thể là esgosterol peroxit. Các dữ liệu phổ của 75 được kiểm tra và so sánh với các dữ liệu phổ tương ứng của esgosterol peroxit và cho kết quả phù hợp. Ngoài ra phổ HSQC và HMBC cũng được thực hiện để xác định chính xác từng giá trị độ dịch chuyển hoá học của cacbon và proton.
Trên phổ HMBC, tương tác của H-6 với C-5/C-10/C-8, tương tác của H-7 với C-5, C-9, tương tác của H-19 với C-1/C-5/C-9/C-10, tương tác của H-18 với C-12/C-13/C-15/C-17, tương tác của H-21 với C-17/C-20/C-22 cũng như tương tác của H-28 với C-23/C-24/C-25 chứng tỏ sự có mặt của nối đôi tại C-6/C-7, C-22/C-23 cũng như sự có mặt của liên kết peroxid tại C-5/C-7. Sự trùng khớp về giá trị độ dịch chuyển hoá học của 75 với esgosterol peroxit cũng cho thấy nhóm hydroxy gắn vào C-3 với cấu hình β.
Công thức phân tử dự kiến là C28H44O3 với khối lượng phân tử là 428 đvc đã được khẳng định bằng kết quả thu được trên phổ khối lượng EI-MS với sự xuất hiện của các pic ion tại m/z 428 [M]+.
Bảng 3.2. Số liệu phổ NMR của hợp chất B
C DEPT δC δH HMBC (H-C)
1 CH2 29,9 1,59 m; 1,85 m
3 CH 64,6 3,58 m 4 CH2 38,7 1,98m 5 C 81,4 - 6 CH 135,2 6,23 d (J = 8,5 Hz) 4,5,7,8,10 7 CH 130,1 6,44 d (J = 8,5 Hz) 5,6,8,9 8 C 78,4 - 9 CH 50,9 1,52 m 10 C 36,9 - 11 CH2 21,7 1,37 m; 1,49m 12 CH2 36,5 1,94 m; 1,99 m 13 C 44,0 - 14 CH 51,2 1,53 m 15 CH2 22,8 1,56 m; 1,26 m 16 CH2 28,2 1,43 m; 1,78 m 17 CH2 55,4 1,28 m 18 CH3 12,5 0,87 s 12,13,14,17 19 CH3 17,9 0,95 s 1,5,9,10 20 CH 40,1 1,98 m 21 CH3 20,2 1,05 d (J=6,5 Hz) 17, 20, 22 22 CH 135,6 5,28 m 23 CH 131,5 5,18 m 24 CH 42,0 1,87 m 25 CH 32,4 1,52 m 26 CH3 19,4 0,87 d (J=6,5 Hz) 24, 25 27 CH3 19,7 0,89 d (J=6,5 Hz) 24, 25 28 CH3 17,2 0,96 d (J= 7,0 Hz) 23, 24, 25
Hình 3.21: Phổ khối lượng của hợp chất B
Hình 3.23: Phổ 1H-NMR của hợp chất B
Hình 3.25: Phổ 13C-NMR của hợp chất B
Từ số liệu phổ thực nghiệm và đối chiếu với tài liệu [8] khẳng định hợp chất B ergosterol peroxit O H O O 3.3. Hợp chất C
Chất bột màu trắng. Phổ khối lượng va chạm electron (EI-MS) cho pic ion phân tử m/z 440 tương ứng với công thức phân tử C30H48O2.
Phổ 1H-NMR có các tín hiệu đặc trưng của 3 proton trên 2 nối đôi C=C tại δ 5,47 ppm là của H-7; δ 5,42 là của H-24 và 5,32 của H-11. Tín hiệu doublet tại δ 3,26 là của proton trên cacbon có nhóm hydroxyl. Ngoài ra còn quan sát thấy tín hiệu singlet của proton trên 6 nhóm metyl liên kết với cacbon bậc bốn tương ứng tại δ 1,00 (H-29); 0,98 (H-19); 0,88 (H-28); 0,88 (H-30); 0,57 (H-18) và 1,67 (H-27) và tín hiệu doublet của nhóm metyl gắn với cacbon bậc ba tại δ 0,92 (H-21), còn có tín hiệu singlet đặc trưng của proton trên cacbon gắn với nhóm hydroxyl là δ 4,00 (H-26).
Phổ 13C-NMR cho thấy có tín hiệu của 30 nguyên tử cacbon bao gồm: 7 nhóm metyl, 9 nhóm metylen, 7 nhóm metin và 7 cacbon bậc bốn. Một số tín hiệu rất trưng của cacbon olefin là δ 146,0 (C-9); 142,7 (C-8); 134,4 (C- 25); 127,0 (C-24); 120,3 (C-7); 116,3 (C-11) và 7 nhóm metyl ứng với các tín hiệu δ 16,0 (C-30); 28,2 (C-29); 26,0 (C-28); (C-19); 18,4 (C-21); 16,0 (C-18); 14,0 (C-27).
Hình 3.48: Phổ 1H của hợp chất C
δ ppm
Thực nghiệm Tài liệu Hình 3.58: Phổ HMBC của hợp chất C
Bảng 3.3. Số liệu phổ của hợp chất C
C DEPT1 CH2 35,8 35,8 1 CH2 35,8 35,8 2 CH2 27,9 27,8 3 CH 79,0 79,0 4 C 38,7 38,7 5 CH 49,2 49,2 6 CH2 23,0 23,1 7 CH 120,3 120,3 8 C 143,0 143,0 9 C 146,0 146,0 10 C 37,4 37,4 11 CH 116,3 116,3 12 CH2 38,0 38,0 13 C 44,0 44,0 14 C 50,3 50,4 15 CH2 32,0 32,0 16 CH2 28,0 28,0 17 CH 51,0 51,0 18 CH3 16,0 16,0 19 CH3 23,0 23,0 20 CH 36,1 36,1 21 CH3 18,4 18,4 22 CH2 36,0 36,0 23 CH2 25,0 25,0 24 CH 127,0 127,0 25 C 134,4 134,3 26 CH2 69,1 69,1 27 CH3 14,0 14,0 28 CH3 26,0 26,0 29 CH3 28,2 28,1 30 CH3 16,0 16,0
Từ số liệu phổ thực nghiệm và đối chiếu tài liệu [8] khẳng định hợp chất C là ganodermadiol.
CH2OH
OH H