3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PH ƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨ U
3.51Phương phỏp nghiờn cứu trong phũng:
3.5.1.1. Phương phỏp lấy mẫu
Lấy mẫu theo tiờu chuẩn kiểm dịch thực vật Việt Nam TCVN 4731-89 Lấy mẫu trờn cỏc lụ hạt giống vừa nhập khẩu và một số loại giống thuần tương ứng ủược giữ giống tại cỏc hộ gia ủỡnh qua cỏc vụ ủể giỏm ủịnh thành phần nấm bệnh hại.
3.5.1.2. Phương phỏp giỏm ủịnh thành phần nấm bệnh trờn cỏc hạt .
Phương phỏp giấy thấm - theo phương phỏp của ISTA ( Internationa Seed Testing Association)
+ Lấy 400 hạt/ 1 mẫu, chia thành 16 phần, mỗi phần 25 hạt
+ Chuẩn bịủĩa Petri và giấy thấm ( blotter paper) ủường kớnh 9cm ( ủó
ủược khử trựng), 16 ủĩa/ 1 mẫu./
+ Lấy 3 tờ giấy thấm nhỳng vào nước cất sao cho toàn bộ giấy thấm
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…… 26
+ Cỏch ủặt hạt: ðặt 25 hạt/1 ủĩa Petri, ủặt thành 3 vũng, vũng ngoài 15 hạt, vũng giữa 9 hạt, 1 hạt ở trung tõm của ủĩa, khoảng cỏch giữa cỏc hạt và cỏc vũng bằng nhau. Sau khi ủặt xong ghi mó số mẫu hoặc tờn mẫu giống, ngày ủặt và ngày kiểm tra trờn mặt của ủĩa ủem toàn bộ số ủĩa hạt ủó ủặt ủể
trong phũng nuụi cấy ở nhiệt ủộ 200C với thời gian chiếu sỏng 12 giờ tối xen kẽ 12 giờ sỏng. Sau 7 ngày ủem kiểm tra hạt dưới kớnh hiển vi soi nổi, soi lần lượt từ vũng ngoài vào vũng trong theo tõm ủĩa, ủỏnh dấu mẫu kiểm tra và tờn nấm.
+ Chỉ tiờu theo dừi: ủếm tổng số hạt bị nhiễm nấm, tổng số hạt kiểm tra
3.5.1.3. Phương phỏp nghiờn cứu, quan sỏt và mụ tả ủặc ủiểm hỡnh
thỏi của một số loại nấm bệnh gõy hại chủ yếu trờn cỏc hạt lỳa giống nhập
khẩu.
Chuẩn bị cỏc mụi trường nuụi cấy nấm bao gồm mụi trường PGA - Mụi trường PGA thành phần gồm:
+ Khoai tõy 200 gram + Glucose 20 gram + Agar 20 gram + Nước cất 1000ml
Lấy cỏc hạt lỳa ủó bị nhiễm cỏc loài nấm khỏc nhau ủem cấy trờn mụi trường PGA ủó ủược chuẩn bị sẵn ủể trong phũng nuụi cấy từ 5-7 ngày trong
ủiều kiện nhiệt ủộ 200C với chu kỡ 12 giờ sỏng, tối xen kẽ, sau ủú quan sỏt nấm bệnh dưới kớnh hiển vi.
Dựng kim khờu nấm ủặt trờn lam dựng kớnh hiển vi quang học ủể quan sỏt hỡnh thỏi nấm và ủịnh tờn nấm theo tài liệu giỏm ủịnh của Mathur và Olga(1999). Sau ủú mụ tả và chụp ảnh hỡnh thỏi của một số loài nấm chớnh tồn tại trờn hạt giống lỳa nhập khẩu. Xỏc ủịnh những loài nấm gõy hại ủó cú
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp…… 27
mặt phổ biến trờn ủồng ruộng, cỏc loài cú nguy cơ gõy hại ủến sản xuất lỳa gạo tại Việt Nam.
3.5.1.4. Phương phỏp lõy bệnh nhõn tạo
Tạo nguồn bào tử và chuẩn bị dung dịch chứa nấm: Nấm ủược nuụi cấy trờn ủĩa petri sau ủú ủổ 10 – 20ml nước cất vào ủĩa, cào nhẹ trờn bề mặt ủể
bào rử nấm hũa tan trong nước. Lọc dung dịch bào tử nấm ủể loại bỏ chất căn bó và thạch. ðếm lượng bào tử trong dung dịch sao cho phải ủạt ủược 120 – 150 bào tử trờn một quang trường, tương ủương với 105 bào tử/ml. Bổ sung vào dung dịch bào tửb một giọt Tween 20 (nồng ủộ 0,02%) ủể tăng ủộ bỏm dớnh trờn lỏ lỳa.
Chuẩn bị cõy con: Gieo 10 hạt lỳa trờn 1 hộp, cú 3 lần nhắc lại. Sau 21 ngày khi gieo hạt, cõy lỳa cú 5 -6 lỏ thỡ cú thể sử dụng cho lõy nhiễm bệnh.
Lõy nhiễm: trung bỡnh mỗi cõy lỳa ủược phun lờn lỏ khoảng 1ml dung dịch bào tử nấm. Những cõy lỳa ủó lõy nhiễm ủược ủưa vào phũng tối cú ủộ ẩm cao, nhiệt ủộ 20 – 25oC trong 24 giờ ủể bào tử nấm nảy mầm sau ủú chuyển sang phũng cú ỏnh sỏng thường, ủộ ẩm cao, nhiệt ủộ từ 25 – 30oC ủể
nấm phỏt triển và gõy bệnh, sau ủú theo dừi tỡnh hỡnh nhiễm bệnh của từng giống.
3.5.1.5. Phương phỏp nghiờn cứu ảnh hưởng của bệnh ủến tỉ lệ nảy
mầm và sức sống cõy mạ:
Theo tiờu chuẩn của ISTA, 1998 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});