kinh alpha
1. Gây miễn nhiễm thỏ để tạo kháng thể kháng độc tố thần kinh alpha
thần kinh alpha
1.1. Nguyên tắc
Để tạo được kháng thể, buộc phải dựa vào cơ thể động vật. Kháng nguyên là độc tố thần kinh alpha tinh chế sau quá trình Sắc ký lọc. Khi tiêm độc tố alpha vào cơ thể động vật (thỏ), trong cơ thể sẽ hình thành một đáp ứng miễn nhiễm (ĐƯMN) để chống lại sự xâm nhập của kháng nguyên lạ, đó là độc tố alpha, bằng việc sản sinh ra kháng thể đặc hiệu với độc tố này [2, 8, 12, 17].
Khi tiếp xúc lần đầu với phân tử độc tố thần kinh alpha, cơ thể sẽ hình thành một ĐƯMN gọi là đáp ứng sơ cấp. Các đại thực bào nhận diện các phân tử độc tố alpha, xử lý rồi trình diện với tế bào bạch huyết TH, từ đó kích thích sự biệt hóa của tế bào bạch huyết B thành tương bào sản sinh kháng thể chống phân tử độc tố alpha và đồng thời cũng tạo được các tế bào nhớ (memory cell) đối với độc tố này. Kháng thể tạo ra gồm phần lớn là IgM với nồng độ và ái lực thấp. Tuy nhiên, điều quan trọng nhất trong đáp ứng sơ cấp là sự tạo thành các tế bào nhớ, do đó, ĐƯMN sẽ xảy ra nhanh chóng khi cơ thể tiếp xúc lại với cùng một kháng nguyên độc tố alpha ban đầu. Hình 10phía dưới trình bày một ĐƯMN từ khi tiếp xúc với kháng nguyên đến khi hình thành kháng thể và tế bào nhớ.
Hình 10: Quá trình trình diện kháng nguyên trong ĐƯMN [27].
Như đã nêu ở trên, khi tiếp xúc lại với độc tố alpha, cơ thể sẽ nhanh chóng đáp ứng lại vì trong cơ thể đã có sẵn các tế bào nhớ. Đáp ứng này là đáp ứng thứ cấp được đặc trưng bởi sự gia tăng nhanh nồng độ kháng thể, chủ yếu là IgG, cùng với sự tăng cường miễn nhiễm qua trung gian tế bào.
Nếu tiêm nhắc lại liên tục nhiều lần thì nồng độ kháng thể IgG sản sinh càng cao và ái lực càng mạnh.
1.2. Tiến hành
Dựa vào những điều nêu trên, qui trình gây miễn nhiễm thỏ để tạo kháng thể chống độc tố thần kinh alpha được tiến hành như sau:
Thỏ gây miễn nhiễm phải hoàn toàn khỏe mạnh, hoàn toàn không có dấu hiệu bệnh tật, được nuôi trong điều kiện vệ sinh tốt và an toàn.
Gây miễn nhiễm bằng độc tố thần kinh alpha cho một thỏ nhằm thu huyết thanh kháng độc tố thần kinh alpha này.
Thỏ (2kg) được tiêm độc tố thần kinh mỗi tháng một lần bằng cách tiêm dưới da lưng thành từng mũi nhỏ để tăng cường đáp ứng miễn nhiễm và không làm tổn thương đến mô. Qui trình miễn nhiễm tiến hành như bảng 3:
Bảng 3:Qui trình miễn nhiễm thỏ với độc tố thần kinh alpha.
Mũi tiêm Liều (µg) Thể tích máu (ml) Mẫn cảm 50 1*
Nhắc lại lần 1 50 0 Nhắc lại lần 2 50 1**
Nhắc lại lần 3 50 50**
Nhắc lại lần 4 50 50**
Nhắc lại lần 5 50 93** (lấy hết máu, thỏ chết)
*Trước khi tiêm, **Sau khi tiêm 10 ngày.
Trước khi tiêm mũi mẫn cảm đầu tiên, lấy 1ml máu để làm đối chứng về sự xuất hiện của kháng thể đặc hiệu với độc tố alpha trước và sau khi gây miễn nhiễm (phương pháp Ouchterlony).
(Sử dụng Freund’s complete adjuvant và vaccine ho gà cho mũi tiêm mẫn cảm đầu tiên, Freund’s incomplete adjuvant cho các mũi tiêm nhắc lại).
