- Vi khuẩn: Achrobacter, Alkaligenes, Bacillus, Bacterium, Corynebacterium,
c. Mơi trường nuơi cấy nấm mốc
Thănh phần kg Dầu diezen 30 NaNO3 3 K2HPO4 1 KCl 0,5 FeSO4 0,01 Nước bổ sung văo cho đủ 1000.
Câc nguyín tố vi lượng cần cho Aspergilus niger (mg/l mơi trường): Fe – 0,2; Zn – 0,18; Cu – 0,04; Mn – 0,22 vă Ca – 0,02.
Việc tuyển chọn câc chugr nấm men vă vi khuẩn cĩ khả năng phđn hủy dầu mỏ vă parafin ngăy nay cĩ ý nghĩa rất lớn trong việc bảo vệ mơi trường khi bị ơ nhiễm dầu mỏ, đsặc biệt lă câc vùng đất quanh kho chứa hoặc đất ven biển sau câc sự cố nhiễm dầu do câc tău chở bị nạn.
1.2.3. Kỹ thuật nuơi cấy:
Hiện nay để nđng cao hiệu suất sử dụng cơ chất vă tận dụng triệt để thiết bị nuơi cấy, nhiều nước đê ứng dụng kỹ thuật nuơi cấy liín tục trong cơng nghiệp sản xuất sinh khối nấm men.
Quâ trình nuơi cấy như sau:
- Parafin nĩng (50-600C) được liín tục cho văo thùng lín men, nồng độ parafin trong mơi trường ban đầu lă 1,5 -2 % thể tích.
- Sự tích tụ sinh khối nấm men trong thời gian nuơi cấy cĩ thể thực hiện trong hai nồi lín men:
+ Lín men chính: ở nồi thứ nhất; được thổi khí mạnh. + Lín men phụ: cĩ thổi khí nhưng yếu hơn.
Nếu so sânh quâ trình lín men sinh khối trín mơi trường chứa parafin với mơi trường hydratcacbon, chúng ta thấy cĩ những điểm giống vă khâc nhau sau đđy:
. Nuơi cấy nấm men trín mơi trường chứa paraphin thường phải thổi khí mạnh gấp 2,6 - 2,8 lần so với khí nuơi cấy nấm men trín mơi trường hydrat cacbon.
. Sự sinh trưởng của vi sinh vật trín hidrocacbua phụ thuộc văo pH cũng giống như khi nuơi trín mơi trường sacaroza (pH = 5-6). Tuy nhiín, cĩ thểở trị số pH thấp hơn để trânh tạp nhiễm.
. Khi sinh trưởng trín hydrocacbua, nấm men toả nhiệt hơn vă yíu cầu về thanh trùng khơng chặt chẽ như khi nuơi trín mơi trường sacaroza.
1.4. Nguồn cơ chất:
Chất lượng của parafin ảnh hưởng lớn đến sản lượng nuơi cấy nấm men. Trong n-parafin thường cĩ 93-98% hydro cacbua được tạo thănh phức chất với cacbamit, đĩ lă câc n-ankan cĩ số nguyín tử cacbon từ 12-24, 2-7% izoparafin naphten vă khơng quâ 0,5% hydro một hoặc hai vịng thơm.
Qua câc số liệu cơng bố trong việc nghiín cứu lựa chọn câc nguồn nguyín liệu khâc nhau, ta thấy:
- Sản phẩm nấm men rất phụ thuộc văo nguồn hydrocacbua cĩ trong nguyín liệu vă phương phâp lăm sạch. Nếu trong nguyín liệu cĩ chứa một số cacbua khâc, hăm lượng của chúng quâ một giới hạn nhất định năo đĩ cĩ thể lăm ức chế sinh trưởng của vi sinh vật.
- Sản phẩm oxy hĩa của một số hydrocacbua khâc trong nguyín liệu cĩ thể tâc hại đến tăng sinh khối của giống nuơi cấy.
-Đặc tính lý học của cơ chất (độ nĩng chảy, độ nhớt, mău sắc..) cĩ thể lăm cho quâ trình sản xuất gặp khĩ khăn. Thí dụ: parafin khơng khuếch tân trong mơi trường nnuwowoo ở nhiệt độ sinh trưởng bình thường của nấm men, dù lă cĩ sự khuấy đảo. Để khắc phục, cĩ thể chọn câc chủng vi sinh vật cĩ nhiệt độ sinh trưởng tối thích cao, tốt nhất lă câc chủng vi sinh vật ưa nhiệt (trín 400C).
1.5. Sơ đồ cơng nghệ sản xuất sinh khối nấm men từ dầu mỏ thơ vă từ parafin tinh khiết: parafin tinh khiết:
A B