M CH2 SH16 PQ3 TN41 TN
4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 1 Kết luận
4.1. Kết luận
- Hầu hết các chủng đều có đường kính vòng phân giải trên 2 cm, trong đó lớn nhất là chủng PQ34 là 4 cm.
- Chủng SH16 có hoạt độ chung lớn nhất, chủng PQ34 có hoạt độ riêng lớn nhất và lớn hơn nhiều ở thực vật.
- Khối lượng phân tử của chitinase khoảng 42 kDa.
- 5 chủng nấm Trichoderma CH2, SH16, PQ3, TN41,TN42 đề thuộc loài
Trichoderma asperellum
- Gen chtinase của 5 chủng CH2, SH16, PQ3, TN41,TN42 đều có chiều dài là 1459 bp
- Hoạt độ chitinase tái tổ hợp cao nhất sau 96h cảm ứng với galactose 2 % đạt trên 7 U/mg protein
4.2. Đề nghị
- Tiếp tục tối ưu quy trình sản xuất chitinase, tìm ra điều kiện sản xuất chitinase với hiệu xuất cao hơn.
50
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Tài liệu tiếng việt
1. Nguyễn Quỳnh Anh, Nguyễn Đức Hoàng, Trần Linh Thước (2003), “Tạo dòng và mã hóa protein vỏ VP19 của vi rút WSSV gây hội chứng đốm trắng ở tôm Sú (P. monodon)”, TC Di truyền học & Ứng dụng 4, tr. 49-55.
2. Nguyễn Văn Đĩnh (2007), Giáo trình biện pháp sinh học bảo vệ thực vật, NXB Nông Nghiệp,tr. 38, 65,128-143
3. Đỗ Tấn Dũng (2006), “Nghiên cứu bệnh héo rủ gốc mốc trắng (Sclerotium rolfsii Sacc) hại một số cây trồng cạn vùng Hà Nội và phụ cận năm 2005-2006”, Trường đại học Nông Nghiệp I Hà Nội.
4. Nguyễn Thị Ngân Hà (2008), Khảo sát hoạt tính chitinase ở một số loài thực vật, Đồ án tốt nghiệp, Trường Đại học Bách khoa Đà Nẳng.
5.Phạm Thanh Hòa (2009), nghiên cứu khả năng đối kháng của nấm Trichoderma với nấm bệnh hại cây trồng sclerotium rolfsii sacc trong điều kiện in vitro, Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Nông Lâm Huế.
6. Nguyễn Xuân Hồng, Nguyễn Thị Yến (1991). “Kết quả nghiên cứu bệnh hại lạc ở Việt Nam”, Tiến bộ kỹ thuật về trồng lạc và đậu đỗ ở Việt Nam, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, 111-120.
7. Nguyễn Hoàng Lộc, Trần Thị Lệ, Hà Thị Minh Thi (2007), Giáo trình Sinh học phân tử, NXB Đại học Huế.
8. Nguyễn Hoàng Lộc (2007), Giáo trình nhập môn công nghệ sinh học, NXB Đại học Huế.
9. Trần Kim Long, Lê Đình Đôn, Tạ Thanh Nam, Ngô Thị Xuân Thịnh, Nguyễn Thị Tiến Sỹ, Trần Thị Xê (2009), “Phòng trừ bệnh do nấm Phytophthora trên cây hồ tiêu bằng chế phẩm sinh học Trichoderma (Trico- VTN) tại Tây Nguyên”.Tạp chí chuyên ngành bảo vệ thực vật. Số 2, Tr. 22-27.
51
10.Vũ Triệu Mân (2007), Giáo trình bệnh cây đại cương, Trường Đại học nông nghiệp I Hà Nội, tr. 3-6.
11. Mehan V K,Nguyễn Xuân Hồng, Nguyễn Thị Ly (1991), “Kết quả điều tra, xác định nguyên nhân gây hiện tượng chết yểu hại lạc ở miền Bắc Việt Nam”, Tiến bộ kỹ thuật về trồng lạc và đậu đỗ ở Việt Nam, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, Tr. 105-109.
12. Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hóa sinh học, Nhà xuất bản đại học quốc gia Hà Nội.
13. Nguyễn Thị Thuần, Lê Minh Thi, Dương Thị Hồng (1996). “Kết quả nghiên cứu bước bầu về nấm đối kháng Trichoderma ”.Tuyển tập công trình nghiên cứu bảo vệ thực vật 1990-1995. Nxb Hà Nội.
14. Nguyễn Văn Tuất (2002), Kỹ thuật chẩn đoán và giám định bệnh hại cây trồng, Nxb Nông Nghiệp Hà Nội, 22-23.
15. Hà Thị Quyến (2008), Nghiên cứu tính chất của Chitinase ở một số chủng vi nấm Metarhizium anisopliae diệt côn trùng, Luận văn thạc sĩ, Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh vật.
Tài liệu tiếng anh
16. Alias N., Mahadi N. M., Murad A. M. A., Bakar F. D. A., Mahmood N. A. N., Illias R. M. (2009), “Expression and characterization of
Trichoderma virens UKM-1 endochitinasein Escherichia coli”, World J Microbiol Biotechnol 25, pp. 561–572.
17. Baneyx F. (1999), Ecombinant protein expression in Escherichia coli, Current Opinion in Biotechnology, 10, pp. 411-421.
52
resistance to Fusarium crown and root rot in tomato seed treatment with chitosan, Phytopathology 84, pp. 1432-1444.
19. Bitter G. A., Chen K. K., Banks A. R., Lai P H. (1984), “Secretion of foreign proteins from Saccharomyces cerevisiae directed by a-factor gene fusions”, Proc. Natl. Acad. Sci, 81, pp.5330-5334
20. Broglie Z. K., Gaynor J. J., Broglie R. M. (1986), Ethylene- regulated gene expression: mulecular cloning of the genes encoding an endochitinase from Phaseolus vulgaris, Proc. Natl Acad. Sci. USA 83, pp. 6820-6824.
21. Caihong H., Qian Y., Jinzhu S., Yingqi S. (2007), “Expression of a Novel Chitinase Gene from Trichoderma harzianum in Saccharomyces cerevisiae”, Chinese National Programs for High Technology Research and Development, pp. 283-285.
22. Casolio C., Gutiérrez A., Jiménez B., Van Montagu M., Herrera E. A. (1994), Characterization of ech-42, a Trichoderma harzianum endochitinase gene expressed during mycoparasitism, Proc. Natl. Acad. Sci, 91, pp. 10903- 10907.
23. Corona J. E. B., Mazzocco E. N., Robledo R. V., Hernandez R. S., Bautista M., Jimenez B., Ibarra J. E. (2003), “Cloning, Sequencing, and Expression of the Chitinase Gene chiA74 from Bacillus thuringiensis”, Appliedand Environmental Microbiology, Vol.69, No.2, pp. 1023–1029
24. Cowan D. (1993), Industrial enzyme technology. Trend Biotechnol 14, pp. 177-178.
25. De J., Gallego A. H., Lora J. M., Benitez T., Toro J. A. P., Llobell A. (1992), Insolation and charaterizatin of three chitinase from Trichoderma haianum, Eur. J. Biochem, 206,pp. 859.
53
proteins by microbes and higher organisms. Biotechnol Adv 53, pp. 112-122. 27. Gold M., Hayes C., Harman G. E. (1994), Molecular and cellular biology of biocontrol by Trichoderma harzianum, Trends Biotechnol 12, pp. 478-482.
28. Guang B. Z., Yong J. C., Qin S., Hong B. M., Yan G., Qin W, Zhi J., Ying X., Xue G. Z. (2004), “Human Recombinant B7 H3 Expressed in E. coli
Enhances T Lymphocyte Proliferation and IL-10 Secretion in vitro”, Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 36(6), pp. 430–436.
29. Guozhu C., Chery L. P., Herb E. S. (2003), “Controlled Expression of an rpoS Antisense RNA Can Inhibit RpoS Function in Escherichia coli”, Antimicrobial Agentsand Chemotherapy, Vol.47, No.11, pp.3485–3493.
30. Hamshary E., M. O. I., Salem H. H., Soliman. N. A. (2008), “Molecular Screening of Chitinase Gene in Bacillus spp.”, Journal of Applied Sciences Research, 4(9), pp. 1118-1123.
31. Harighi M. J., Zamani M. R., Motallehi M. (2007), “Evaluation of Antifungal Activity of Purified Chitinase 42 from Trichoderma antroviride PTCC 5200”. Biotechnology 6, pp. 28-33.
32. Harry B., Helena S., Sylvain C., Hans S., Anu K (2007), Heterologous expression and site-directed mutagenesis studies of two Trichoderma harzianum chitinases, Chit33 and Chit42, in Escherichia coli, VTT Technical Research Centre of Finland, P.O. Box 1000, FI-02044 VTT, Finland .
33. Hartingsveldt W., Zeijl C. M., Harteeld G. M., Gouka R. J. (1993), “Cloning, characterization and overexpression of the phytase-encoding gene (phyA) of A. niger”, Gene 127, pp. 87-94.
54
34. Hendy L., Gallagher J., Winter A., Hacket T. J., McHale L., McHale A. P. (1990), Production of extracellular chitinolytic system by Talaromyces emersonii CBS 814. 70, Biotechnol. Lett, 12, pp. 673- 678.
35. Henrissat B. (1991), “A classification of glycosyl hydrolase based on amino acid sequence similarities”, Biochem J, 280, pp. 309-316.
36. Henrissat B., Bairoch A. (1993), “New families in the classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities”, Biochem J , 293, pp. 781-788.