3. đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.2 Phương pháp nghiên cứu
3.2.2.1 Phương pháp ựiều tra, thu thập thành phần sâu mọt hại nguyên liệu thuốc Bắc nhập khẩu và thiên ựịch của chúng
* Phương pháp ựiều tra, thu thập mẫu: Thời gian ựiều tra lấy mẫu: định kỳ 10 ngày một lần, ựiều tra thường xuyên trên nguyên liệu thuốc Bắc
+ Mẫu ựược lấy theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4731-89. Kiểm tra kiểm dịch thực vật theo tiêu chuẩn ngành: 10TCN 336-98; 10 TCN 337:2006, 10TCN 336-98;10 TCN 950:2006...
Các ựiểm lấy mẫu ựược quy ựịnh như sau: x x x x x X X X X X X X X X X X X X X X b a a=b mặt trên mặt quy ước mặt ựáy
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 22 + Dùng bộ rây sàng côn trùng có kắch thước mắt sàng khác nhau ựể tách sâu mọt sâu mọt gây hại nguyên liệu thuốc Bắc nhập khẩu.
+ Thu thập sâu mọt trực tiếp trên nguyên liệu thuốc Bắc bằng bút lông cho vào ống nghiệm.
+ đối với các loài ngài thì ựưa ống nghiệm lên phắa trên ựầu, sau ựó gạt nhẹ vào cánh, theo tập tắnh ngài sẽ bay lên chui vào ống nghiệm.
* Phương pháp nghiên cứu ựặc ựiểm hình thái các loài sâu mọt chắnh hại trên nguyên liệu thuốc Bắc nhập khẩu:
Sâu mọt thu thập ựược trong quá trình ựiều tra, mang về phòng kỹ thuật của Chi cục kiểm dịch thực vật vùng VII- Lạng Sơn, tiến hành tìm hiểu ựặc ựiểm hình thái, ựo ựếm kắch thước các pha phát dục của sâu mọt chắnh:
+ Quan sát, mô tả, ựo ựếm kắch thước từng pha phát triển của các cá thể nghiên cứu (n=30). đơn vị ựo là mm.
+ Pha trứng: đo chiều dài và chiều rộng. + Pha sâu non: đo chiều dài và chiều rộng.
+ Pha nhuộng và trưởng thành: đo chiều dài và phần rộng nhất cơ thể. - Kắch thước trung bình tắnh theo công thức:
N X X ∑ i = Trong ựó: Xi: là giá trị kắch thước thứ i N: là số cá thể theo dõi. - Xử lý mẫu:
+ đối với côn trùng trưởng thành: Sau khi xử lý bằng lọ ựộc KCN, sấy ở nhiệt ựộ thấp rồi tăng dần nhiệt ựộ lên ựể làm khô mẫu (Sấy ở nhiệt ựộ 30oC ựến 40oC trong 2 ngày rồi tăng dần lên 50oC - 60oC trong 7 ựến 10 ngày tùy theo kắch thước của sâu mọt)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 23 sau ựó cho vào ống nghiệm luộc bằng nước lã trên ựèn cồn không ựể sôi, khi sâu non duỗi thẳng là ựạt yêu cầu.
- Bảo quản mẫu sâu mọt.
+ Lưu giữ sâu mọt ướt: Ngay sau khi thu thập ựược mẫu sâu mọt trong các lần ựiều tra, mẫu ựược lựa chọn và cho vào lọ thuỷ tinh có nắp ựậy(chứa cồn 700 và lưu giữ ở nhiệt ựộ (50C - 100C).
+ Lưu giữ mẫu sâu mọt khô: tủ ựịnh ôn, các khay dùng ựể sấy sâu mọt, các lọ ựựng. sau khi sấy, ựể nguội cho vào lọ nút mài bảo quản nơi khô mát, ghi nhãn gồm: Ký hiệu mẫu, nơi thu thập, vật bị hại, ngày thu mẫu,...
- Phương pháp ựịnh loại:
+ Chúng tôi sử dụng phương pháp ựịnh loại truyền thống dựa vào ựặc ựiểm hình thái.
+ Tài liệu ựịnh loại côn trùng trong kho của: Bùi Công Hiển,(1995).[4], Vũ Quốc Trung (1981)[10], sự giúp ựỡ của GS.TS.NGƯT. Hà Quang Hùng - Bộ môn Côn trùng, Khoa Nông học, Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội; TS. Hà Thanh Hương - Trung tâm Phân tắch Giám ựịnh KDTV, Cục Bảo vệ thực vật,...
* Mức ựộ phổ biến của loài ựiều tra ựược tắnh theo công thức: Con
Mật ựộ mọt (con/kg) =
đơn vị lấy mẫu Mức ựộ phổ biến ựược chia thành 3 cấp:
- : Rất ắt phổ biến (Tần suất xuất hiện < 5%); +: Ít phổ biến (Tần suất xuất hiện 5 - 25%) ++: Phổ biến: (Tần suất xuất hiện >25 - 50%); +++: Rất phổ biến (Tần suất xuất hiện >50%).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 24 * Tỷ lệ thành phần các loài (%):
Tổng số mỗi loài * Tỷ lệ thành phần các loài (%) =
Tổng số các loài thu ựược
3.2.2.2 Phương pháp nghiên cứu ựặc ựiểm hình thái, sinh học, diễn biến mật ựộ của mọt thuốc bắc (Stegobium paniceum Linnaeus).
* Phương pháp nghiên cứu ựặc ựiểm hình thái:
Quan sát mô tả, ựo ựếm kắch thước từng pha phát triển của mọt thuốc bắc (Stegobium paniceum Linnaeus) với n = 30. đơn vị ựo là mm.
+ Pha trứng: đo chiều dài và chiều rộng. + Pha sâu non: đo chiều dài và chiều rộng.
+ Pha nhuộng và trưởng thành: đo chiều dài và phần rộng nhất cơ thể. - Kắch thước trung bình tắnh theo công thức:
N X X ∑ i = Trong ựó: Xi: là giá trị kắch thước thứ i N: là số cá thể theo dõi.
* Phương pháp nghiên cứu ựặc ựiểm sinh học:
- Nhân nuôi sinh học loài sâu mọt gây hại chắnh theo phương pháp nhân nuôi cá thể trong các hộp nuôi sâu và nuôi tập thể (n=30) trong các hộp nuôi sâu (hộp nuôi sâu bằng nhựa có ựục lỗ thoáng, hộp có ựường kắnh 15 cm, cao 20 cm), sau khi trứng nở, sâu non ựược tách nuôi riêng: theo dõi thời gian phát dục của các pha, xác ựịnh vòng ựời dưới ảnh hưởng của ựiều kiện nhiệt ựộ, ẩm ựộ, ựộ thủy phần của nguyên liệu thuốc Bắc nhập khẩu (ựiều kiện nhiệt ựộ ở 02 ngưỡng 25oC và 30oC, ẩm ựộ không khắ duy trì ở 70%).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 25
paniceum Linnaeus) :
Nuôi Mọt thuốc bắc ở 02 ngưỡng nhiệt ựộ khác nhau là 250C và 300C cùng ựộ ẩm 70%, trên hạt Ý dĩ ựể xác ựịnh thời gian của các pha phát dục loài Stegobium paniceum Linnaeus,(N=30)
Thời gian phát dục trung bình của cá thể tắnh theo công thức:
N n X X ∑ i i = . Trong ựó:
Xi: thời gian phát dục của cá thể thứ i
X : Thời gian phát dục của từng giai ựoạn ni: Số cá thể lột xác trong ngày thứ i N: Số cá thể theo dõi
Tắnh sai số theo công thức: N t X X δ. ổ = Trong ựó:
t: Tra bảng Student- Fisher với ựộ tin cậy P = 95% và ựộ tự do v = n-1 N: Số cá thể theo dõi.
δ: độ lệch chuẩn, ựược tắnh theo công thức:
1 ) ( 2 − − = ∑ N X Xi δ
+ Sức sinh sản: Bố trắ thắ nghiệm xác ựịnh số trứng một con cái loài
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 26 thức ăn khác nhau (củ Xuyên khung, Sa sâm và hạt ý dĩ); thắ nghiệm mỗi loại thức ăn gồm 30 hộp, mỗi hộp nuôi một cặp trưởng thành mới vũ hoá :
- Sức sinh sản (SSS) của một con cái ựược tắnh theo công thức: Tổng số trứng ựẻ(quả)
SSS = (quả/con) Tổng số con cái(con)
+ Tỷ lệ trứng nở (TLTN) ựược tắnh theo công thức: Tổng số trứng nở (quả)
TLTN = x100 (%) Tổng số trứng ựẻ (quả)
+ đánh giá mức ựộ gây hại :
Mức ựộ gây hại của số lượng mọt nhất ựịnh trên một lượng thức ăn: Chúng tôi tiến hành lấy 3 loại thức ăn có khối lượng như nhau, theo dõi trong thời gian 120 ngày, xác ựịnh lượng hao hụt theo %.
* Phương pháp nghiên cứu diễn biến mật ựộ của mọt thuốc bắc (Stegobium paniceum Linnaeus).
- Nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn gốc xuất xứ nguyên liệu thuốc Bắc nhập khẩu ựến diễn biến mật ựộ loài Stegobium paniceum Linnaeus :
Chúng tôi tiến hành ựiều tra ảnh hưởng của nguồn gốc, xuất xứ 03 loại nguyên liệu thuốc Bắc (Xuyên khung, hạt ý dĩ, Sa sâm):
+ địa ựiểm ựiều tra: Kho Chi Ma, cửa khẩu Lạng Sơn;
+ Lô ựiều tra: 03 loại nguyên liệu thuốc Bắc (Xuyên khung, hạt ý dĩ, Sa sâm), nhập từ Công ty Ngoại thương Thành phố An Quốc, Tỉnh Hà Bắc-Trung Quốc và Công ty TNHH Thiết bị Y dụng Bắc Nhĩ, Bắc Kinh-Trung Quốc.
+ Thời gian ựiều tra:
- đợt 1: lô hàng nhập từ 01/01/2010 ựến 30/03/2010. - đợt 2: lô hàng nhập từ 10/4/2010 ựến 30/6/2010.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 27 + Phương pháp nghiên cứu: điều tra trên các lô theo mỗi ựợt nhập, ựiều tra ựịnh kỳ 10 ngày/lần theo phương pháp TCVN 4731-89 (1989) [11]. Cụ thể như sau: tại mặt phẳng giữa lô hàng ựiều tra lấy mẫu theo 5 ựiểm ựường chéo góc, mỗi ựiểm lấy 1 kg nguyên liệu thuốc Bắc, thu thập loài
Stegobium paniceum Linnaeus, cộng tổng số con ở 5 ựiểm lại, chia cho 5, ựược kết quả trung bình (con/kg).
+ Chỉ tiêu ựiều tra: mật ựộ của loài Stegobium paniceum Linnaeus (con/kg). - Nghiên cứu ảnh hưởng 03 loại nguyên liệu thuốc Bắc khác nhau (Xuyên khung, hạt ý dĩ, Sa sâm) ựến diễn biến mật ựộ loài Stegobium paniceum Linnaeus
+ địa ựiểm ựiều tra: Kho Chi Ma, cửa khẩu Lạng Sơn;
+ Lô ựiều tra: 03 loại nguyên liệu thuốc Bắc (Xuyên khung, hạt ý dĩ, Sa sâm), nhập từ Công ty TNHH thiết bị y dụng Bắc Nhĩ, Bắc Kinh-Trung Quốc.
+ Thời gian ựiều tra:
- đợt 1: lô hàng nhập từ 01/01/2010 ựến 30/03/2010. - đợt 2: lô hàng nhập từ 10/4/2010 ựến 30/6/2010.
+ Phương pháp nghiên cứu: điều tra trên các lô theo mỗi ựợt nhập, ựiều tra ựịnh kỳ 10 ngày/lần theo phương pháp TCVN 4731-89 (1989)[11]. chúng tôi tiến hành như sau : với từng chủng loại nguyên liệu thuốc Bắc ựiều tra ở 03 tầng (từ 0 cm-70 cm, từ 70 cm-140 cm, từ 140 cm-210 cm), ở mỗi tầng ựiều tra lấy mẫu theo 5 ựiểm ựường chéo góc, mỗi ựiểm lấy 1kg nguyên liệu thuốc Bắc, thu thập loài Stegobium paniceum Linnaeus, cộng tổng số con ở 5 ựiểm lại, chia cho 5, ựược kết quả trung bình (con/kg).
+ Chỉ tiêu ựiều tra: mật ựộ của loài Stegobium paniceum Linnaeus (con/kg).
3.2.2.3 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ mọt hại nguyên liệu thuốc Bắc.
- Thử nghiệm hiêụ lực của thuốc Phosphine ựối với sâu mọt hại nguyên liệu thuốc Bắc tại Phòng kỹ thuật- Chi cục KDTV vùng 7- Lạng Sơn:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 28 + Hoá chất thử nghiệm là thuốc: Quickphos 56%;
+ Nồng ựộ tiến hành thử nghiệm 1g PH3 /m3, 2 g PH3 /m3, 3 g PH3 /m3 + Thời gian dùng thử nghiệm 3 ngày.
+ Côn trùng thắ nghiệm: trưởng thành loài Stegobium paniceum Linnaeus.: + Số lượng côn trùng thắ nghiệm: 100 trưởng thành/công thức/lần nhắc lại. Côn trùng thắ nghiệm ựược ựặt trong trong các lọ nhựa có chứa thức ăn. Các lọ có ựường kắnh 15 cm, cao 20 cm, nắp lưới. Xung quanh lọ ựược bôi một lớp Fluon ựể ngăn không cho côn trùng bò lên trên. Mỗi lọ có chứa 0,5 kg nguyên liệu thuốc Bắc khô.
+ Chamber có kắch thước 1m3
+ Công thức thắ nghiệm: 4 công thức. Mỗi công thức ựược nhắc lại 3 lần. - Tiến hành xông hơi:
Các lọ côn trùng thắ nghiệm ựược ựặt vào các thùng, ựưa thuốc Quickphos 56% vào các thùng khử trùng theo ựúng nồng ựộ yêu cầu. Sau khi thông thoáng khoảng 30 phút, lấy các lọ có chứa côn trùng thắ nghiệm ra và kiểm tra số lượng côn trùng sống trong các lọ. Các lọ sau khi kiểm tra ựược tiếp tục giữ trong phòng nhân nuôi. Sau 7 ngày, tiếp tục tiến hành kiểm tra số lượng côn trùng sống có trong các lọ.
Công thức thử nghiệm hiệu lực của thuốc Quickphos 56% ựối với trưởng thành loài (Stegobium paniceum Linnaeus) trong phòng thắ nghiệm.
Công thức Liều lượng (g/m3)
Thời gian xông hơi (ngày) Nhiệt ựộ xông hơi 1 1 3 2 2 3 3 3 3 4 đối chứng 3 20-300C
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 29 Nếu tỷ lệ mọt chết ở công thức ựối chứng ≥ 10% thì phải làm lại thắ nghiệm. đánh giá hiệu quả phòng trừ Stegobium paniceum Linnaeus bằng thuốc khử trùng xông hơi Quickphos 56%:
Hiệu lực thuốc tắnh theo công thức Abbott: Ca Ờ Ta
đHH (%) = ỞỞỞ x 100 Ca
Trong ựó:
Ca: là % số mọt sống ở công thức ựối chứng (không xử lý thuốc). Ta: là % số một sống ở công thức xử lý thuốc sau xử lý.