3. NỘI DUNG, ðỐ I TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.3.2Phương phỏp xỏc ủị nh số loại và số lượng vi khuẩn
3.3.2.1. Phương phỏp xỏc ủịnh số loại vi khuẩn
Mỗi loại vi khuẩn khi mọc trờn cỏc mụi trường thỡ khuẩn lạc cú ủặc tớnh mọc ủặc trưng. Dựa vào những ủặc ủiểm ủặc trưng ủú ủể xỏc ủịnh loại vi khuẩn cú trong mẫu dịch tử cung.
- Mụi trường thạch thường:
+ Staphylococcus: khuẩn lạc dạng S, trũn búng, rỡa gọn, mặt lồi, cú
màu vàng.
+ Streptococcus: khuẩn lạc dạng S, nhỏ, màu hơi xỏm, búng.
+ Salmonella: khuẩn lạc dạng S, cú thể dạng R, trũn, trong hoặc hơi
xỏm, nhẵn búng, hơi lồi lờn ở giữa.
+E. Coli: khuẩn lạc dạng S, cú thể dạng R, trũn, ướt, màu tro hay trắng
nhạt, hơi lồi.
- Mụi trường thạch MacConkey:
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 44
+ Salmonella: khuẩn lạc trũn, trong khụng màu, nhẵn búng, hơi
lồi ở giữa.
- Mụi trường thạch Birrilliant Green Agar:
+ E. Coli: khuẩn lạc dạng S, màu vàng chanh.
+ Salmonella: khuẩn lạc dạng S, màu hồng nhạt.
- Mụi trường Chapman:
+ Staphylococcus: khuẩn lạc to, rỡa gọn, nếu là tụ cầu gõy bệnh
làm mụi trường biến màu vàng, nếu là tụ cầu khụng gõy bệnh: mụi trường màu ủỏ.
- Mụi trường Edwards Medium:
+ Streptococcus: vi khuẩn mọc tốt, khuẩn lạc nhỏ, mịn, ướt, mặt hơi
lồi, trong sỏng.
Trờn cơ sở ủú sau khi nuụi cấy mẫu trờn mụi trường thạch thường trong tủ ấm 37oC/18- 24 giờ, quan sỏt hỡnh thỏi và kớch thước khuẩn lạc ta cú thể phõn loại và xỏc ủịnh ủược số lượng của từng loại. Sau ủú tiến hành phõn lập, giỏm ủịnh cỏc khuẩn lạc ủú bằng cỏch chọn cỏc khuẩn lạc ủiển hỡnh cho từng loại vi khuẩn cấy sang cỏc mụi trường chuyờn dụng.
3.3.2.2. Phương phỏp xỏc ủịnh số lượng vi khuẩn
- Chỳng tụi sử dụng phương phỏp Koch: ủể cú thể ủếm ủược số khuẩn lạc trờn mụi trường thạch thường, tuỳ theo số vi khuẩn cú trong bệnh phẩm. Mẫu xột nghiệm cần phải pha loóng ủến mức ủộ cần thiết. Sau nhiều lần cấy mẫu với cỏc ủộ pha loóng khỏc nhau, chỳng tụi ủó xỏc ủịnh ủựơc ủộ pha loóng thớch hợp với cỏc bệnh phẩm như sau:
+ Dịch tử cung lợn sau ủẻ là: 10-4.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 45 - Sau khi pha loóng, chỳng tụi tiến hành cấy vi khuẩn vào ủĩa thạch. Cấy dịch pha loóng mẫu trong mụi trường thạch cứng rồi ủếm số lượng khuẩn lạc (CFU). Số lượng CFU tương ủương với số lượng vi khuẩn. ðể cú kết quả chớnh xỏc, cần thống nhất nhiệt ủộ và thời gian nuụi cấy. Số vi khuẩn cú trong 1 ml dịch mẫu ủược tớnh theo cụng thức:
X= 10.A/N
Trong ủú: X: số khuẩn lạc trong 1ml dịch.
A: số khuẩn lạc trung bỡnh trờn một ủĩa petri. N: ủộ pha loóng. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.3.3 Xỏc ủịnh ủộ mẫn cảm của cỏc chủng vi khuẩn và tập ủoàn vi khuẩn phõn lập ủược từ dịch tử cung lợn với thuốc khỏng sinh.