- Kỹ thuật MS/MS
2.3.2.4Thẩm định phơng pháp phân tích * Tính chọn lọc
Chơng 2: Đối tợng, nội dung và phơng pháp nghiên cứu 2.1.Đối tợng nghiên cứu
2.3.2.4Thẩm định phơng pháp phân tích * Tính chọn lọc
Chuẩn bị mẫu: - HT trắng. - HT có AZI. - HT có IS.
- HT có AZI và IS.
Xử lý mẫu và tiến hành phân tích
* Tính phù hợp của hệ thống sắc ký
Chuẩn bị mẫu chuẩn có AZI và IS trong pha động. Tiến hành sắc ký 6 lần liên tiếp, xác định độ lệch chuẩn tơng đối của các thông số: thời gian lu, tỷ số diện tích pic.
* Khoảng nồng độ tuyến tính, hàm đáp ứng
Chuẩn bị các mẫu HT trắng, thêm AZI và IS tạo thành các mẫu có nồng
độ AZI từ 0,02 - 2 àg/ml, xử lý mẫu theo sơ đồ hình 3.1 và tiến hành phân tích.
*LOD và LOQ
LOD là nồng độ thấp nhất của chất phân tích có thể xác định đợc nhng không nhất thiết phải định lợng đợc trong điều kiện thí nghiệm cụ thể. LOD đ- ợc coi là nồng độ chất phân tích gây nên sự tăng tín hiệu đáp ứng 3 lần so với đáp ứng tín hiệu của mẫu trắng (S/N=3). LOQ là nồng độ thấp nhất của chất cần phân tích có thể định lợng đợc với độ đúng và độ chính xác phù hợp. LOQ đợc chấp nhận nếu đáp ứng của chất phân tích phải ít nhất gấp 10 lần đáp ứng của mẫu trắng. Trong phơng pháp sắc ký độ nhiễu của đờng nền có thể thay cho tín hiệu của mẫu trắng.
Tiến hành xử lý các mẫu HT trắng và mẫu chuẩn có nồng độ AZI thấp dần và tiến hành phân tích.
* Độ đúng
Chuẩn bị các mẫu AZI trong HT trắng ở 3 nồng độ khảo sát, mỗi nồng độ làm 5 mẫu, xử lý mẫu và tiến hành phân tích, so sánh giá trị trung bình giữa
các lần định lợng của mỗi nồng độ với giá trị thực có trong mẫu, tính theo lợng chuẩn đã cân và thể tích đã pha.
*Độ chính xác.
Chuẩn bị các mẫu AZI trong HT trắng ở 3 nồng độ, mỗi nồng độ làm 5 mẫu và xử lý nh trong phần xác định độ đúng, sau khi tiến hành sác ký, đánh giá độ lệch chuẩn tơng đối của các mẫu theo từng nồng độ.