VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
3.2.3. Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng của môi trƣờng nuôi cấy đến tăng sinh khối tế bào soma.
soma
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 2 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại 5 mẫu cấy.
Mẫu cấy: lá, thân.
Cách thức lấy mẫu: cắt mẫu thân,lá (1-1,5cm) có sẵn trong phòng thí nghiệm, trong điều kiện vô trùng mẫu, nuôi trong môi trường nuôi cấy.
Mục đích của thí nghiệm này nhằm xác định loại mẫu cấy nào cho tỉ lệ phát sinh tế bào soma tốt nhất. Loại mẫu nào sẽ được chọn cho thí nghiệm tiếp theo. Môi trường được sử dụng cho thí nghiệm này có thành phần các chất giống với môi trường trong thí nghiệm 1.
Bảng 3.2: Loại mẫu và thành phần môi trường nuôi cấy
Nghiệm thức Mẫu nuôi cấy Thành phần môi trường
2.1 Lá MS + BA (1) + NAA (5) + CW (10%) +
Đường (30 g)
2.2 Thân
Chỉ tiêu theo dõi sau 15 ngày. Tỉ lệ tạo tế bào soma: (%) Kích thước trung bình: (mm)
3.2.3. Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng của môi trƣờng nuôi cấy đến tăng sinh khối tế bào soma. bào soma.
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 3 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần, mỗi lần gồm 5 mẫu cấy.
Mẫu cấy: tế bào soma ở thí nghịêm 1.
Mục đích của thí nghiệm này là tìm môi trường thích hợp nhất làm tăng sinh khối tế bào soma đã được nuôi cấy phát sinh ở thí nghiệm 1. Môi trường được sử dụng cho thí nghiệm này có thành phần các chất kích thích sinh trưởng giống với môi trường thí nghiệm 1, nhưng nồng độ các chất này được tăng lên.
Bảng 3.3: Thành phần môi trường nuôi cấy tăng sinh khối tế bào soma
Nghiệm thức Thành phần môi trường Khoáng BA (mg/l) Ki (mg/l) NAA (mg/l) CW (%) Đường (g) 3.1 MS 1 0 5 10 30 3.2 MS 0 0 5 10 30 3.3 MS 0 1 5 10 30
Chỉ tiêu theo dõi sau 30 ngày Khối lượng trung bình ban đầu: (g)
Khối lượng trung bình sau khi cấy truyền: (g) Khối lượng trung bình tăng sinh khối: (g)