4.1. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của các chất kắch dục tốựến hiệu quả sinh sản cá hồi vân
Cá hồi vân bố mẹ thành thục sử dụng trong thắ nghiệm ựều từ nguồn nuôi cá vỗ thành thục của ựề tài: ỘNghiên cứu quy trình nuôi vỗ thành thục và kắch thắch sinh sản nhân tạo cá hồi vânỢ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 22
- Cá cái: Bụng to, mềm, có phần phụ sinh dục màu hồng ựỏ, mọng, nhô hẳn ra bên ngoài. Dùng que thăm trứng thấy trứng tròn căng, bóng. đó là những con ựã chắn muồi sinh dục có thể tham gia sinh sản.
- Cá ựực: Bụng to, mềm, phần phụ sinh dục lồi ra ngoài, vuốt nhẹ 2 bên thành bụng thấy có sẹ màu trắng sữa chảy ra là những con ựã sẵn sàng tham gia sinh sản.
4.1.2. Bố trắ thắ nghiệm:
Sơựồ thắ nghiệm
Thắ nghiệm ựược bố trắ với 03 nghiệm thức:
- Nghiệm thức I: sử dụng LRHa + DOM, áp dụng 3 công thức sau: + A1: 50 ộg LRH-a + 10 mg DOM/1kg cá cái
+ A2: 30 ộg LRH-a + 10 mg DOM/1kg cá cái
Nghiệm thức II (Não thùy thể) Nghiệm thức I (LRHa + DOM) Nghiệm thức III (Không sử dụng KDT) A1 A2 A3 B1 B2 B3
Các chỉ tiêu theo dõi
- Tỷ lệ cá ựẻ (%)
- Sức sinh sản thực tế (trứng/kg cá cái) - Tỷ lệ thụ tinh (%)
- Tỷ lệ trứng có ựiểm mắt (%) - Tỷ lệ nở (%)
Các chỉ tiêu theo dõi
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 23
+ A3: 10 ộg LRH-a + 10 mg DOM/1kg cá cái
Số cá sử dụng trong nghiệm thức là 13 con (9 cá cái và 4 cá ựực), mỗi công thức ựược tiêm cho 3 con cá cái, cá ựực không cần tiêm.
- Nghiệm thức II: sử dụng não thùy thể cá chép, áp dụng 3 công thức: + B1: 5mg não thùy/kg cá cái,
+ B2: 3mg não thùy/kg cá cái, + B3: 1mg não thùy /kg cá cái.
Số cá sử dụng trong nghiệm thức là 13 con (9 cá cái và 4 cá ựực), mỗi công thức ựược tiêm cho 3 con cá cái, cá ựực không cần tiêm.
- Nghiệm thức III: không sử dụng kắch dục tố. Cho cá ựẻ bằng cách vuốt trứng bình thường. Số cá sử dụng trong nghiệm thức: 42 con (28 cá cái, 14 cá ựực).
Sau khi ựược kắch thắch bằng kắch dục tố, cá hồi vân ựược thả vào các bể sinh sản (nước lưu thông, sục khắ). Tiêm 2 lần ựối với từng công thức và từng loại kắch dục tố, tiêm sơ bộ với liều lượng bằng 1/3 liều lượng kắch dục tố dùng cho mỗi công thức, thời gian giữa 2 lần tiêm cách nhau khoảng 12h.
4.1.3. Phương pháp thụ tinh nhân tạo
- Vuốt trứng riêng vào các chậu khô, sạch sau ựó bắt cá ựực vuốt sẹ lên trứng và trộn ựều. Sau khoảng 30 giây, bổ sung nuớc vào vừa ựủ ngập trứng và trộn tiếp. Cả quá trình khoảng 20 phút. Sau ựó cấp thêm nước, rửa trứng và
ựưa vào khay ấp.
4.1.4. Phương pháp ấp trứng
- Sử dụng hệ thống ấp trứng: Trứng của mỗi một cá cái ựược cho vào 1 khay ấp bố trắ trong một thùng xốp có thể tắch 0,095m3/thùng. Khay ấp ựược thiết kế hình chữ nhật, kắch thước 30 x 45cm có ựục lỗ. Các lỗựục trên khay
ấp có kắch thước ựảm bảo giữ ựược trứng và chỉ cho cá bột mới nở ựi qua theo dòng nước ở bên dưới.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 24
- Tất cả các thùng xốp ựều ựược bố trắ ống dẫn nước vào và ra ựể thay nước liên tục trong quá trình ấp.
4.2. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt ựộựến quá trình ấp nở
4.2.1. Bố trắ thắ nghiệm
- Thắ nghiệm bố trắ ở 3 mức nhiệt ựộ: 10oC, 12oC, 14oC (dùng heater nâng nhiệt ựể ổn ựịnh nhiệt ựộ) và ựối chứng (nhiệt ựộ biến thiên theo môi trường). Tại thời ựiểm bố trắ thắ nghiệm, nhiệt ựộ nước cấp tại Trung tâm là 8oC. Với thể tắch nước trong thùng thắ nghiệm là 30 lắt, tốc ựộ nước thay thế
là 0,69 lắt/phút.
+ Mức 10oC: ựặt nấc nhiệt của heater là 30oC sau 25 phút thì ựạt ựược, sau ựó, chúng tôi lại chỉnh heater xuống nấc 20oC thì ổn ựịnh ựược nhiệt ựộở
10oC.
+ Mức 12oC: ở nấc nhiệt heater 30oC sau 40 phút thì ựạt ựược, khi ựạt
ựến nhiệt ựộ này chúng tôi ựiều chỉnh nấc nhiệt heater xuống 24oC thì nhiệt
ựộ hầu như không có sự thay ựổi.
+ Mức 14oC: đặt heater ở 30oC sau 60 phút thì ựạt 14oC và giữổn ựịnh. Thắ nghiệm ựược bố trắ theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức (mức nhiệt ựộ) ựược lặp lại 3 lần, các yếu tố khác trong quá trình thắ nghiệm
ựược khống chế hoàn toàn giống nhau.
- Trứng ựược ấp trên các khay ấp trứng ựược ựặt trong các thùng xốp, mỗi thùng xốp có bố trắ nhiệt kế thủy ngân ựể theo dõi nhiệt ựộ liên tục trong suốt quá trình thắ nghiệm.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 25
Sơựồ thắ nghiệm
4.2.2. Quản lý và chăm sóc
- Cứ 1 giờ kiểm tra một lần, nếu có sự thay ựổi nhiệt ựộ của nước cấp thì ựiều chỉnh heater ựể ổn ựịnh nhiệt ựộ thắ nghiệm. Trong suốt quá trình thắ nghiệm, mức nhiệt ựộựạt ựược với sai số ổ 0,5oC.
- Hút trứng hỏng 4 lần/ngày.
- Xiphon ựáy thùng ựể loại bỏ cặn bẩn.
- định kỳ 2 - 3 ngày tắm trứng 1 lần bằng Formalin với tỷ lệ 1:600 (1phần formalin và 600 phần nước) trong khoảng 5 - 10 phút ựể hạn chế nấm phát triển.
- Các yếu tố môi trường (nhiệt ựộ, DO) ựược theo dõi thường xuyên trong quá trình ấp trứng. Trứng cá hồi vân ựã thụ tinh Lô 1 10oC Lô 2 12oC Lô 3 14oC Lô 4 đối chứng
được ấp trên 12 khay ấp ựặt trong 12 thùng xốp theo 3 mức nhiệt ựộ: 10oC, 12oC, 14oC và lô ựối chứng.
Mỗi lô thắ nghiệm ựược lặp lại 3 lần.
Số trứng trên mỗi khay ấp là như nhau (2000 trứng/khay).
Theo dõi các chỉ tiêu
- Tỷ lệ trứng có ựiểm mắt (%) - Thời gian ấp nở (ngày) - Tỷ lệ nở (%)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 26
4.3. Phương pháp thu thập và phân tắch số liệu
* Phương pháp xác ựịnh một số chỉ tiêu sinh sản:
- Thời gian hiệu ứng: ựược xác ựịnh từ lúc tiêm kắch dục tố ựến lúc cá ựẻ
(có thể vuốt trứng)
Số cá vuốt ựược trứng - Tỷ lệ cá ựẻ =
Số cá ựược chọn cho ựẻ
Số trứng thu ựược sau khi cá ựẻ
- Sức sinh sản thực tế (trứng/kg cá cái) = Khối lượng cá cái (kg) Số trứng thụ tinh - Tỷ lệ thụ tinh (%) = Tổng số trứng theo dõi x 100 Số trứng xuất hiện ựiểm mắt - Tỷ lệ trứng có ựiểm mắt (%) = S ố trứng thụ tinh x 100
* Phương pháp thu thập, xử lý và phân tắch số liệu
- Các yếu tố môi trường như nhiệt ựộ, hàm lượng ôxy hòa tan ựược ựo ngày 2 lần (6h và 14h) bằng máy ựo hiệu HACH, nhiệt kế thủy ngân.
- Lấy mẫu 20gam trứng của mỗi cá cái ựể ựếm số lượng trứng, qua ựó, xác ựịnh ựược số lượng trứng thu ựược.
- Lấy mẫu 100 trứng ựể theo dõi tỷ lệ thụ tinh của trứng cá hồi vân. - Theo dõi, ghi chép số lượng trứng hỏng hàng ngày ựể tắnh số trứng thụ
tinh, số trứng có ựiểm mắt, số cá nở.
- Số liệu ựược tổng hợp và phân tắch trên phần mềm EXCEL. Số cá nở ra - Tỷ lệ nở (%) = Tổng số trứng thụ tinh x 100 Số cá bị dị hình - Tỷ lệ dị hình (%) = Tổng số cá bột x 100
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 27
PHẦN IV. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 1. Sự biến ựộng một số yếu tố môi trường trong quá trình thắ nghiệm
1.1. Nhiệt ựộ
Kết quả theo dõi sự biến ựộng nhiệt ựộ không khắ và nhiệt ựộ nước cấp trong thời gian thắ nghiệm ựược thể hiện qua ựồ thị hình 4.1.
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 11/0 2/20 09 16/0 2/20 09 21/0 2/20 09 26/0 2/20 09 03/0 3/20 09 08/0 3/20 09 13/0 3/20 09 18/0 3/20 09 23/0 3/20 09 Thời gian N h i ệ t ự ộ ( o C )
Nhiệt ựộ nước cấp Nhiệt ựộ không khắ
Hình 4.1. Biến ựộng nhiệt ựộ không khắ, nhiệt ựộ nước cấp
Trong thời gian thắ nghiệm, sự biến ựộng nhiệt ựộ không khắ là khá lớn, kể cả giữa các thời ựiểm trong ngày. Nhiệt ựộ không khắ thấp nhất là 5,1oC cao nhất là 15,7oC. Tuy nhiên, nhiệt ựộ nước cấp lại tương ựối ổn ựịnh, chỉ
biến ựộng trong khoảng từ 7 - 9,5oC, ựạt trung bình là trên 8oC. Nhiệt ựộ nước cấp và nhiệt ựộ nước trong các bể nuôi, bể kắch thắch sinh sản, bể ấp trứng gần như không có sự khác biệt. Nhiệt ựộ nước có xu thế tăng dần trong quá trình thắ nghiệm, tương ựồng với sự tăng của nhiệt ựộ không khắ, do lúc này khắ hậu chuyển dần từ mùa ựông sang mùa xuân. Mặc dù có những thời ựiểm nhiệt ựộ không khắ xuống thấp do thời tiết sương mù, nhưng ựiều này ắt ảnh hưởng ựến sự biến ựộng của nhiệt ựộ nước, do sự biến ựổi của nhiệt ựộ không khắ diễn ra rất nhanh.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 28
Như vậy, khoảng nhiệt ựộ này cũng gần như khoảng nhiệt ựộ trong nghiên cứu của Hokanson (1977); Leifritz và ctv (1976): Nhiệt ựộ phù hợp cho cá hồi vân sinh sản là từ 8 - 14oC, nhiệt ựộ ấp trứng cá hồi thường trên 4,5oC nếu thấp hơn sẽ làm ảnh hưởng ựến trứng và chất lượng cá hồi giống.
1.2. Hàm lượng ôxy hòa tan
Hàm lượng ôxy hòa tan trong suốt quá trình thắ nghiệm phụ thuộc rất rõ rệt vào ựiều kiện cung cấp nước của cơ sở, chỉ số này tăng cao vào thời ựiểm nguồn nước cung cấp ổn ựịnh; và giảm thấp khi nguồn nước cấp bị thiếu. Trong thời gian thắ nghiệm, hàm lượng ôxy hòa tan của nước cấp ựạt trung bình 8,03 mgO2/l và thấp nhất là 7,28 mgO2/l.
Trong thắ nghiệm ảnh hưởng của các chất kắch dục tốựến hiệu quả sinh sản cá hồi vân, các bể kắch thắch sinh sản luôn ựược sục khắ, cộng với việc nước ựược trao ựổi liên tục nên hàm lượng ôxy hòa tan cao và hầu như không có sự chênh lệch giữa các bể. 6 6.5 7 7.5 8 8.5 12/0 2/09 19/0 2/09 26/0 2/09 05/0 3/09 12/0 3/09 19/0 3/09 26/0 3/09
Ngày theo dõi
H à m l ư ợ n g D O (m g /l ) DO cấp Thùng I Thùng II Thùng III đối chứng
Hình 4.2. Biến ựộng hàm lượng ôxy hòa tan nước cấp, các thùng ấp trứng trong thời gian thắ nghiệm
đối với thắ nghiệm ảnh hưởng của nhiệt ựộ ựến quá trình ấp nở, hàm lượng ôxy hòa tan trong các thùng ấp thấp hơn so với hàm lượng ôxy trong
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 29
nước cấp, tuy nhiên, sự chênh lệch này không ựáng kể. Nguyên nhân là: tại các thùng ấp trứng ựã ựược chúng tôi bố trắ hệ thống cấp thoát nước và sự tiêu hao ôxy trong quá trình ấp trứng cũng rất nhỏ. Qua kết quả thu ựược, chúng tôi nhận thấy hàm lượng ôxy hòa tan trong quá trình thắ nghiệm ở các thùng
ấp trứng cũng giảm dần theo thời gian, lý giải ựiều này ựó là: quá trình ấp trứng ựã có trứng hỏng, nước trong các thùng ấp ngày càng ô nhiễm hơn (mặc dù chúng tôi ựã tiến hành hút trứng hỏng và xiphon thường xuyên).
Hàm lượng ôxy hòa tan ở các thùng thắ nghiệm ựạt trung bình là 7,93mgO2/l và thấp nhất ựạt 6,45mgO2/l (do sự biến ựộng ựột ngột, không kéo dài). Kết quả này không quá chênh lệch so với kết quả của Dự án nhập công nghệ sản xuất giống cá hồi vân (do Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản 1 chủ trì thực hiện ngay tại Trung tâm): hàm lượng ôxy trung bình ựạt 8,2 mgO2/l và thấp nhất ựạt 7,5mgO2/l (Nguyễn Công Dân, 2006).
2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các loại kắch dục tố ựến hiệu quả
sinh sản cá hồi vân
2.1. Thời gian hiệu ứng (phút)
Thời gian hiệu ứng của từng công thức kắch dục tố ựối với sự sinh sản của cá hồi vân ựược trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Thời gian hiệu ứng (phút) của cá hồi vân thắ nghiệm Nghiệm thức I Nghiệm thức II A1 A2 A3 B1 B2 B3 Lặp 1 120 350 830 150 440 x Lặp 2 135 345 1045 x 455 x Lặp 3 135 385 1065 160 460 765 TB 130 ổ 5 360 ổ 13 980 ổ 75 155 ổ 5 452 ổ 6 765
Ghi chú:dấu ỘxỢ biểu thị cho những công thức không có kết quả về thời gian hiệu ứng
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 30
Qua kết quảựược trình bày ở bảng 4.1 và biểu ựồ hình 4.3, chúng ta có thể nhận thấy rõ sự chênh lệch khá lớn về thời gian hiệu ứng giữa các liều lượng chất kắch thắch sinh sản ựối với cá hồi vân trong cùng một nghiệm thức. Bên cạnh ựó, sự dao ựộng về thời gian hiệu ứng giữa các công thức của nghiệm thức I thấp hơn so với nghiệm thức II. Ở nghiệm thức I, thời gian hiệu
ứng dài nhất (trung bình 980 phút) ựược ghi nhận tại công thức A3, ngắn nhất (trung bình 130 phút) ở công thức A1. Còn ở nghiệm thức II, thời gian hiệu
ứng dài nhất tại công thức B3 (765 phút) và ngắn nhất tại công thức B1 (155 phút). điều ựó chứng tỏ rằng: liều lượng kắch dục tố ựã ảnh hưởng ựến thời gian hiệu ứng của cá hồi vân.
Cũng qua bảng 4.1 và kết quả tắnh sai số chuẩn (SE), chúng tôi nhận thấy trong cùng công thức A3 (SE = 75), sự chênh lệch về thời gian hiệu ứng giữa các lần lặp là khá lớn. Còn ở các công thức còn lại của cả 2 nghiệm thức, sự chênh lệch giữa các lần lặp trong cùng công thức không ựáng kể.
A1 A2 A3 B1 B2 B3 0 200 400 600 800 1000 1200 Công thức nghiên cứu T h ờ i gi an h i ệ u ứ n g (p h ú t)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệpẦẦẦ 31
Tuy nhiên, trong quá trình thắ nghiệm, tại công thức B1 chỉ tắnh thời gian hiệu ứng ựược cho 2 lần lặp (lần 1 và lần 3). Riêng ở lần lặp thứ 2, sau khi tiêm liều sơ bộ (10 giờ 35 phút), chúng tôi phát hiện cá chảy trứng nên ựã tiến hành cho ựẻ. Tại công thức B3, với 3 lần lặp thì chỉ có lần lặp thứ 3 mới