- Phõn loại hiện tượng rối loạn quỏ trỡnh sinh sản do nguyờn nhõn bệnh lý buồng trứng.
4. KẾT QUẢ NGHIấN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.3. Kết quả ứng dụng kỹ thuật ELISA ủịnh lượng FSH và progesterone
4.3.1. Kết quảủịnh lượng FSH
* ðộng thỏi FSH trong một chu kỳủộng dục bỡnh thường của bũ
ðể cú cơ sở nhận biết ủược sự thay ủổi về mặt sinh lý, sinh hoỏ trong cơ thể con vật, phỏt hiện ủược những bất thường về cỏc chỉ tiờu sinh sản của bũ, trước hết chỳng tụi tiến hành thăm dũ hàm lượng FSH trong một chu kỳủộng dục của 5 bũ sữa sinh sản bỡnh thường, những bũ này sau khi ủẻủược theo dừi ủộng dục trở lại và lấy mẫu. Kết quảủịnh lượng hàm lượng FSH, LH trong một chu kỳủộng dục bỡnh thường của 5 bũ này ủược chỳng tụi tổng kết và trỡnh bày ở bảng 4.8
Bảng 4.8. Hàm lượng FSH trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của bũ sữa (mlU/ml)
Stt bũ Ngày 0 Ngày 7 Ngày 14 Ngày 21
1 1,4 4,12 5,2 1,19 2 2,3 5,12 4,2 3,08 3 3,1 3,1 5,98 3,65 4 4 2,93 4,42 2,22 5 1,1 4,21 6,81 2,17 TB 2,38 ±0,54 3,9 ±0,4 5,32 ±0,5 2,46 ±0,42 Qua bảng 4.8 chỳng tụi thấy: hàm lượng FSH biến ủộng theo ủỳng quy luật. Thấp nhất vào ngày ủộng dục (2,38 ±0,54mlU/ml), bắt ủầu tăng vào ngày thứ ba, kộo dài cho ủến ngày 14 ủạt cao nhất (5,32 ± 0,5mlU/ml). Sau ủú giảm từ từ, ủến ngày 21 cũn tương ủương ban ủầu là 2,46 ± 0,42mlU/ml.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 57 Cỏc tài liệu nghiờn cứu về ủộng thỏi FSH ủều chỉ ra rằng: hàm lượng FSH trong dịch thể thấp nhất vào ngày ủộng dục, ủiều ủú cho thấy khụng cú sự tồn tại và tiết FSH. Sau ủú bắt ủầu tăng vào ngày thứ 7 của chu kỳ, cao nhất vào khoảng ngày 13 – 14, sau ủú giảm rất chậm và ủạt mức thấp nhất vào ngày 20 - 21 của chu kỳ.
Kết quả của chỳng tụi thu ủược phự hợp với cỏc kết quả nghiờn cứu của một số tỏc giả như: Phan Văn Kiểm và Cs (1998) [17] Hàm lượng FSH vào ngày ủộng dục (ngày 0) thấp nhất 2,15 mlU/ml, bắt ủầu tăng lờn từ ngày thứ 7 ủạt 4,58 mlU/ml, ủạt cao nhất từ ngày thứ 14 (8,41 mlU/ml), giảm nhanh từ ngày 18 (4,12 mlU/ml) xuống cũn 3,21 mlU/ml vào ngày 21.
Sự biến ủộng của FSH phản ỏnh một cỏch trung thực tỡnh trạng hoạt ủộng của buồng trứng. Việc xỏc ủịnh ủộng thỏi FSH trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường cú ý nghĩa to lớn cả trong nghiờn cứu và trong thực tiễn, kết hợp với phương phỏp khỏm qua trực tràng, ta cú thể biết ủược một cỏch rừ ràng và chớnh xỏc tỡnh trạng hoạt ủộng của buồng trứng. 2.38 3.9 4.72 2.46 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 0 7 14 21 Ngày Hàm lượng FSH TB
Hỡnh 4.1. ðộng thỏi FSH trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của bũ sữa
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 58
* Kết quảủịnh lượng FSHtrong cỏc trường hợp bũ bị rối loạn sinh sản
Cú nhiều nguyờn nhõn dẫn ủến rối loạn sinh sản ở bũ sữa.. Thiểu năng buồng trứng cú thể xảy ra khi buồng trứng bị viờm lõu ngày khụng ủược ủiều trị, do dinh dưỡng kộm làm cho một phần hoặc toàn bộ buồng trứng khụng phỏt triển mà teo lại. Buồng trứng khụng hoạt ủộng, khụng cú trứng chớn và rụng nờn khụng hỡnh thành thể vàng, do vậy trường hợp này hàm lượng FSH thấp.
Buồng trứng bịủa nang là khi trứng chớn nhưng do tế bào thượng bỡ của noón nang khụng vỡ ra ủược nờn khụng cú hiện tượng rụng trứng từủú thể vàng khụng hỡnh thành, do vậy hàm lượng FSH trong trường hợp này cũng rất thấp.
Buồng trứng cú u nang thể vàng do nội mạc tử cung khụng tiết ra ủược PGF2α nờn khụng phỏ vỡủược thể vàng ở chu kỳ trước ủú, thể vàng vẫn tồn tại và tiết ra FSH, LH làm ức chế sự phỏt triển của nang trứng nờn cũng khụng cú hiện tượng ủộng dục và rụng trứng. Trong trường hợp này hàm lượng FSH trong sữa cao.
Rối loạn sinh sản mà nguyờn nhõn do buồng trứng là hiện tượng phổ biến trong chăn nuụi bũ sữa, nú làm ảnh hưởng khụng nhỏủến hiệu quả kinh tế cho người chăn nuụi. Hiện nay việc chẩn ủoỏn nguyờn nhõn do buồng trứng thường dựa vào phương phỏp khỏm qua trực tràng. Tuy nhiờn, phương phỏp này phụ thuộc rất nhiều vào trỡnh ủộ của người khỏm. ðối với kỹ thuật viờn cú tay nghề cao, khụng khú ủể phõn biệt trường hợp thiểu năng buồng trứng với trường hợp buồng trứng cú khối u nhưng ủể phõn biệt trường hợp ủa nang buồng trứng với thể vàng tồn lưu thỡ lại là một ủiều rất khú. Phương phỏp ELISA cho phộp phõn biệt hai trường hợp này chớnh xỏc ủến 90%.
Dựa vào kết quảủiều tra trong sổ sỏch của phũng kỹ thuật, cỏc dẫn tinh viờn, ủặc biệt dựa vào phương phỏp khỏm buồng trứng qua trực tràng, chỳng tụi xỏc ủịnh ủược bũ cú buồng trứng bất thường và những bũ này ủược chọn làm thớ nghiệm và tiến hành lấy mẫu.
Cỏc mẫu ủược lấy vào cỏc ngày 0 (ngày bất kỳ), ngày 7, ngày 14 và ngày 21. Kết quảủịnh lượng ủược trỡnh bày ở bảng 4.9.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 59
Bảng 4.9. Hàm lượng FSH trong cỏc trường hợp rối loạn sinh sản do bệnh lý buồng trứng ở bũ sữa
Hàm lượng FSH (mIU/ml) Cỏc trường hợp n
(con) Ngày 0 Ngày 7 Ngày 14 Ngày 21
Biến ủộng 4,1 – 6,42 4,21-6,42 4,12-6,42 4,25-8,38 Hàm lượng FSH cao 9 Trung bỡnh 4,35±0,52 5,14 ± 0,75 6,31 ± 1,77 4,37 ± 0,68 Biến ủộng 3,1 – 5,42 2,2-3,42 3,23-5,42 2,27-5,38 Hàm lượng FSH thấp 14 Trung bỡnh 2,15±0,41 2,14 ± 0,24 2,18 ± 0,97 2,57 ± 0,64 Hàm lượng FSH tăng dần 4 Trung bỡnh 3,35±0,24 3,64 ± 0,45 4,31 ± 1,07 4,59 ± 0,59 Hàm lượng FSH biến ủộng 1 5,24 2,14 3,16 4,15 Hàm lượng FSH theo chu kỳ 1 2,26 3,48 6,24 2,14
0 1 2 3 4 5 6 7 0 7 14 21 Hàm lượng FSH cao Hàm lượng FSH thấp Hàm lượng FSH tăng dần Hàm lượng FSH biến ủộng Hàm lượng FSH theo chu kỳ
Hỡnh 4.2. Hàm lượng FSH trong cỏc trường hợp rối loạn sinh sản do bệnh lý buồng trứng ở bũ
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 60 Qua bảng 4.9 và hỡnh 4.2 chỳng tụi xỏc ủịnh ủược 5 nhúm bũ. Nhúm thứ nhất cú hàm lượng FSH (> 4mIU/ml) ở tất cả cỏc ngày lấy mẫu. Nhúm thứ hai cú hàm lượng FSH luụn thấp (<4mIU/ml). Nhúm thứ ba cú hàm lượng FSH tăng dần (từ 3,35±0,24 - 4,59 ± 0,59mIU/ml) . Nhúm thứ tư cú hàm lượng FSH giàm dần (từ 5,24 - 4,15mIU/ml)) và nhúm thứ năm cú hàm lượng FSH biến ủộng theo chu kỳ bỡnh thường, tương ứng ở cỏc thời ủiểm lấy mẫu.
Theo Nguyễn Tấn Anh (1995) [2], nồng ủộ FSH trong sữa bịảnh hưởng trực tiếp của sự hỡnh thành và phỏt triển của thể vàng. Theo Isobe N (2002) [47], giới hạn > 1 mIU/ml về nồng ủộ FSH ủỏnh dấu sự tồn tại của thể vàng. Những nghiờn cứu của Phan Văn Kiểm (1998) [17] về kết quả nghiờn cứu về ủộng thỏi FSH ở bũ rối loạn sinh sản tại Trung tõm nghiờn cứu bũ và ủồng cỏ Ba Vỡ, Trung tõm giống bũ sữa Cầu Diễn và xó Phự ðổng – Huyện Gia Lõm – Hà Nội cho biết hàm lượng FSH ở bũ rối loạn sinh sản chia làm hai nhúm: nhúm cú hàm lượng FSH cao (>4 mIU/ml) tương ứng ở cỏc ngày lấy mẫu 0, 7, 14, 21 là: 4,48 ± 0,33 mIU/ml; 4,62 ± 0,45 mIU/ml; 5,58 ± 0,35 mIU/ml; 5,51 ± 0,43 mIU/ml. Nhúm bũ cú hàm lượng FSH thấp (<4 mIU/ml) tương ứng ở cỏc ngày lấy mẫu là: 3,08 ± 0,05 mIU/ml; 2,12 ± 0,06 mIU/ml; 3,16 ± 0,05 mIU/ml; 3,19 ± 0,01 mIU/ml. Từủú, chỳng tụi kết luận ủược rằng nhúm bũ cú hàm lượng FSH cao (n = 9) cú thể vàng hoạt ủộng liờn tục trong tất cả cỏc thời ủiểm lấy mẫu hay núi cỏch khỏc là buồng trứng ở những bũ này cú thể vàng tồn lưu. 14 con cú hàm lượng FSH thấp nghĩa là khụng cú sự tồn tại của thể vàng, trường hợp này cú thể do thiểu năng buồng trứng hoặc do ủa nang buồng trứng, 6 bũ cú buồng trứng hoạt ủộng (hàm lượng FSH tăng dần, biến ủộng và theo chu kỳ). Nhúm bũ này cú thể do ủộng dục thầm lặng, ủộng dục vào ban ủờm hay do kỹ thuật phỏt hiện ủộng dục chưa chớnh xỏc nờn chưa ủược phối giống. Cũng cú thể những con này cú buồng trứng hoạt ủộng trở lại.
Nếu chỉ với phương phỏp ủịnh lượng ELISA trong cỏc trường hợp chậm sinh thỡ chỳng tụi chỉ phõn biệt ủược hai nhúm bũ: Nhúm bũ cú hàm lượng FSH cao
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 61 (>4mIU/ml) và nhúm bũ cú hàm lượng FSH thấp (<4mIU/ml). Nhúm bũ cú hàm lượng FSH cao cú thể khẳng ủịnh do thể vàng tồn lưu nhưng nhúm bũ cú hàm lượng FSH thấp cú thể là do ủa nang hoặc do thiểu năng buồng trứng. Sau khi ủó ủịnh lượng FSH việc phõn biệt hai trường hợp này trở nờn dễ dàng dựa vào cỏch khỏm buồng trứng qua trực tràng, do cấu trỳc buồng trứng hoàn toàn trỏi ngược nhau. Trường hợp thiểu năng buồng trứng thỡ sờ thấy buồng trứng nhỏ, nhẵn nhụi, ớt sần sựi và ủộủàn hồi kộm. Buồng trứng cú ủa nang thỡ sần sựi, cú nhiều u nổi lờn trờn bề mặt.
ðể kết quảủược chớnh xỏc hơn cần phải cú sự kết hợp giữa hai phương phỏp trờn ủể xỏc ủịnh ủược nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản một cỏch nhanh chúng và chớnh xỏc. * Kết quả chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản bằng ủịnh lượng FSH kết hợp khỏm buồng trứng qua trực tràng
Việc khỏm buồng trứng qua trực tràng ủể chẩn ủoỏn b nh chỉ mang tớnh chất tương ủối và tr ờn thực tế gặp khỏ nhi ều khú khăn. Vỡ vậy nếu kết hợp với việc ủịnh lượng FSH cú thể hỗ trợ chẩn ủoỏn chớnh xỏc hơn một số bệnh. Kết quảủược trỡnh bày ở bảng 4.10:
Bảng 4.10. Kết quả chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản ở bũ sữa bằng ủịnh lượng FSH kết hợp khỏm buồng trứng qua trực tràng
Phương phỏp (n=29) ðịnh lượng FSH n (con) Khỏm qua trực tràng n (con) Kết luận Tỷ lệ (%) Cao 9 Cú u 9 ða nang buồng trứng 31,03 Cú u 8 Thể vàng tồn lưu 27,59 Thấp 14 Khụng cú u 6 Thiểu năng buồng trứng 20,69 Tăng dần 4 Biến ủộng 1 Theo chu kỳ 1 Bỡnh thường 6 Buồng trứng hoạt ủộng bỡnh thường 20,69 Tổng 29 100
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 62 Qua bảng 4.10 chỳng tụi thấy: cú hàm lượng FSH luụn cao ở tất cả cỏc thời ủiểm lấy mẫu, kết hợp với khỏm trực tràng cú u, chỳng tụi ủi ủến kết luận số bũ này bịủa nang buồng trứng chiếm tỷ lệ tương ứng là 31,03 và 39,28% ; số bũ cỏi cú hàm lượng FSH thấp, cú u nang ủược khẳng ủịnh là thể vàng tồn lưu buồng trứng chiếm tỷ lệ tương ứng là 27,58 và 28,57%; số bũ cú hàm lượng FSH thấp, khụng cú u do thể vàng tồn lưu chiếm tỷ lệ là 20,69% và 17,85%; số bũ cú buồng trứng hoạt ủộng bỡnh thường chiếm là 20,69%, những con này chỳng tụi khụng tiếp tục nghiờn cứu mà khuyến cỏo người chăn nuụi nờn theo dừi chặt chẽ hơn.
Qua ủõy, chỳng tụi cú thể khẳng ủịnh: việc kết hợp giữa phương phỏp ELISA ủịnh lượng FSH và khỏm buồng trứng qua trực tràng làm cho việc chẩn ủoỏn nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản ở bũ sữa trở nờn dễ dàng, nhanh chúng và chớnh xỏc hơn nhiều so với trước ủõy. Việc chẩn ủoỏn chớnh xỏc giỳp ta cú những biện phỏp can thiệp kịp thời và ủõy là một chẩn ủoỏn rất cú ý nghĩa bởi tỡnh trạng rối loạn sinh sản trong chăn nuụi bũ ở nước ta diễn ra với tỷ lệ khỏ cao, theo Tăng Xuõn Lưu và Cs (2003) [22] là 25 – 30% gõy thiệt hại lớn cho người chăn nuụi. Chẩn ủoỏn chớnh xỏc nguyờn nhõn gõy rối loạn sinh sản cú thể coi là chỡa khoỏ ủể nõng cao năng suất sinh sản trong chăn nuụi bũ sữa.
4.3.2. Kết quảủịnh lượng Progesterone
* ðộng thỏi Progesterone trong một chu kỳủộng dục bỡnh thường của bũ ðể cú cơ sở nhận biết ủược sự thay ủổi về mặt sinh lý, sinh hoỏ trong cơ thể con vật, phỏt hiện ủược những bất thường về cỏc chỉ tiờu sinh sản của bũ, trước hết chỳng tụi tiến hành thăm dũ hàm lượng Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục của 5 bũ sữa sinh sản bỡnh thường, những bũ này sau khi ủẻủược theo dừi ủộng dục trở lại và lấy mẫu. Kết quả ủịnh lượng hàm lượng Progesterone trong một chu kỳủộng dục bỡnh thường của 5 bũ này ủược chỳng tụi tổng kết và trỡnh bày ở bảng 4.11.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 63
Bảng 4.11. Hàm lượng Progesterone trong một chu kỳ ủộng dục bỡnh thường của bũ sữa (ŋg/ml)
Stt bũ Ngày 0 Ngày 7 Ngày 14 Ngày 21
1 0,17 1,25 2,25 0,36 2 0,19 1,28 2,08 0,16 3 0,22 1,78 2,41 0,45 4 0,20 1,92 2,15 0,23 5 0,31 1,81 2,42 0,27 TB 0,22 ±0,05 1,61 ±0,21 2,26 ±0,15 0,29 ±0,11 Sự hỡnh thành và tiết Progesterone là khả năng ủặc trưng của thể vàng. Cỏc tài liệu nghiờn cứu vềủộng thỏi Progesterone ủều chỉ ra rằng: hàm lượng Progesterone trong dịch thể thấp nhất vào ngày ủộng dục, ủiều ủú cho thấy khụng cú sự tồn tại và tiết Progesterone của thể vàng. Sau ủú bắt ủầu tăng vào ngày thứ 3 – 4 của chu kỳ, cao nhất vào khoảng ngày 13 – 14, sau ủú giảm rất chậm, ủến ngày 17 - 19 thỡ giảm ủột ngột và ủạt mức thấp nhất vào ngày 20 - 21 của chu kỳ.
Qua bảng 4.11 chỳng tụi thấy: hàm lượng Progesterone biến ủộng theo ủỳng quy luật. Thấp nhất vào ngày ủộng dục (0,22 ± 0,05 ŋg/ml), bắt ủầu tăng vào ngày thứ ba, kộo dài cho ủến ngày 14 ủạt cao nhất (2,26 ± 0,15 ŋg/ml). Sau ủú giảm từ từ, ủến ngày 21 cũn 0,29± 0,11 ŋg/ml.
Kết quả của chỳng tụi thu ủược, cú cao hơn một chỳt nhưng vẫn phự hợp với quy luật và theo chỳng tụi sự chờnh lệch là khụng ủỏng kể so với cỏc kết quả nghiờn cứu của một số tỏc giả như: Phan Văn Kiểm và Cs (2003) [18] Hàm lượng Progesterone vào ngày ủộng dục (ngày 0) thấp nhất 0,15 ŋg/ml, bắt ủầu tăng lờn từ ngày thứ ba ủến ngày thứ sỏu ủạt 0,58 – 1,24 ŋg/ml, ủạt cao nhất từ ngày thứ 12 - 15 (2,41 - 2,43 ŋg/ml), giảm nhanh từ ngày 18 (1,12 ŋg/ml) xuống cũn 0,21 ŋg/ml vào ngày 21.
Nghiờn cứu của Isobe (2002) [47] cũng cho thấy: hàm lượng Progesterone vào ngày ủộng dục là 0,17 ŋg/ml; ngày thứ 6 là: 1,10 ŋg/ml ;
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 64 ngày thứ 9 là: 1,70 ŋg/ml; ngày 12 là: 2,30 ŋg/ml; ngày 15 là: 2,55 ŋg/ml; ngày 18: 1,26 ŋg/ml; ngày 21: 0,22 ŋg/ml.
Sự biến ủộng của Progesterone phản ỏnh một cỏch trung thực tỡnh trạng hoạt ủộng của buồng trứng: vào ngày ủộng dục (ngày 0), trứng chớn nổi lờn bề mặt của buồng trứng, thể vàng chưa hỡnh thành nờn khụng cú Progesterone