Việc ỏp dụng cỏc thành tựu khoa học kỹ thuật hiện ủại ủó trở lờn cần thiết và hữu hiệu trong việc chẩn ủoỏn cỏc bệnh nguy hiểm trờn cõy trồng. Một trong những phương phỏp hiệu quả, chớnh xỏc ủược ỏp dụng phổ biến trờn Thế giới là phương phỏp Enzyme Linked Immunosorbent Assay
(ELISA). Ngày nay, nhiều dạng khỏc nhau của ELISA ủang ủược sử dụng thường xuyờn [65][77]. Trong ủiều kiện Việt Nam hiện nay, phương phỏp ELISA ủặc biệt cú ý nghĩa trong chẩn ủoỏn bệnh hại cõy trồng do vi sinh vật gõy ra.
Năm 1969, khi Arrameas liờn kết một khỏng thể IgG với một Enzyme và chứng minh rằng, khỏng thể liờn kết Enzyme này vừa duy trỡ tớnh ủặc hiệu miễn dịch của khỏng thể vừa duy trỡ tớnh hoạt ủộng của Enzyme.
Năm 1977, Clarck và Adams lần ủầu tiờn ứng dụng phương phỏp ELISA ủể chẩn ủoỏn cỏc cõy nhiễm bệnh virus thực vật.
Hiện nay, cú hai phương phỏp ELISA ủang ủược ứng dụng rộng rói là phương phỏp Double Antibody Sandwich (DAS - ELISA), phương phỏp này gọi là phương phỏp ELISA trực tiếp. Phương phỏp thứ hai là Indirect ELISA gọi là phương phỏp ELISA giỏn tiếp.
+ Phương phỏp ELISA trực tiếp (DAS - ELISA):
Phương phỏp DAS - ELISA ủược sử dụng dưới dạng kỹ thuật ELISA kẹp kộp khỏng thể và ủược Clarck và Adam mụ tả vào năm 1977. Phương phỏp DAS - ELISA sử dụng khỏng thểủặc hiệu virus ủể vừa bẫy virus vừa phỏt hiện virus ủó bẫy ủược (khỏng thể liờn kết men sẽ tập hợp ủặc hiệu với virus ủược bẫy). Kỹ thuật này ủược sử dụng rộng rói nhưng cú hai nhược ủiểm:
- Rất ủặc hiệu chủng, do vậy khú phỏt hiện ủược cỏc chủng của cựng một virus nếu chủng này cú quan hệ huyết thanh kộm. Tớnh ủặc hiệu cao này là do Enzyme khi liờn kết với khỏng thể ủó làm giảm khả năng kết hợp của khỏng thể này với cỏc chủng virus cú quan hệ huyết thanh khụng chặt.
- ðũi hỏi phải cú từng loại khỏng thể liờn kết Enzyme khỏc nhau cho mỗi loại virus [66]
+ Phương phỏp ELISA giỏn tiếp (Indirect ELISA):
thể ủặc hiệu khỏng thể (khỏng thể liờn kết với Enzyme) cú thể phỏt hiện rất nhiều chủng của virus cần kiểm tra ủú. ðộ nhạy của khỏng nguyờn cao hơn và cú giỏ trị Optical Density (OD) ở cỏc giếng ủối chứng (mẫu cõy khỏe) thấp hơn. Cú ủược ưu ủiểm này là nhờ khỏng thểủặc hiệu virus và khỏng thể ủặc hiệu khỏng thể tạo ra từ ủộng vật mỏu núng khỏc loài (Rowhani and Falk, 1995) [85]. Theo L.F Salazar (1990), phương phỏp ELISA núi chung nhạy cảm rất nhiều và cũng cần ớt huyết thanh hơn cỏc phương phỏp huyết thanh khỏc [9].