3. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP
3.3.2Phương pháp nghiên cứu
* Phương pháp ựiều tra, theo dõi tình hình bệnh
- Tại mỗi tỉnh nghiên cứu chọn và 10 Ờ 20 trại ong có số lượng từ 10 ựàn trở lên. Kết hợp cùng với chủ trại ong tiến hành ghi mã số các ựàn ong và theo dõi bệnh ựịnh kỳ mỗi tháng 2 lần vào ngày 01 và ngày 15 theo ỘSổ ựiều tra bệnh virus ấu trùng túi hại ong mậtỢ.
- Chỉ tiêu ựiều tra: tỉ lệ ựàn bệnh, mức ựộ bệnh
* Phương pháp nghiên cứu khả năng lây nhiễm
- Thắ nghiệm gồm 5 công thức (CT), mỗi công thức gồm 10 ựàn ong CT 1: Lây bệnh từ ong Apis cerana cho ong Apis cerana
CT 2: Lây bệnh từ ong Apis cerana cho ong Apis mellifera
CT 3: Lây bệnh từ ong Apis mellifera cho ong Apis cerana
CT 4: Lây bệnh từ ong Apis mellifera cho ong Apis mellifera
CT5 (đối chứng): Các ựàn ong ựược cách li và không lây bệnh
- Thu mẫu bệnh theo phương pháp của Somerville (2009), lây bệnh theo phương pháp của Phạm Viết Liên và cộng sự (2004) với nồng ựộ pha loãng virus là 10-3.
*Phương pháp ựánh giá ảnh hưởng của bệnh lên ựàn ong
- Chọn và ựánh dấu những ựàn ong bị bệnh trong thắ nghiệm lây nhiễm bệnh ựể theo dõi.
- Chi tiêu theo dõi, ựánh giá: thế ựàn, số lượng nhộng, khả năng dọn vệ sinh của ong thợ trước thắ nghiệm và sau thắ nghiệm 7, 14, 21, 28 và 35 ngày.
* đánh giá tác ựộng của một số chế phẩm hóa học lên ựàn ong
Ong Apis cerana chỉ cho ăn, ong Apis mellifera vừa cho ăn vừa phun với các chế phẩm hóa học nghiên cứu. Mỗi chế phẩm hóa học dùng trong thắ nghiệm, kể cả kết hợp, ựều dùng khảo sát với 3 nồng ựộ khác nhau: 1ml (hoặc 1g), 2ml (hoặc 2g) và 3ml (hoặc 3g).
- Các thắ nghiệm, ựối chứng ựều ựược nhắc lại 5 lần và trộn với 20ml xiro ựường/cầu ựể phun hoặc cho ăn.
- Chỉ tiêu ựánh giá: tỉ lệ chết trứng, trùng, nhộng; sức ựẻ trứng; thế ựàn và khả năng dọn vệ sinh trước và sau thắ nghiệm
* Phương pháp thắ nghiệm phòng bệnh
- Mỗi nhóm ong chia thành các công thức thắ nghiệm tương ứng với các nhóm chế phẩm hóa học ựã ựược lựa chọn với 3 chế ựộ sử dụng: 1 lần, 2 lần và 3 lần (các lần cách nhau 10 ngày). Các thắ nghiệm, ựối chứng ựều ựược nhắc lại 5 lần và trộn với 20ml xiro ựường/cầu
- Tất cả các công thức thắ nghiệm và ựối chứng ựược cách li 1,5km. Sau 1 ngày tắnh từ ngày cho ăn lần cuối cùng, tiến hành lây bệnh nhân tạo theo phương pháp của Phạm Viết Liên và cộng sự (2004) với nồng ựộ pha loãng virus là 10-3.
- Chỉ tiêu: số ựàn bệnh, tỉ lệ ấu trùng bệnh sau lây bệnh 14 ngày.
* Phương pháp thắ nghiệm ựiều trị bệnh bằng kỹ thuật sinh học
- Mỗi nhóm ong chia thành 5 công thức, mỗi công thức lặp lại 5 lần CT 1: Thay chúa tơ sạch bệnh
CT 2: Nhốt chúa 10 ngày rồi thả
CT 3: Nhốt chúa 10 ngày, thả 5 ngày, nhốt tiếp 5 ngày rồi mới thả CT 4: Di chuyển ựến nguồn hoa mới không có bệnh, cách xa 2 km CT 5 (đối chứng): Không nhốt chúa, không thay chúa, không di chuyển, cách li
- Tất cả các công thức ựều loại bớt cầu, cho ăn bổ sung xiro ựường - Sau khi thả chúa, thay chúa hoặc di chuyển ựịnh kỳ 7 ngày kiểm tra 1 lần trong 35 ngày ựể theo dõi diễn biến của bệnh trên ựàn ong.
- Chỉ tiêu: tỉ lệ ấu trùng bệnh và sức ựẻ trứng
* Phương pháp thắ nghiệm ựiều trị bệnh bằng chế phẩm hóa học
- Mỗi nhóm ong chia thành các công thức thắ nghiệm tương ứng với các nhóm chế phẩm hóa học ựược lựa chọn sau khi ựánh giá tác ựộng ựến các ựặc ựiểm sinh học. đối chứng nuôi các li, không dùng chế phẩm hóa học, chỉ dùng xiro ựường.
- Các thắ nghiệm, ựối chứng ựều ựược nhắc lại 5 lần. Chế phẩm hóa học ựược sử dụng theo nguyên tắc dùng liên tục 3 ngày mỗi ngày 1 lần và dừng 3 ngày, khi dùng trộn với 20ml xiro ựường/cầu.
- Sau khi ựiều trị ựịnh kỳ 3 ngày, 7 ngày, 14 ngày kiểm tra và theo dõi ựến 35 ngày ựể xác ựịnh diễn biến của bệnh trên ựàn ong. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Chỉ tiêu theo dõi: tỉ lệ ấu trùng bệnh
* Phương pháp tắnh các chỉ tiêu theo dõi và xử lý số liệu
* Tắnh tỉ lệ ựàn bệnh: TLB (%) =
B
Aừ100
Trong ựó TLB (%): Tỉ lệ ựàn bệnh ựược tắnh bằng % A: Số ựàn ong có triệu chứng ựiển hình bệnh B: Tổng số ựàn ong ựiều tra
* Tắnh tỉ lệ ấu trùng bệnh
Dùng khung cầu mẫu lần lượt ựặt lên mặt các cầu nhộng, ựếm số ấu trùng bệnh trong 3 ô theo ựường chéo và tắnh tỉ lệ theo công thức
TLATB (%) =
100
ừ
D
C ừ100
Trong ựó TLATB (%): Tỉ lệ ấu trùng bệnh trên cầu nhộng C: Tổng số ấu trùng bệnh của ựàn
D: Tổng số ô kiểm tra trong ựàn * đánh giá mức ựộ bệnh (dựa theo Woyke, 1985) Cụ thể + Nhẹ: tỉ lệ ấu trùng bệnh < 0,5%
++ Trung bình: tỉ lệ ấu trùng bệnh từ 0,5% ựến dưới 1% +++ Nặng: tỉ lệ ấu trùng bệnh ≥ 1%
* đánh giá sức ựẻ trứng của chúa (Phùng Hữu Chắnh, 1996)
Sức ựẻ trứng của chúa ựược ựo gián tiếp bằng số lượng nhộng vắt nắp của tất cả các cầu trong ựàn. đặt khung cầu mẫu có chia ô vào chỗ có nhộng vắt nắp, ựếm số ô rồi tắnh theo công thức:
SđT với ong nội = 11
X ừ100 ; SđT với ong ngoại = 12 X ừ100 Trong ựó: X là tổng số ô có nhộng vắt nắp của cả ựàn
11 là trung bình số ngày nhộng nằm trong lỗ tổ vắt nắp của ong nội 12 là trung bình số ngày nhộng nằm trong lỗ tổ vắt nắp của ong ngoại * Thế ựàn: ựược tắnh bằng tổng số cầu 2 mặt kắn quân của ựàn ong
* đánh giá khả năng dọn vệ sinh: kiểm tra và chọn cầu ong có lỗ tổ ong thợ mới vắt nắp (ở giai ựoạn tiền nhộng), dùng kim chọc thủng khoảng 100 lỗ tổ ựể cho nhộng ong bị chết, sau 16 tiếng nhấc cầu kiểm tra, ựếm số nhộng còn lại ựể ựánh giá khả năng dọn vệ sinh của từng ựàn ong theo công thức
VS (%) =
PQ Q
Trong ựó VS (%): Khả năng dọn vệ sinh (tắnh bằng tỉ lệ %) P: Tổng số lỗ tổ chọc chết nhộng Q: Số lỗ tổ chưa dọn * Tỉ lệ chết ấu trùng TLCAT (%) = S R ừ100
Trong ựó TLCAT: Tỉ lệ chết ấu trùng (tắnh bằng tỉ lệ %) R: Tổng số ấu trùng chết
S: Tổng số trứng hoặc ấu trùng hoặc nhộng ựánh dấu * Hiệu quả ựiều trị (theo công thức Henderson Tilton)
Ta x Cb
HQ(%) = (1 - --- ) x 100 Tb x Ca
Trong ựó: - HQ(%) là hiệu quả ựiều trị bệnh (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Ta tỉ lệ ấu trùng bệnh ở công thức ựiều trị
- Tb tỉ lệ ấu trùng bệnh ở công thức trước khi ựiều trị - Ca tỉ lệ ấu trùng bệnh ở công thức ựối chứng sau ựiều trị - Cb tỉ lệ ấu trùng bệnh ở công thức ựối chứng trước ựiều trị Các số liệu ựược xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học thắch hợp trên phần mềm Microsoft office Excel của máy tắnh. Sử dụng phần mềm IRRISTAT 5.0 dùng cho khối Nông học ựể so sánh sai số thắ nghiệm (BROB), hệ số biến ựộng (CV%) và sai khác nhỏ nhất có ý nghĩa (LSD 0.05).