Thông qua giải phẫu quan sát tuyến sinh dục (TSD) cá nhệch có cấu tạo là hai dải nằm sát và phân bốñều hai bên xương sống lưng, TSD kéo dài từ cổ
Vây cá
ñực
Vây cá cái
qua hậu môn ñến gần hết thận. ðối với cá kích cỡ nhỏ (<50g/con), quan sát tuyến sinh dục bằng mắt thường khó phân biệt TSD cá ñực và cá cái.
Hình 4.2. Hình thái ngoài TSD cá ñực
TSD cá ñực là hai dải mầu trắng sữa, nhìn bề ngoài noãn sào ñược cấu tạo gồm những thuỳ hình quả thận, những thuỳ phân bốñều khắp ở cả hai dải trên toàn bộ tuyến. Ở những giai ñoạn phát triển ñầu thì TSD ñực là hai dải nhỏ, mảnh, khoảng cách các khe giữa các thuỳ còn nhỏ. Càng phát triển về
sau thì kích thước và khối lượng TSD càng tăng, các thuỳ này cũng to và khoảng cách này cũng tăng lên ñáng kể.
Tuyến sinh dục cá cái có cấu tạo hình hai dải gợn sóng, giai ñoạn ñầu nhỏ mảnh màu trong, giai ñoạn phát triển về sau có màu vàng nhạt và ñậm dần. Kích thước của buồng trứng tăng dần theo các giai ñoạn phát triển, giai
ñoạn cuối ñạt buồng trứng ñạt khối lượng và kích thước cực ñại, có mầu vàng
ñậm (hình 4.2).
4.1.3. Môi trường ao nuôi nhốt cá Nhệch
Trong quá trình chăm sóc thí nghiệm, ñịnh kỳ tiến hành thay và cấp nước ñảm bảo môi trường sạch giúp cho cá sinh trưởng và phát triển ñiều kiện thuận lợi. Kết quả theo dõi một số chỉ tiêu môi trường thể hiện trong hình sau: 0 5 10 15 20 25 30 35 T4/10 T5/10 T6/10 T7/10 T8/10 T9/10 T10/10 T11/10 T12/10 T1/11 T 2/11 T3/11 Thời gian nuôi (tháng) T0 nước pH S‰ DO (mg/l )
Hình 4.4. Biến ñộng môi trường ao nuôi nhốt cá Nhệch
Ở ñiều kiện nước lợ ñặc thù lớn nhất là biên ñộ dao ñộng ñộ mặn lớn trong các tháng trong năm. ðộ mặn cao nhất ñạt 220/00 vào tháng 4,5 và giá trị
thấp nhất vào tháng 8,9 là 8 0/00. ðộ mặn liên quan lớn ñến lượng mưa, vào các tháng mùa mưa (7,8) ñộ mặn giảm thấp. Cá Nhệch chịu biến ñộng ñộ mặn lớn trong vùng triều, chúng có khả năng sinh trưởng bình thường ở ñộ mặn dao ñộng từ 50/00ñến 300/00.
Kết quả theo dõi nhiệt ñộ trong các tháng nuôi cho thấy có sự biến ñộng lớn qua các tháng nuôi. Các tháng mùa hè, nhiệt ñộ rất cao lên ñến 350C, trong khi ñó các tháng mùa ñông nhiệt ñộ rất thấp. Mặc dầu là loài bản ñịa nhưng khi nhiệt ñộ thấp (<150C) cá nhệch giảm bắt mồi, thường trú ẩn trong hang. Hàm lượng ôxy hoà tan trong ao luôn ñạt giá trị trên 5mg/l luôn phù hợp cho cá sinh trưởng và phát triển. Cá Nhệch thuộc nhóm cá sống ñáy, có cơ quan hô hấp phụ nên nhu cầu ôxy thấp.
4.1.4. Sinh trưởng của ñàn cá trong ñiều kiện nuôi nhốt.
Cá Nhệch sinh trưởng và phát triển tốt trong ñiều kiện nước lợ. Kết quả
theo dõi sinh trưởng theo khối lượng của ñàn cá sau 12 tháng nuôi ñạt khối lượng trung bình 302± 32,22 g và 82,1 ± 7,95 cm chiều dài.
Bảng 4.1: Tăng trưởng khối lượng và chiều dài của ñàn cá nuôi
Các thông số Giá trị trung bình ± SD
Lt cá ban ñầu thí nghiệm (cm) 60,2 ± 9,20 Lt cá sau 12 tháng (cm) 82,1 ± 7,95 ADG (cm/ngày) 0,06 ± 0,002 W cá ban ñầu (gr) 125 ± 25,20 W cá sau 12 tháng (gr) 302± 32,22 ADG (gr/ngày) 0,48 ± 0,005 Hệ số chuyển ñổi thức ăn FCR 4,2:1
Cá Nhệch sinh trưởng nhanh trong mùa hè và chậm dần vào các tháng mùa ñông khi nhiệt ñộ giảm thấp. Nhiệt ñộ xuống quá thấp (<120C), cá không
ñi ăn, chui trong hang. So sánh với tốc ñộ sinh trưởng của cá nuôi năm 2008, 2009 sinh trưởng của ñàn cá thí nghiệm của chúng tôi có tốc ñộ sinh trưởng tương ñương.
4.1.5. Cơ cấu giới tính quần ñàn cá Nhệch nuôi
ðểñánh giá cơ cấu giới tính của ñàn cá nuôi, trong quá trình thực hiện nghiên cứu ñã tiến hành thu và mổ tổng số 360 con, ñánh giá tỷ lệ giới tính theo kích cỡ cá.
Tỷ lệ giới tính ñực cái thay ñổi theo kích cỡ của cá và thay ñổi tương
ứng với sinh trưởng của ñàn cá nuôi qua các tháng. Ở nhóm có khối lượng 100 – 150g, xác ñịnh ñược tỷ lệ ñực cao nhất 57%, sau ñó là cái 35%, số cá phân biệt không rõ ràng chiếm số lượng nhỏ 8% (hệ số tương quan r = 0,67). Khi cá ñạt ñến khối lượng 250g – 300g tỷ lệ cá ñực chiếm 12% (r = 0,65), ñối với cỡ cá lớn hơn 300g/con không có sự xuất hiện cá ñực (r=0,91). 0 20 40 60 80 100 120 100g - 150/con 151 ñến 200 g/con >201 ñến 250 g/con 250 - 300g >300g Khối lượng (gram/con) T ỷ l ệ g i ớ i tí n h ( % ) ðực Cái Không rõ ràng n =360 Hình 4.5. Tỷ lệ % cá ñực và cá cái ở từng cỡ cá
ðối với quan hệ giữa chiều dài của cá với giới tính kết quả cho thấy: ở
nhóm cá có chiều dài 50 – 60cm, tỷ lệ ñực cái là 50% cá ñực, 40 % cái và 10% cá chưa xác ñịnh giới tính (r = 0,64). Ở nhóm cá có chiều dài 60 – 70cm, tỷ lệ cá ñực giảm nhanh từ 60% xuống 30%, tỷ lệ cá cái tăng lên 60%, loại không xác ñịnh là 9% (r = 0,67). Ở nhóm cá có chiều dài 70 – 80 cm, chủ yếu là cá cái chiếm 83%, cá ñực 13% và còn lại là không xác ñịnh giới tính (r = 0,68). Ở cá có chiều dài > 80cm, tỷ lệ cá cái chiếm 100% (r = 0,90)
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00 100,00 Thán g 4 Thán g 5 Thán g 6 Thán g 7 Thán g 8 Thán g 9 Thán g 10 Thán g 11 Thán g 12 Thán g 1 Thán g 2 Thán g 3 Tháng the o dõi T ỷ l ệ g i ớ i tí n h ( % ) ðực Cái Không rõ ràng 0 20 40 60 80 100 120 140 50 ñến 60 cm 60 ñến 70 cm > 70 - 80cm >80cm Nhóm chiều dài (cm) T ỷ l ệ g i ớ i tí n h ( % ) ðực Cái Không rõ ràng n =360
Hình 4.6. Tỷ lệ giới tính theo chiều dài ở từng cỡ cá
Sự thay ñổi tỷ lệ ñực cái trong ñàn cá nuôi nhốt càng biểu hiện rõ rệt qua các tháng nuôi nhốt. Tỷ lệ cá ñực ngày càng giảm ñi, cá cái tăng lên. Vào tháng 6,7 tỷ lệ cái cao nhất (50% ñực và 42% cái).
Hình 4.7. Cơ cấu giới tính của ñàn cá trong các tháng nuôi nhốt
4.2. Nghiên cứu quá trình thành thục của cá Nhệch trong ñiều kiện nuôi
4.2.1. Sự phát triển về tổ chức học của tuyến sinh dục
4.2.1.1. Các giai ñoạn phát triển của noãn sào
Tuyến sinh dục giai ñoạn này có dạng sợi mảnh, trong suốt: tế bào sinh dục là các nguyên bào và các noãn bào. Noãn bào có nhiều gốc cạnh, kích thước rất nhỏ, tế bào chất ưa kiềm nên bắt màu tím của hematoxylin mạnh, nhân ưa kiềm yếu nên bắt màu nhạt, số tiểu hạch ít. Ở giai ñoạn này, noãn nguyên bào ñang lớn lên. Buồng trứng những cá cái ở giai ñoạn này có những vùng trứng phát triển khác nhau thấy rõ về kích thước, ñó là vùng mầm và vùng tế bào trứng thuộc giai ñoạn lớn (ít) ñang xảy ra sự biến ñổi về nhân.
ðặc trưng của vùng mầm là sự phân bào nguyên nhiễm ñể tăng lên về số
lượng và bắt ñầu có những biến ñổi nhân ñể hình thành noãn bào 1. Các tế
bào này nhỏ, ñường kính trung bình 50µm (nhỏ nhất là 25µm và lớn nhất 72µm). Nhân tế các tế bào ở vùng này thường có hình tròn, to bên trong có nhiều hạt nhiễm sắc thể bắt màu Hematoxylin ñậm (Hình 4.8). Khi các noãn nguyên bào phân chia ñến một giai ñoạn nhất ñịnh sẽ trở thành các tế bào lớn ít và trở thành noãn bào 1.
Hình 4.8: Noãn bào ở giai ñoạn I (phóng ñại 400 lần).
(2)Giai ñoạn II
Tuyến sinh dục bắt ñầu phát triển, màu trắng nhạt, dày và bản rộng hơn giai ñoạn 1, có sự phân bố của các mạch máu. Giai ñoạn này tìm thấy ở vào các tháng 3,4 và tháng 8,9 Các tế bào lớn ít Noãn nguyên bào
Hình 4.9: Noãn bào ở giai ñoạn II (phóng ñại 800 lần).
Noãn bào ñược bao bọc bởi lớp màng follicul mỏng. Màng follicul
ñược cấu tạo bởi nhiều lớp tế bào có chức năng vận chuyển chất dinh dưỡng vào trứng, những tế bào này xếp lại với nhau tạo ra những túi hay nang và gọi chúng là tế bào nang. Noãn bào giai ñoạn này có kích thước trung bình 95µm, noãn bào nhỏ nhất có kích thước là 52µm và lớn nhất có kích thước là 160µm.
ðặc trưng chủ yếu của giai ñoạn II là sự biến ñổi của nhân. Các noãn bào thường có nhân tròn, lớn, bắt màu nhạt và chiếm phần lớn thể tích của tế
bào. Quan sát kỹ trong nhân có thể thấy nhân có các nhiễm sắc thế dạng sợi, nhân có một số tiểu hạch nhỏ bắt màu ñậm. Các tiểu hạch xuất hiện ở vùng ngoại biên nhân, tạo thành vòng tròn xung quanh nhân (Hình 4.9)
(3)Giai ñoạn III
Do sự xuất hiện của các sắc tố nên màu sắc TSD có sự thay ñổi. Buồng trứng có màu vàng nhạt, kích thước buồng trứng tăng lên và chiếm thể tích
ñáng kể trong xoang bụng. Có thể nhìn rõ hạt trứng qua các lớp màng trong suốt có thể thấy rõ bằng mắt thường, nhưng không rễ tách rời chúng ra. Các mạch máu to, có nhiều nhánh và phân bố cũng rõ ràng.
Nhân tb Các sợi NST Tiểu hạch Tế bào chất
Hình 4.10: Noãn bào ở giai ñoạn III (phóng ñại 1000 lần).
Noãn bào thuộc giai ñoạn này ñược tìm thấy ở cá cái có tuổi 3+. Kích thước trung bình của noãn bào giai ñoạn này là 261µm (nhỏ nhất là 119µm và lớn nhất là 367µm). Trong noãn bào xuất hiện các khoang nhỏ gọi là không bào, noãn bào ở giai ñoạn này có một ñến hai lớp không bào. Các không bào ban ñầu xuất hiện ở vùng tế bào chất ngoại vi, sát với màng tế bào
(4)Giai ñoạn IV
Buồng trứng ñạt kích thước tối ña, chiếm phần lớn trong xoang bụng. Các hạt trứng ở giai ñoạn này ñầy ñặn và có thể tách rời. Toàn bộ buồng trứng có màu vàng ñậm, ñó là màu của noãn hoàng. Các mạch máu phân bố ñầy trên buồng trứng.
Hình 4.11: Noãn bào ở giai ñoạn IV (phóng ñại 1000 lần)
Hạch nhân Khối noãn
hoàng Hạch nhân
Noãn bào giai ñoạn này có sự thay ñổi rõ nét, noãn hoàng chứa ñầy thể
tích của noãn bào và có màu hồng sáng ở dạng hạt hình cầu, các hạt noãn hoàng kết thành khối. Nhân co lại, màng nhân tiêu biến, hầu hết hạch nhân chuyển về trung tâm của nhân. Kích thước noãn bào ñạt cực ñại, ñường kính trứng trung bình là 615µm (nhỏ nhất là 381µm và lớn nhất là 905µm)
(5)Giai ñoạn V
Giai ñoạn chín muồi và rụng trứng, giai ñoạn này diễn ra rất ngắn, trứng ñược giải phóng ra khỏi nang và vỏ mô liên kết. Kích thước của noãn bào giai ñoạn này hầu như không có thay ñổi so với noãn bào giai ñoạn IV. Nhân của noãn bào ñã di chuyển về phía cực ñộng vật.
Hình 4.12. Noãn bào ở giai ñoạn V (phóng ñại 1000 lần)
Ở giai ñoạn này, tế bào biểu mô nang tiết ra chất làm tan và hấp thụ lớp biểu mô giữa nang trứng và tế bào. Do ñó tế bào trứng có thể rơi tự do vào xoang buồng trứng và chảy ra ngoài qua ống dẫn trứng.
(6)Giai ñoạn VI
Chúng tôi bắt gặp giai ñoạn này ñối với những con cái bị thoái hoá trứng có biểu hiện yếu, một số cá thể bị chết. Cá ñã qua vụ ñẻ nhưng không ñẻñược, buồng trứng vẫn căng nhưng trứng ñã thoái hoá có màu ñậm không ñều. Hạt
trứng bết vào nhau và thiếu tính ñàn hồi. Màng tế bào dầy lên, hạt noãn hoàng biến màu và phân ra.
Hình 4.13. Các noãn bào ở giai ñoạn thoái hoá
4.2.1.2. Các giai ñoạn phát triển của tinh sào
Hình 4.14. Lát cắt dọc thuỳ tinh hoàn cá ñực (phóng ñại 400 lần)
Giai ñoạn I
Tuyến sinh dục cá ñực là hai dải rất nhỏ, trong suốt, không thấy rõ
ñược các thuỳ. Các tế bào sinh dục ñực ở giai ñoạn này chủ yếu ở dạng các tinh nguyên bào. Các tinh nguyên bào rất dày, nằm sát nhau trong các nang tinh. Tuyến sinh dục giai ñoạn này tìm thấy ở những cá ñực tuổi < tuổi 1+ và một sốở tuổi 1+.
Hình 4.15. TSD ñực ở giai ñoạn I (phóng ñại 400 lần)
Giai ñoạn II: TSD tăng lên về kích thước và khối lượng, có màu trắng hơi
ñục, ñã thấy rõ các thuỳ cong hình cung hướng ra phía bên ngoài TSD. Ở giai
ñoạn này có sự xuất hiện của các tinh bào 1. Các tinh bào 1 xuất hiện vào thời
ñiểm mà các tinh nguyên bào kết thúc quá trình tăng trưởng, lớn lên và trở
thành tinh bào 1. Sau một loạt các diễn biến xảy ra trong nhân, một tinh bào 1 sẽ phân chia thành hai tế bào nhỏ hơn gọi là tinh bào 2. Tuyến sinh dục giai
ñoạn này tìm thấy chủ yếu ở những cá ñực có tuổi 1+
Hình 4.16. TSD ñực ở giai ñoạn II (phóng ñại 1000 lần)
Hình 4.17. TSD ñực ở giai ñoạn III (phóng ñại 1000 lần)
Giai ñoạn tiền thành thục, các tinh bào 2 phân chia và tạo nên các tinh tử. Cũng giống như tinh bào 1, một tinh bào 2 phân chia sẽ cho ra hai tinh tử. Các tinh bào 2 chỉ tồn tại trong thời gian tương ñối ngắn vì vậy trên tiêu bản quan sát thấy chủ yếu là các tinh tử chứa trong các xoang, một số ít là các tinh bào 1, và tinh nguyên bào. Chưa thấy có sự xuất hiện của tinh trùng giai ñoạn này (Hình 4.17). Những cá thể có TSD phát triển ở giai ñoạn này có tuổi 1+và 2+.
Giai ñoạn IV: Tinh hoàn thành thục, có màu trắng sữa, kích thước tinh hoàn tăng lên rất nhiều, các thuỳ của tinh hoàn to và căng nhưng vẫn còn khô. Tinh trùng có nhiều trong các nang tinh, các tinh tử và tinh bào 2 ít hơn nhiều so với giai ñoạn III (Hình 4.18). Tuyến sinh dục phát triển ở giai ñoạn này ñược tìm thấy chủ yếu ở những cá ñực tuổi 2+.
Giai ñoạn V
Hình 4.19. TSD ñực ở giai ñoạn V
Tinh hoàn sẵn sàng hoạt ñộng, có màu trắng sữa, mềm, các thuỳ căng và mọng. Quan sát TSD ñực lúc này có thể thấy sẹ chảy ra theo ống tinh. Tinh trùng giai ñoạn này chứa ñầy trong các bao tinh (Hình 4.19). Tuyến sinh dục phát triển ở giai ñoạn này tìm thấy ở nhứng cá ñực có tuổi 2+ và một số rất ít ở
tuổi 3+ và vào các tháng 5,6 và tháng 9,10
4.2.1.3. Tuyến sinh dục ở cá có cả tế bào trứng và tinh sào
Kết quả kiểm tra mẫu cắt lát tuyến sinh dục vào tháng 7,8 cho thấy có chúng tôi nhận thấy ở những tiêu bản TSD cá ñực có những vùng tế bào sinh