năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro
Ren là giống lan có tốc độ sinh trưởng chậm vì vậy trong in-vitro cần phải chọn một số chất điều hòa sinh trưởng ở nồng độ thích hợp để rút ngắn quá trình sinh trưởng của cây. BAP và NAA là hai chất điều hòa sinh trưởng thường được sử dụng trong nuôi cấy mô nhằm tăng sinh khối và kích thích tạo rễ cho cây.Đối với lan Ren việc phối hợp 2 chất này trong cùng môi trường nuôi cấy hay tách riêng chúng là thích hợp và nồng độ là bao nhiêu để Ren sinh trưởng, phát triển tốt nhất. Những thí nghiệm dưới đây được tiến hành nhằm tìm ra nồng độ thích hợp của các chất điều hòa sinh trưởng cho sinh trưởng và phát triển của lan Ren
4.1.1.1 Ảnh hưởng của BAP và NAA đến số lá và chiều dài lá lan Ren in-vitro
Xét về chỉ tiêu số lá:
Bảng 4.1 cho thấy: Giai đoạn 30 NSC: với số lá ban đầu là 3 lá. Số lá trên cây có chiều hướng tăng dần khi nồng độ BAP tăng từ 0,5 đến 1,5mg/lít, cao nhất ở NT3 và 8 có nồng độ 1,5mg/lít BAP cho số lá trung bình là 4,3lá, khi tiếp tục tăng nồng độ
BAP lên 2 đến 2,5mg/lít thì số lá ở các NT giảm dần. NT3 (1,5mg/lít BAP không kết hợp với NAA) cho số lá nhiều nhất (4,3 lá), NT1 có số lá thấp nhất (3,2 lá) và các NT còn lại có số lá biến động từ 3,3 đến 4,2 lá.
Giai đoạn 60 NSC: Giai đoạn này số lá tăng thêm từ 0,7 đến 1,7 lá ở các nghiệm thức. NT 3 và 8 có số lá trung bình cao nhất (5,2 lá). NT3 cho số lá nhiều nhất (5,3 lá), NT5 có số lá ít nhất (4,6 lá) và các NT còn lại có số lá biến động từ 4,8 đến 5,2 lá.
22
Bảng 4.1:Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số lá (lá/chồi) của lan Ren in-vitro NSC (mg/lít) BAP 0,0 0,2 NAA (mg/lít) Trung bình BAP
30 0,5 3,2 3,3 3,3 1,0 4,2 3,5 3,9 1,5 4,3 4,2 4,3 2,0 4,2 4,2 4,2 2,5 3,5 4,0 3,8 60 0,5 5,2 4,8 5,0 1,0 5,2 4,8 5,0 1,5 5,3 5,1 5,2 2,0 4,8 5,0 4,9 2,5 4,6 4,8 4,7 90 0,5 5,7 6,1 5,9bc 1,0 5,7 6,1 5,9bc 1,5 6,7 6,2 6,5a 2,0 6,4 6,0 6,2ab 2,5 5,4 5,8 5,6c Ftính 1,5ns 3,5* CV (%) 7,3
Ghi chú: Ký tự theo sau giá trị trung bình khác nhau trên cùng một cột có sự khác biệt trong thống kê (*: α = 0,05); ns:sự khác biệt giữa các giá trị không có ý nghĩa thống kê.
Giai đoạn 90 NSC: Số lá tăng dần khi nồng độ BAP tăng từ 0,5 đến 1,5mg/lít. Nồng độ thích hợp cho lan Ren tạo lá nhiều nhất là 1,5mg/lít cho 6,5 lá có sự khác biệt có ý nghĩa trong thống kê so với các NT khác, qua ngưỡng 1,5mg/lít là từ 2 đến 2,5mg/lít số lá có chiều hướng giảm dần. Số lá trung bình các NT không kết hợp với NAA và những NT có kết hợp BAP và 0,2mg/lít NAA không có sự chênh lệch. Kết quả xử lý thống kê cho thấy sự khác biệt giữa các nghiệm thức không có ý nghĩa trong thống kê.
Tuy nhiên NT3 cho số lá nhiều nhất (6,7 lá), thấp nhất là NT5 (5,4 lá) và các NT còn lại có số lá biến động từ 5,7 đến 6,4 lá. Tốc độ mọc lá từ giai đoạn 30 đến 60NSC ở NT1 nhanh nhất là 2 lá và chậm nhất ở NT4 (0,6 lá), ở giai đoạn 60 đến 90NSC thì ngược lại NT1 (0,5 lá) và NT4 (1,6 lá). Nhìn chung, những NT chỉ có BAP không kết hợp NAA có số lá trung bình cao hơn số lá trung bình ở những NT có kết hợp BAP và 0,2mg/lít NAA vì môi trường nuôi cấy ở các NT không kết hợp với NAA chỉ chứa chất kích thích sinh trưởng BAP nên cây có nhiều lá hơn
23
Xét về chiều dài lá:
Bảng 4.2: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều dài lá (mm) của lan Ren NSC (mg/lít) BAP 0 NAA (mg/lít)0,2 Trung bình BAP
30 0,5 7,9 7,3 7,6 1,0 8,4 8,3 8,4 1,5 8,9 8,5 8,7 2,0 8,5 8,0 8,3 2,5 7,9 7,7 7,8 60 0,5 9,8 8,0 8,9 1,0 10,2 9,8 10,0 1,5 10,5 10,3 10,4 2,0 9,5 8,8 9,2 2,5 9,4 8,6 9,0 90 0,5 11,8c 11,6c 11,7bc 1,0 13,9a 13,7ab 13,8a 1,5 14,0a 13,8ab 13,9a 2,0 11,6c 12,8b 12,2b 2,5 10,4d 11,6c 11,0c Ftính 3,5* 39,2** CV(%) 4,0
Ghi chú: Ký tự theo sau giá trị trung bình khác nhau trên cùng một cột có sự khác biệt trong thống kê (*: α = 0,05; **: α = 0,01); ns:sự khác biệt giữa các giá trị không có ý nghĩa thống kê.
Bảng 4.2 cho thấy:
Giai đoạn 30 NSC: Các tại NT có 1,5mg/lít BAP có chiều dài lá trung bình dài nhất, thấp nhất ở NT có 0,5mg/lít BAP. NT3 cho chiều dài lá dài nhất (8,9 mm). NT6 cây lan có chiều dài lá ngắn nhất (7,3mm). Các NT còn lại chiều dài lá biến động từ
7,7 đến 8,5mm
Giai đoạn 60 NSC: Các NT có 1,5mg/lít BAP có chiều dài lá trung bình dài nhất, thấp nhất ở NT có 0,5mg/lít BAP. Tương tự với 30 NSC, chất dinh dưỡng cũng
được dồn phần lớn cho việc nuôi lá ở các NT chỉ bổ sung BAP vào môi trường nuôi cấy. Trong đó NT3 và 8 có chiều dài lá cao nhất lần lượt là 10,5 và 10,3mm thì sự
khác biệt không có ý nghĩa thống kê, NT6 cây lan có chiều dài lá ngắn nhất (8mm), các NT còn lại chiều dài lá biến động từ 8,6 đến 10,2mm.
Giai đoạn 90 NSC: Tốc độ tăng chiều dài lá gấp đôi tốc độ tăng chiều dài lá giai
24
tới giai đoạn 90NSC lá dài thêm 2 đến 3,8mm. Tại thời điểm này, NT3 cho lá đạt chiều dài lên đến 14mm dài nhất trong các NT, thấp nhất NT5 (10,4mm) còn các NT khác chiều dài lá dao động từ 11,6 đến 13,9mm.
Qua thí nghiệm cho thấy chiều dài lá của những NT chỉ có BAP dài hơn so với các nghiệm thức còn lại. Nguyên nhân là do BAP kích thích việc phát triển lá của cây lan Ren mạnh hơn khi có sự kết hợp BAP với NAA. với nồng độ BAP (1,5mg/lít) không kết hợp NAA sau 90 ngày nuôi cấy cho chiều dài lá dài nhất. Thực nghiệm cũng cho thấy rằng nồng độ BAP khi cho vào môi trường vượt quá ngưỡng sẽ không giúp cây phát triển tốt mà còn gây ảnh hưởng đến sự phát triển của cây. Kết quả thí nghiệm giúp xác định được ngưỡng chất điều hoà sinh trưởng để bổ sung vào môi trường nuôi cấy cho phù hợp, tránh lãng phí.
4.1.1.2 Ảnh hưởng của BAP và NAA đến số rễ và chiều dài rễ lan Ren in-vitro
Xét về chỉ tiêu số rễ:
Bảng 4.3:Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số rễ (rễ/chồi) của lan Ren in-vitro
NSC BAP (mg/lít) NAA (mg/lít) Trung bình BAP 0 0,2 30 0,5 1,2 1,3 1,3 1,0 1,2 1,5 1,4 1,5 1,3 1,7 1,5 2,0 1,3 1,6 1,4 2,5 1,3 1,5 1,4 60 0,5 3,4 4,5 4,0 1,0 3,5 4,6 4,1 1,5 4,2 5,1 4,6 2,0 4,0 5,0 4,5 2,5 3,7 4,8 4,3 90 0,5 5,7ef 6,7d 6,2c 1,0 5,9e 6,9cd 6,4bc 1,5 6,7d 7,9a 7,3a 2,0 6,1e 7,3b 6,7b 2,5 5,4f 7,3bc 6,3bc Ftính 3,9* 20,6** CV (%) 3,7
Ghi chú: Ký tự theo sau giá trị trung bình khác nhau trên cùng một cột có sự khác biệt trong thống kê (**: α = 0,01).
Bảng 4.3 cho thấy: Giai đoạn 30 NSC: Rễ mới bắt đầu xuất hiện, ở NT3 và NT8 cho số rễ trung bình nhiều nhất (1,5 rễ), NT1 và 2 cho số rễ ít nhất (1,3 rễ). Trong
25
đó NT8 có số rễ nhiều nhất (1,7 rễ), NT1 và 2 có số rễ thấp nhất (1,2 rễ) và các NT còn lại có số rễ biến động từ 1,3 đến 1,6 rễ.
Giai đoạn 60 NSC: Ở các nghiệm thức số rễ tăng thêm từ 2,7 rễ đến 3,1 rễ. NT3 và 8 cho số rễ trung bình nhiều nhất là 4,6 rễ, NT1 và 2 cho số rễ trung bình ít nhất (4 rễ). Khi môi trường nuôi cấy có bổ sung thêm NAA thì cây lan Ren được kích thích ra rễ
nhiều hơn. Trong đó, NT8 có số rễ nhiều nhất (5,1 rễ), NT1 có số rễ ít nhất (3,4 rễ), các nghiệm thức còn lại số rễ biến động từ 3,5 đến 5 rễ.
Giai đoạn 90 NSC: Kết quả xử lý thông kê cho thấy sự khác biệt giữa các nghiệm thức
ở mức rất có ý nghĩa. Số rễ tăng dần khi nồng độ BAP tăng từ 0,5 mg/lít đến 1.5 mg/lít, tại nồng độ 1,5mg/lít cây có số rễ trung bình nhiều nhất (7,3 rễ) và giảm dần khi nồng độ BAP tăng thêm từ 2 đến 2,5 mg/lít. NT8 cho số rễ nhiều nhất (7,9 rễ), số
rễ ít nhất ở NT5 (5,4 rễ) và số rễ biến động từ 5,7 đến 7,3 rễở các NT còn lại.
Tốc độ ra rễ ở những NT có kết hợp giữa BAP và 0,2mg/lít NAA nhanh hơn những NT chỉ có BAP. Những NT chỉ có BAP tăng thêm từ 2,2 đến 2,9 rễ, những NT có kết hợp BAP và 0,2mg/lít NAA từ 3,1 đến 3,3 rễ còn giai đoạn từ 60 đến 90NSC: Những NT chỉ có BAP tăng thêm từ 1,7 đến 2,5 rễ, các NT có kết hợp giữa BAP và 0,2mg/lít NAA tăng từ 2,2 đến 2,8 rễ.
Kết quả thí nghiệm cho thấy với nồng độ BAP (1,5mg/lít) kết hợp NAA (0,2mg/lít) sau 90 ngày nuôi cấy cho số rễ nhiều nhất.
Xét về chỉ tiêu chiều dài rễ:
Kết quả theo dõi chiều dài rễ được tiến hành ở giai đoạn cuối thí nghiệm (90NSC) và được trình bày ở bảng 4.4.
Bảng 4.4:Ảnh hưởng của BAP và NAA đến chiều dài rễ (mm) lan Ren sau 90NSC BAP (mg/lít) NAA (mg/lít) Trung bình BAP 0,0 0,2 0,5 4,7cd 4,6d 4,7c 1,0 5,0cd 5,2c 5,1bc 1,5 6,2b 7,0a 6,6a 2,0 6,2b 6,1b 6,2a 2,5 5,2cd 5,8b 5,5b Ftính 4,2* 66,7** CV (%) 4,2
Ghi chú: Ký tự theo sau giá trị trung bình khác nhau trên cùng một cột có sự khác biệt trong thống kê (*: α = 0,05; **: α = 0,01).
26
Số liệu bảng 4.4 cho thấy: Giai đoạn 90 NSC: Kết quả xử lý thống kê cho thấy có sự khác biệt ở mức rất có ý nghĩa giữa các nghiệm thức, hai NT có nồng độ BAP 1,5mg/lít cho chiều dài rễ trung bình dài nhất (6,6mm), chiều dài rễ trung bình tăng dần khi nồng độ BAP tăng dần và giảm dần khi nồng độ BAP tăng vượt ngưỡng 1,5 mg/lít. Trong đó, NT8 cho chiều dài rễ dài nhất (7mm), NT6 cho chiều dài rễ thấp nhất (4,6mm) và các nghiệm thức còn lại có chiều dài rễ biến động từ 4,7 đến 6,2mm.
Qua theo dõi chiều dài rễ nhận thấy NT8 với nồng độ BAP (1,5mg/lít) kết hợp NAA (0,2mg/lít) sau 90 ngày nuôi cấy cho chiều dài rễ dài nhất. Số liệu bảng 4.4 chỉ
ra rằng nồng độ BAP khi cho vào môi trường vượt quá ngưỡng sẽ không giúp cây phát triển tốt mà còn gây ảnh hưởng đến sự phát triển.
4.1.1.3 Ảnh hưởng của BAP và NAA đến chiều cao chồi và trọng lượng tươi lan Ren
Xét về chỉ tiêu chiều cao chồi:
Bảng 4.5:Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều cao chồi (mm) lan Ren in-vitro
NSC (mg/lít) BAP NAA (mg/lít) Trung bình BAP
0 0,2 30 0,5 3,4 3,8 3,6 1,0 3,7 4,1 3,9 1,5 4,2 4,6 4,4 2,0 3,6 3,8 3,7 2,5 3,5 3,7 3,6 60 0,5 4,8 5,0 4,9 1,0 5,0 5,4 5,2 1,5 5,2 6,0 5,6 2,0 4,9 5,3 5,1 2,5 4,6 4,6 4,6 90 0,5 6,2b 6,6b 6,4ab 1,0 6,4b 6,6b 6,5ab 1,5 6,5b 7,3a 6,9a 2,0 6,5b 6,3b 6,4ab 2,5 6,0b 6,1b 6,1b Ftính 3,2* 9,1** CV (%) 3,9
Ghi chú: Ký tự theo sau giá trị trung bình khác nhau trên cùng một cột có sự khác biệt trong thống kê (*: α = 0,05; **: α = 0,01); ns:Sự khác biệt giữa các giá trị không có ý nghĩa thống kê.
Số liệu bảng 4.5 cho thấy: Giai đoạn 30 NSC: Các NT có bổ sung 1,5mg/lít BAP có chiều cao chồi trung bình cao nhất (4,4mm), chiều cao chồi tăng dần khi nồng
27
độ BAP tăng 0,5 đến 1,5mg/lít và giảm dần khi nồng độ BAP cao hơn 1,5mg/lít. NT8 cho chiều cao chồi cao nhất là 4,6mm, NT3 cây có chiều cao chồi thấp nhất là 3,4mm, các NT còn lại có chiều cao chồi biến động từ 3,5 đến 4,2mm.
Giai đoạn 60 NSC: Các NT có bổ sung 1,5mg/lít BAP có chiều cao chồi trung bình cao nhất (5,6mm), các NT có 2,5mg/lít BAP có chiều cao chồi trung bình thấp nhất (4,6mm). Ở NT8 cho chiều cao chồi cao nhất (6mm), thấp nhất ở NT5 và 10 (4,6mm), các NT còn lại chiều cao chồi biến động từ 4,8 đến 5,4mm.
Giai đoạn 90 NSC: Chiều cao chồi trung bình có chiều hướng tăng dần từ 0,5
đến 1,5mg/lít BAP, ở nồng độ 1,5mg/lít BAP cây có chiều cao trung bình cao nhất và khi vượt qua ngưỡng 1,5mg/lít BAP chiều cao trung bình có xu hướng giảm xuống. Kết quả xử lý thống kê cho thấy sự khác biệt giữa các nghiệm thức ở mức có ý nghĩa, trong đó NT8 có chiều cao cao nhất (7,3mm), thấp nhất ở NT5 (6,0mm), các NT còn lại biến động từ 6,1 đến 6,6mm.
Những NT chỉ có BAP có chiều cao chồi trung bình thấp hơn những NT có kết hợp BAP và 0,2mg/lít NAA do đặc tính của BAP thuộc nhóm cytokinin có tác dụng kích thích chồi bên, giảm ảnh hưởng ngọn. Trong khi NAA thuộc nhóm auxin có tác dụng kích thích hệ thống rễđồng thời có ưu thế ngọn.
Ở môi trường có kết hợp giữa BAP với NAA cây phát triển chiều cao tốt hơn. Kết quả thí nghiệm cho thấy với nồng độ BAP (1,5mg/lít) kết hợp với 0,2mg/lít NAA cho chiều cao chối cao nhất.
Xét về chỉ tiêu trọng lượng tươi:
Bảng 4.6:Ảnh hưởng BAP và NAA đến trọng lượng tươi (g) lan Ren in-vitro
BAP (mg/lít) NAA (mg/lít) Trung bình BAP 0,0 0,2 0,5 0,22bc 0,25abc 0,23bc 1,0 0,25abc 0,28ab 0,27ab 1,5 0,27abc 0,29a 0,28a
2,0 0,26abc 0,24abc 0,25abc
2,5 0,20c 0,23abc 0,22c
Ftính 4,1* 22,7** CV (%) 5,1
Ghi chú: Ký tự theo sau giá trị trung bình khác nhau trên cùng một cột có sự khác biệt trong thống kê (*: α = 0,05; **: α = 0,01).
28 Bảng 4.6 cho thấy:
Ở nồng độ 1,5mg/lít có trọng lượng tươi trung bình cao nhất (0,28g), những NT chỉ có BAP có trọng lượng tươi trung bình thấp hơn những NT có kết hợp BAP và 0,2mg/lít NAA. NT8 có trọng lượng tươi nặng nhất (0,29g), NT5 có trọng lượng tươi nhẹ (0,2g) và các NT còn lại trọng lượng tươi biến động từ 0,22 đến 0,28g. Kết quả
thống kê cho thấy sự khác biệt giữa các NT ở mức có ý nghĩa.
Như vậy, sử dụng 1,5mg/lít BAP kết hợp 0,2mg/lít NAA thu được trọng lượng tương cao nhất.
Nhìn chung, cây ở thí nghiệm 1 sau 90NSC có lá ít nhưng lá dài, rễ. nhiều và dài, chiều cao chồi cao nhất. NT5 có trọng lượng tươi nhẹ nhất (0,2g) lá ít và ngắn nhất trong các NT, rễ ít và ngắn, chiều cao chồi thấp nhất.
29