Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600

Một phần của tài liệu Tối ưu quy trình chuyển gene gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens (Trang 39 - 41)

E.coli DH5α (λ-pir) có chứa plasmid hỗ trợ pRK600 đƣợc thêm vào hỗn hợp tiếp hợp gồm thể cho E.coli DH5α có chứa plasmid pUT-gfp và thể nhận

Pseudomonas flourescens. Plasmid hỗ trợ pRK600 có Mob+ Tra+. pRK600 còn có một điểm khởi đầu sao chép và điểm khởi đầu chuyển gene (mob) ColE1. ColE1 chỉ cho phép plasmid nhân lên trong E.coli chứ không nhân lên trong vi khuẩn vùng rễ.

Plasmid pRK600 đƣợc sử dụng để vận chuyển những plasmid lớn thông qua oriT, nó không tái bản lên, nhƣng sau một thời gian cho phép biểu hiện gene vận chuyển RK2 (S.Klein) chứa các yếu tố mob+tra+.

3.2.1.3 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens

Bộ mẫu Pseudomonas fluorescens đƣợc giữ trong tủ - 70oC thuộc bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, khoa Nông Học trƣờng đại học Nông Lâm. Các dòng đƣợc chọn đƣợc đem ra rã đông và tăng sinh trên môi trƣờng LB.

Hình 3.1: Cấu trúc plasmid pUT-gfp (Đỗ Thị Ngọc Hân, 2006).

30

Bảng 3.1 Đặc tính và nguồn gốc một số dòng vi khuẩn và plasmid liên quan trong thí nghiệm

Dòng và plasmid Đặc tính Nguồn

E.coli DH5α (λ-pir) Thi pro hsdR recA; chromosomal RP4; tra+; Sm/SpR

Simon và cộng sự, 1983

pRK2013 KmR; ColE1 ori; RK2-mob; RK2-tra

Figurski, D. and Helinski, D.,1979

pRK600 ColE1 replicon with RK2 transfer region, helper plasmid; CmR

Finan và cộng sự, 1986

pUTmini-Tn5 ApR; KmR; delivery plasmid for mini-Tn5

Herrero và cộng sự ,1990

pUC18Not ApR; lacZ; oriColE1; MCS flanked by NotI sites

Herrero và cộng sự ,1990

pGEMEX-2 (P11) ApR; T7 promoter; contains P11

Heim và cộng sự, 1994

pET22B ApR; lacI; f1 ori Novagen, Madison, WI pIC19H ApR ; lacZ Marsh, J.L., Erfle, M. and

Wykes, E.J. (1984) pRL427 ApR; psbA promoter J. Elhai and C.P. Wolk,

unpublished

pUTgfp Delivery plasmid for mini-Tn5::gfp; ApR; KmR; oriT(PR4); oriRK6

Tombolini và cộng sự, 1997

ApR gene kháng Ampicillin KmR gene kháng Kanamycin SmR gene kháng Streptomycin SpR gene kháng Spectinomycin

31

Một phần của tài liệu Tối ưu quy trình chuyển gene gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens (Trang 39 - 41)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(63 trang)