3. nội dung nguyên liệu ph−ơng pháp nghiên cứu
3.3.2. Ph−ơng pháp phân lập virus viêm gan vịt
* Xử lí bệnh phẩm:
Lấy bệnh phẩm là gan của vịt con mắc bệnh tự nhiên có triệu chứng, bệnh tích đặc tr−ng của bệnh viêm gan do virus ở vịt. Đem nghiền gan với n−ớc sinh lý thành huyễn dịch 1/5, làm đông tan 3 lần. Xử lý huyễn dịch bằng kháng sinh (penicillin + streptomycin), để huyễn dịch ở nhiệt độ 40C trong vòng 2 giờ. Ly tâm huyễn dịch với tốc độ 3000 vòng/ phút trong 15 phút, lấy phần trên đem xử lý bằng Chloroform 5% trong vòng 10 phút để diệt virus khác không phải là virus viêm gan vịt. Ta đ−ợc huyễn dịch bệnh phẩm dùng để phân lập.
* Phân lập virus viêm gan vịt trên phôi vịt
Thí nghiệm đ−ợc bố trí làm 3 lần, mỗi lần 35 phôi vịt 13 ngày tuổi, khoẻ mạnh, chia làm hai lô: 25 phôi cho lô thí nghiệm, 10 phôi cho lô đối chứng.
- Lô thí nghiệm: Mỗi phôi tiêm 0,1 ml huyễn dịch bệnh phẩm vào xoang niệu mô.
- Lô đối chứng: Mỗi phôi tiêm 0,1 ml n−ớc sinh lý.
Sau khi tiêm 18 giờ, soi kiểm tra ngày 3 lần, theo dõi thời gian chết phôi. Những phôi chết và sống đều tiến hành mổ phôi, kiểm tra bệnh tích đại thể.
Sự có mặt của virus đ−ợc đánh giá dựa vào sự nhân lên của virus trên phôi, virus gây chết phôi và các bệnh tích đặc tr−ng trên phôi.
* Phân lập virus viêm gan vịt trên vịt con
Thí nghiệm đ−ợc bố trí làm 3 lần, mỗi lần dùng 35 con vịt con 7 ngày tuổi, khoẻ mạnh, đ−ợc nở từ trứng của đàn vịt bố mẹ khoẻ mạnh, không nằm trong ổ dịch, ch−a đ−ợc tiêm kháng thể hoặc vacxin viêm gan vịt, chia làm 2 lô: 25 vịt con cho lô thí nghiệm, 10 vịt con cho lô đối chứng.
- Lô thí nghiệm: Mỗi vịt thí nghiệm tiêm 0,5 ml huyễn dịch bệnh phẩm, tiêm bắp.
- Lô đối chứng: Vịt không tiêm bệnh phẩm, tiêm 0,5 ml n−ớc sinh lý. Sau khi tiêm, tiến hành theo dõi vịt trong vòng 10 ngày, quan sát biểu hiện của vịt, ghi thời gian vịt chết, cả vịt sống và chết đều mổ khám quan sát bệnh tích đại thể.
Đánh giá sự có mặt của virus viêm gan vịt dựa vào các triệu chứng, bệnh tích điển hình của bệnh viêm gan vịt.