4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.2.1. Kiểm tra ñộ s ạch virus PVY trước khi lây nhiễm (sử dụng phương pháp
đánh giá khả năng kháng virus PVY 8 dòng khoai tây nhị bội từ cây in vitro
ựược tiến hành trong ựiều kiện nhà màn cách ly, với cây thuốc lá là cây chỉ thị. Kiểm tra virus bằng DAS Ờ ELISA, 8 dòng khoai tây nhị bội, dòng thuốc lá và một số mẫu khác. Kết quảựược thể hiện ở bảng 4.11.
Bảng 4.11: Giá trị OD405nm của các dòng nhị bội trước khi lây nhiễm
Dòng OD405nm Nhiễm
A15 0,332 Không nhiễm
A16 0,311 Không nhiễm
A41 0,299 Không nhiễm
A56 0,285 Không nhiễm
B186 0,370 Không nhiễm
B208 0,426 Không nhiễm
H1959/195 0,316 Không nhiễm
H1929/34 0,364 Không nhiễm
Thuốc lá 0,291 Không nhiễm
đC (+) OUT Nhiễm
đC (-) O,397 Không nhiễm
Ghi chú:
đC (+): Là ựối chứng dương
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 56
Trên bản ELISA mỗi dòng ựược lặp lại hai lần, vị trắ C3 ựến D6 tương
ứng với vị trắ của 8 dòng nhị bội, vị trắ C1 ựến C2 là cây thuốc lá. Giá trị
OD405nm của 8 dòng nhị bội và cây thuốc lá ựều ở trong khoảng từ 0,285 ựến 0,426 trong ựó vị trắ G3 ựến G4 là ựối chứng âm OD(-) là 0,397. Giá trị
ODdòng/OD(-) < 2 vì vậy 8 dòng nhị bội và giống thuốc lá không bị nhiễm virus PVY. đối chứng dương tương ứng với vị trắ G1, G2 có giá trị OD là OUT > 3 vì vậy hai giếng này ựều nhiễm virus PVY.
Bảng 4.12. Trình tự các mẫu khoai tây kiểm tra ựược tra vào các giếng của bản ELISA (7 ngày sau khi trồng)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6
C TL TL H34 H34 H195 H195 A15 A15 A16 A16 A41 A41
D A56 A56 B186 B186 B208 B208 16 16 17 17 18 18
E 19 19 20 20 21 21 22 22 23 23 24 24
F 25 25 26 26 27 27 28 28 29 29 30 30
G + + - -
H
Hình 4.2: Ảnh chụp phản ứng ELISA trước khi lây nhiễm (7 ngày sau khi trồng)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 57
Quan sát bằng trực quan, tôi thấy rằng các giếng từ C1 ựến D6 tương
ứng với giống thuốc lá và 8 dòng khoai tây nhị bội cho thấy các giếng ựều có màu vàng nhạt như màu ựối chứng âm. Vì vậy, có thể kết luận rằng giống thuốc lá và 8 dòng khoai tây nhị bội không nhiễm virus PVY trước khi lây nhiễm. đối chứng dương cùng với một số giống khoai tây khác cùng kiểm tra
ựều có màu vàng ựậm, có giá trị OD là OUT cho thấy ựều nhiễm virus PVY.